“杜仲-当归”调控NLPR3炎症小体对骨关节炎大鼠改善作用的研究

目的:探究药对“杜仲-当归”对骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠膝组织的改善效果及对NLPR3炎症小体的调控。方法:24只雄性SD大鼠随机挑选18只采用前交叉韧带切断术(ACLT)进行OA造模,随后将大鼠分为正常组、OA模型组、杜仲-当归组和阳性药物组,每组6只,后两组分别给与“杜仲-当归”或西乐葆和奥泰灵混合液治疗8周。收集大鼠外周血,ELISA测定IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平;另取大鼠膝关节软骨组织,HE染色观察病理改变,番红-固绿染色观察软骨钙化情况并行OARSI评分,免疫组化和TUNEL染色分别检测膝关节软骨组织Caspase1、CollagenⅡ表达和软骨细胞凋亡情况,Western blot检测基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、p53、p21、NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Pro-Caspase-1蛋白表达。结果:与正常组相比,OA模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平均显著上升(P<0.01),膝关节损伤明显,OARSI评分显著升高(P<0.01),软骨细胞凋亡显著增加(P<0.01),组织Caspase1含量、MMP-13、p53、p21、NLPR3、ASC、Pro-Caspase-1蛋白表达均显著升高(P<0.01),而CollagenⅡ含量和TIMP-1蛋白表达显著降低(P<0.01)。与OA模型组相比,杜仲-当归组和阳性药物组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平显著下降(P<0.05),膝关节损伤改善,OARSI评分降低(P<0.01),软骨细胞凋亡显著减少(P<0.01),组织Caspase1含量,MMP-13、p53、NLPR3、Pro-Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05)、CollagenⅡ含量和TIMP-1蛋白表达显著增加(P<0.05),杜仲-当归组大鼠p21、ASC蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:“杜仲-当归”可改善OA大鼠软骨病变,其作用可能与介导NLPR3/ASC/Pro-Caspase-1炎性体通路,下调IL-1β及相关炎性因子水平、抑制软骨细胞凋亡有关。

当归补血汤及其活性成分通过NLRP3/ASC/caspase-1通路调控糖尿病大鼠动脉粥样硬化及网络药理学研究

目的 观察当归补血汤及其主要吸收成分通过NLRP3/ASC/caspase-1信号通路调控糖尿病大鼠动脉粥样硬化,并结合网络药理学预测其他潜在作用靶点。方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、当归补血汤组、当归补血汤吸收生物活性成分组。除正常对照组外,其他各组用链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,正常对照组给予普通饲料,其余3组给予高糖高脂饲料,喂养4周,同时给药组分别灌胃当归补血汤、吸收生物活性成分(ABCs)混合溶液,正常对照组、模型组灌胃等体积的生理盐水。采用ELISA法检测大鼠血清NF-κB、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平,Western blot法检测主动脉NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18、ASC蛋白表达,HE染色观察大鼠主动脉病理学变化。采用网络药理学预测当归补血汤治疗糖尿病、动脉粥样硬化、血管内皮炎症的核心靶点、成分及相关通路。结果 与模型组比较,当归补血汤可降低大鼠血清NF-κB、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平(P<0.05),修复主动脉组织结构损伤,抑制主动脉组织NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18、ASC蛋白表达(P<0.05,P<0.01),同时ABCs可发挥当归补血汤相似的药理作用。此外,网络药理学预测表明ABCs中阿魏酸、黄芪甲苷为核心活性成分,还可能通过PI3K-Akt、AGE-RAGE信号通路发挥作用。结论 当归补血汤及ABCs可能通过NLRP3/ASC/caspase-1炎症信号通路改善大鼠糖尿病伴动脉粥样硬化,ABCs中阿魏酸、黄芪甲苷可能为发挥作用的主要成分。

补肾化痰方对肥胖型多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢组织NLRP3/ASC2/Caspase-1炎症小体信号通路的影响

目的探讨补肾化痰方治疗肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)的可能作用机制。方法采用来曲唑联合高脂乳剂制备肥胖型PCOS模型,并将造模成功的99只SD大鼠随机分为模型组19只,二甲双胍组及补肾化痰方低、中、高剂量组各20只,另设空白组23只。补肾化痰方低、中、高剂量组分别给予补肾化痰方16.65、41.63、83.25 g/(kg·d)灌胃,二甲双胍组给予盐酸二甲双胍片300 mg/(kg·d)灌胃,模型组和空白组给予5 ml/kg蒸馏水灌胃,各组均每日1次,共灌胃21天。观察各组大鼠卵巢组织病理情况,ELISA法检测血清睾酮(T)及游离脂肪酸(FFAs),Western blotting法检测卵巢组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白2(ASC2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达水平,免疫组化染色法检测卵巢组织白细胞介素1受体(IL-1R)、核因子κB(NF-κB)阳性产物。结果与空白组比较,模型组大鼠卵巢内基本未见优势卵泡生长,血清T、FFAs,卵巢组织IL-1R、NF-κB平均光密度及Caspase-1、NLRP3、ASC2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,补肾化痰方高、中剂量组及二甲双胍组大鼠卵巢可见明显的黄体或生长卵泡,卵巢组织NLRP3、Caspase-1、ASC2蛋白表达显著下调;二甲双胍组、补肾化痰方高剂量组血清T、FFAs含量显著降低,IL-1R、NF-κB平均光密度显著降低(P<0.05或P<0.01)。补肾化痰方各剂量组及二甲双胍组Caspase-1、NLRP3、ASC2蛋白表达及IL-1R、NF-κB平均光密度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾化痰方可能通过抑制卵巢组织NLRP3/ASC2/Caspase-1炎症小体信号通路治疗肥胖型PCOS,且对该通路的调节未见明显量效关系。

延胡索丁素对大鼠心肌梗死的保护作用及机制研究

目的考察延胡索丁素对心肌梗死大鼠的保护作用,并深入探讨潜在机制.方法取40只大鼠通过永久性结扎左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,将模型大鼠随机分为模型组、延胡索丁素低剂量组、延胡索丁素高剂量组及阳性对照组.另取10只健康大鼠设为假手术组.各给药组给予相应剂量药物,假手术组与模型组给予等量生理盐水.4周后,Vevo 2100系统考察大鼠心脏功能,ELISA法检测血清中心肌损伤标志物及炎症因子水平,HE法评估心肌组织病变情况,western bloting检测心肌组织中NLPR3、ASC及Caspase-1的表达水平.结果与模型组比较,延胡索丁素可明显升高左心室射血分数(LVEF)(P<0.05),有效降低左心室收缩末期容积(LVESV)及左心室舒张末期容积(LVEDV)(P<0.01,P<0.05);延胡索丁素可有效降低血清中白介素1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)与肌红蛋白(Myo)水平(P<0.01,P<0.05),减少梗死面积(P<0.05),改善心肌细胞炎症浸润及纤维化;同时还可明显下调心肌组织中NLPR3、ASC及caspase-1的蛋白表达(P<0.01,P<0.05).结论延胡索丁素可通过调控NLPR3/ASC信号通路,缓解心肌损伤、改善心脏功能,从而对心肌梗死发挥保护作用.

恩格列净灌胃对急性心肌梗死小鼠心功能的改善作用及其机制

目的 观察钠—葡萄糖共转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂恩格列净对急性心肌梗死(AMI)小鼠心功能的改善作用,并探讨其可能的机制。方法 将34只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组11只、模型组11只和治疗组12只,模型组和治疗组采用结扎冠状动脉前降支的方法建立AMI模型,假手术组冠脉动脉前降支只穿线不结扎;治疗组建模后4 h给予恩格列净10 mg/(kg·d)灌胃治疗,假手术组及模型组给予等量0.5%羟乙基纤维素灌胃,连续7 d。采用超声心动图检查各组心功能[左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(FS)],TUNEL染色检测心肌组织细胞凋亡率,ELISA法检测血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、C反应蛋白(CRP)水平,Western blotting法检测心肌组织NLRP3、ASC、Caspase-1、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18表达。结果 各组小鼠LVIDd比较P>0.05。与假手术组比较,治疗组和模型组小鼠LVIDs均升高(P均<0.05)。与假手术组比较,治疗组和模型组小鼠LVEF、FS均降低,血清NLRP3、IL-1β、IL-18、CRP水平均升高,心肌组织NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达均升高,且模型组变化更明显(P均<0.05)。模型组小鼠心肌组织细胞凋亡率明显高于假手术组和治疗组(P均<0.05),假手术组和治疗组比较无统计学差异(P>0.05)。假手术组和模型组血清Caspase-1水平及各组心肌组织Caspase-1表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 恩格列净可改善AMI小鼠的心功能、减少其心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路、减轻炎症反应有关。

β-细辛醚对APP/PS1小鼠神经炎症的影响及机制研究

目的探讨β-细辛醚对APP/PS1小鼠神经炎症的影响及分子机制。方法将6月龄APP/PS1小鼠20只随机分为模型组(model)与β-细辛醚组(40mg/kg),每组10只;另取同龄C57BL/6小鼠作为对照组(control)。Morris水迷宫检测各组小鼠的学习与记忆能力;免疫荧光染色检测各组小鼠海马区小胶质细胞标记物Iba-1表达和Aβ_(1-42)沉积;ELISA检测小鼠脑内IL-6、IL-1β及TNF-α水平;Western blot检测脑内NLRP3、ASC及Caspase-1蛋白表达。结果β-细辛醚能够明显缩短小鼠逃避潜伏期,延长在原目标象限停留时间,明显增加穿越平台次数;降低小鼠海马区Iba-1阳性细胞数量;降低脑组织中IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平;抑制海马区Aβ_(1-42)沉积;降低小鼠脑组织中NLRP3、ASC及Caspase-1蛋白表达。结论β-细辛醚能够通过抑制APP/PS1小鼠NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路活性来抑制小胶质细胞活化导致的神经炎症。