猪NLRP3基因Real-time PCR检测方法的建立及应用

根据NCBI NLRP3 cds(NM-001256770)序列设计1对特异性引物,构建标准品质粒pMD18T-NLRP3-189。通过反应条件优化、稳定性、敏感性等试验,成功建立了NLRP3的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,用该方法定量检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)感染后的猪肺组织中NLRP3表达水平。最佳引物浓度为0.15μmol/L,建立的标准曲线方程为y=-3.5196x+36.968,E值为0.96,最低检测量为84个拷贝,熔解曲线有单一峰,批内变异系数CV为0.067%~0.184%,批间变异系数为0.221%~0.594%,重复性好。该方法检测仔猪在感染Mhp后肺组织中的NLRP3 mRNA表达水平,感染组与健康组相比差异显著(P<0.01),NLRP3表达水平明显增高,在感染后14 d可达到高峰,平均mRNA拷贝数达18000左右,可持续42 d。表明该检测方法稳定性良好,精确度高,特异性强,为进一步研究猪炎症小体NLRP3的激活及其相关炎症反应机制提供了技术支持。

NLRP3基因rs10754558、rs3806268位点单核苷酸多态性与新疆地区汉族男性原发性痛风的相关性研究

目的探讨NLRP3基因rs10754558、rs3806268位点单核苷酸多态性与新疆地区汉族男性原发性痛风的相关性。方法收集新疆医科大学第一附属医院男性痛风患者103例(病例组)和同期健康男性体检者103例(对照组),对两组人群生化指标进行检测。采用PCR技术检测NLRP3基因rs10754558、rs3806268位点的基因型,所有数据均采用SPSS22.0进行数据分析。结果病例组体质量指数(BMI)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FBG)、血尿酸(SUA)、血肌酐(CREA)水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组肥胖和高血糖发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,肥胖和高血糖是痛风的发生的影响因素(P<0.05)。两组研究对象rs10754558位点的基因型分布之间有所不同,且基因型分布之间的差异有统计学意义(χ~2=44.183,P<0.001)。rs10754558、rs3806268基因多态性与临床指标无相关性(P>0.05)。结论 NLRP3基因rs10754558位点多态性与痛风有一定的关联,但尚不能认为rs3806268位点多态性与该人群痛风有关,可进一步扩大样本量加以论证。

痛风患者NLRP3基因多态性观察

目的观察痛风患者的NLRP3基因多态性,并分析其与痛风易感性的相关性。方法267例痛风患者及448例健康对照者,采集静脉血,PCR法检测NLRP3基因。结果痛风患者NLRP3基因rs3806268位点基因型为CC、CT、TT的分别是177、81、9例,等位基因C、T的频率分别为81.5%(435/534)、18.5%(99/534);健康者分别为289、146、13例,等位基因频率分别为80.8%(724/896)、19.2%(172/896)。痛风患者NLRP3基因rs3806268位点基因型为GG、GA、AA的分别是59、118、90例,等位基因G、A频率分别为44.2%(236/534)、55.8%(298/534);健康者分别为104、238、106例,等位基因频率分别为49.8%(446/896)、50.2%(450/896)。痛风患者NLRP3基因rs10754558位点基因型为GG、GC、CC的分别是48、135、84例,等位基因G、C频率分别为43.3%(231/534)、56.7%(303/534);健康者分别为95、234、119例,等位基因频率分别为47.3%(424/896)、52.7%(472/896),痛风及健康者NLRP3基因rs3806268位点基因型和等位基因频率间差异有统计学意义(P均<0.05)。rs3806268位点在加性模型中AA基因型相对于GG基因型以及在隐性模型中AA基因型相对于GG+GA基因型均表现为痛风的保护因素,能降低痛风的发病风险(OR分别为0.58、0.61,95%CI分别为0.41~0.84、0.44~0.85)。结论痛风患者NLRP3基因rs3806268位点基因型以CC为主,等位基因C频率较高。NLRP3基因rs3806268位点基因多态性与痛风易感性有关,rs3806268位点突变可能是痛风的保护性因素。

NLRP3基因多态性与中国北方东部汉族人群帕金森病相关性研究

目的探讨Nod样受体家族蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)rs4612666及rs7525979位点多态性与中国北方东部汉族人群帕金森病(Parkinson disease,PD)发病风险的相关性。方法采用病例对照研究,共招募400例PD患者(PD组)及400例健康对照者(对照组),应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法鉴定NLRP3基因SNPs位点rs4612666和rs7525979。结果PD组rs4612666等位基因与对照组具有统计学差异,C等位基因频率低于对照组,降低发病风险(OR=0.794,95%CI:0.653~0.967,P=0.021),隐性遗传模型CC/TT+CT分布在PD组与对照组之间差异具有统计学意义(OR=0.667,95%CI:0.481~0.925,P=0.015)。亚组分析中,与对照组比较,女性PD组与早发型PD组等位基因分布差异具有统计学意义(P=0.003,P=0.018)。rs7525979位点的基因型分布和等位基因频率在PD组与对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。结论在中国北方东部汉族人群中,NLRP3 rs4612666的C等位基因是PD的保护性因素。

miR-22靶向抑制NLRP3基因对冠心病内皮细胞炎症损伤的保护作用

目的探讨miR-22靶向NLRP3基因对冠心病内皮细胞炎症损伤的影响。方法构建动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,分离大鼠原代冠状动脉内皮细胞,培养并鉴定,用同型半胱氨酸(HCY)对细胞共孵育24 h,进行冠心病应激,细胞分组。双荧光素酶报告基因验证miR-22和NLRP3的靶向关系。实时荧光定量PCR和Western blot检测心肌组织和各组细胞中miR-22和NLRP3、caspase-1水平。MTT法检测细胞活力。Hochest 33258染色检验细胞凋亡。ELISA检测白介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和IL-18炎症因子表达。结果与正常组大鼠相比,AS组大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、Ca2+水平均明显升高(P<0.01);AS组大鼠心肌组织中miR-22水平显著降低,NLRP3、caspase-1 mRNA及NLRP3、caspase-1蛋白水平显著上调(P<0.05)。NLRP3证实为miR-22的靶基因。与空白对照组细胞相比,miR-22 mimic组的NLRP3、caspase-1 mRNA及NLRP3、caspase-1蛋白水平下降,细胞活力增强,细胞凋亡率下降,IL-1β、IL-6和IL-18炎症因子表达水平下调,IL-10表达水平上调(P<0.05);而miR-22 inhibitor组的NLRP3、caspase-1 mRNA及NLRP3、caspase-1蛋白水平上调,细胞活力降低,细胞凋亡率上升,IL-1β、IL-6和IL-18炎症因子表达水平上升,IL-10表达水平下降(P<0.05)。结论miR-22通过靶向抑制NLRP3基因,减少冠心病大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡及下调促炎症因子的表达,发挥对大鼠心肌微血管内皮细胞的保护作用。

NLRP3基因单核苷酸多态性与上海地区寻常痤疮患病率的关系分析

目的：探讨NLRP3基因单核苷酸多态性（SNP）与上海地区寻常痤疮患病率的相关性。方法：收集145例中、重度痤疮患者及158例健康人群的临床资料和血液标本，TaqMan探针法对rs10754558和rs4612666位点进行分型．ABI7900扫描分型结果，荧光定量PCR检测NLRP3基因表达水平。结果：中、重度痤疮患者rs10754558位点CC、CG、GG基因型频率分别为0．168、0．476和0．338，对照组为0．285、0．487和0．228，G等位基因的分布频率差异存在统计学意义（P=0．010．OR=1．522．95％CI=1．075-2．098）。痤疮患者与健康人群rs4612666位点基因型差异无统计学意义（P=0．708，OR=1．065，95％CI=0．767-1．479）。结论：NLRP3基因rs10754558位点与上海地区痤疮患病率存在相关性，而rs4612666位点与其无相关性。

禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析

旨在分析禽腺病毒血清4型(FAdV-4)感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平,本研究设计鸡NLRP3特异性引物,利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体,制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化,成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法对致病性FAdV-4感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平进行了分析。结果显示,所设计的NLRP3引物可特异性扩增鸡NLRP3基因,建立的实时荧光定量PCR对鸡NLRP3标准质粒的扩增曲线良好,标准品的拷贝数与Cq值呈现良好的线性关系。与对照组相比,NLRP3分子在FAdV-4感染鸡肝和脾中的转录水平极显著高于对照组(P<0.001),在盲肠扁桃体和法氏囊的表达显著高于对照组(P<0.01)。本研究所建立的鸡NLRP3基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR可以检测FAdV-4感染鸡不同组织中NLRP3的转录水平;致病性FAdV-4感染所造成的组织炎症损伤与NLRP3分子密切相关。

miR-22靶向NLRP3基因对冠心病大鼠内皮细胞炎症损伤的影响研究

目的研究miR-22靶向NLRP3基因对冠心病大鼠内皮细胞炎症损伤的影响。方法选取22只健康SD大鼠进行研究,随机分成研究组和对照组,对照组大鼠不进行特殊处理,研究组构建大鼠动脉粥样硬化(AS)模型,对比两组大鼠血钙和血脂水平、大鼠心肌组织的miR-22和NLRP3、caspase-1mRNA表达水平,以及心肌组织NLRP3、caspase-1蛋白表达水平;在经过细胞转染分组后,分成空白组(未转染)、阴性组、miR-22mimic组、miR-22inhibitor组和miR-22inhibitor+si NLRP3组,对比几组的miR-22和NLRP3、caspase-1mRNA表达水平,NLRP3、caspase-1蛋白表达水平,以及炎症因子表达水平。结果研究组的TC、TG、LDLC和Ca2+水平均明显高于对照组(P<0.05);研究组的miR-22水平明显低于对照组,NLRP3、caspase-1mRNA表达水平以及NLRP3、caspase-1蛋白表达水平均明显高于对照组(P<0.05);miR-22mimic组的miR-22明显高于空白组,NLRP3、caspase-1mRNA表达显著低于空白组(P<0.05),miR-22inhibitor组和空白组的对比结果与之相反(P<0.05);miR-22mimic组的NLRP3、caspase-1蛋白表达均明显低于空白组(P<0.05),miR-22inhibitor组明显高于空白组(P<0.05);miR-22mimic组的IL-1β、IL-6和IL-18水平明显低于空白组和阴性组,IL-10明显高于空白组与阴性组(P<0.05),miR-22inhibitor组与空白组及阴性组的炎症因子水平对比结果与之相反(P<0.05)。结论 miR-22能够利用显著的NLRP3基因靶向抑制效果,改善冠心病大鼠的内皮细胞凋亡状况,且能够促进炎症因子水平的下降,具有显著的内皮细胞保护作用。

翘嘴鳜雄性特异NLRP3基因cDNA的克隆及表达分析

NLRP3基因是能够识别PAMPs和胞内危险信号的1种重要的炎性小体,参与机体对体内外病原微生物的防御和维持自身稳态。首次发现翘嘴鳜存在1个雄性特异的NLRP3基因。通过设计基因特异扩增引物,并在22条雌鱼和22条雄鱼中进行PCR扩增,证实了该基因只在翘嘴鳜雄鱼中存在。为了解该NLRP3基因的潜在功能,成功克隆得到该基因的全长蛋白编码序列,并通过序列比对和系统发育分析,初步证明该基因具有NACHT、LRR和PYD等多个关键结构域,在鲈形目鱼类中具有较高的保守性。另外,通过荧光定量分析的方法研究了NLRP3基因在雄性翘嘴鳜不同组织以及在不同时期性腺中的表达差异,发现翘嘴鳜NLRP3基因在肝脏、胃和肠等组织有较高的表达,且在翘嘴鳜雄性性别分化早期有显著高表达,在性别分化后几乎不表达。

NLRP3基因多态性与汉族男性原发性痛风的关系

目的本研究探讨NLRP3基因多态性与汉族男性痛风患者之间的相关性。方法采用病例对照研究,参照痛风的诊断标准从新疆医科大学附属医院各门诊和住院部收集290例汉族男性原发性痛风患者,同时从体检中心收集302例汉族男性健康对照者,并且对两组NLRP3基因位点进行基因分型,建立单因素Logistic回归模型,分析痛风发病相关危险因素。结果NLRP3基因对照组3个SNP位点在该地区汉族人群满足Hardy-Weinberg平衡性检验(P>0.05),该地区人群中rs7525979位点痛风组基因型频率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论痛风的发病与代谢综合征各组分密切相关,单因素Logistic回归模型进行分析显示,吸烟、高血糖、高尿酸能够增加痛风发病的风险(P<0.05)。单倍型分析发现CTT单倍型痛风组的频率高于对照组可能是痛风发生的危险因素(P<0.05)。

小鼠NLRP3基因腺病毒干扰载体的构建及功能鉴定

目的构建针对小鼠NLRP3基因的腺病毒干扰载体(Ad-NLRP3-shRNA),并在Min6和RAW264.7细胞中验证其基因沉默效率。方法针对小鼠NLRP3基因设计、合成3对NLRP3shRNA1-3干扰序列,重组至pHBAd-U6-CMV质粒载体。在HEK293T细胞内包装Ad-NLRP3-shRNA。感染Min6和RAW264.7细胞后,采用实时定量-聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测NLRP3基因表达。结果Ad-NLRP3-shRNA1-3在Min6和RAW264.7细胞的干扰效率分别达到44.38%、46.61%和82.83%以及47.23%、49.59%和78.64%。结论成功构建出Ad-NLRP3-shRNA载体,为研究NLRP3基因的功能提供有效工具。

外周血A20基因、NLRP3基因评价生物制剂治疗幼年特发性关节炎疗效的临床价值

目的探究外周血A20基因、NLRP3基因评价生物制剂治疗幼年特发性关节炎疗效的临床价值。方法选择2019年3月-2020年6月华中科技大学协和深圳医院收治的30例幼年特发性关节炎患儿设为病例组,另选同期儿童保健门诊30例无任何疾病的健康儿童设为健康组,比较两组外周血A20基因、NLRP3基因表达水平。同时对病例组患儿予以生物制剂治疗,比较治疗前后患者JADAS27评分、外周血A20基因、NLRP3基因表达水平的差异。并根据治疗效果将病例组患儿分为治疗有效亚组与治疗无效亚组,比较两亚组外周血A20基因、NLRP3基因表达水平。结果病例组患儿治疗前的外周血A20基因表达水平显著低于健康组,NLRP3基因表达高于健康组(P<0.05)。病例组患儿治疗后的外周血A20、NLRP3基因、JADAS27评分与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05)。治疗有效亚组的外周血A20高于治疗无效亚组,NLRP3基因低于治疗无效亚组(P<0.05)。经Pearson相关系数分析,JADAS27评分与外周血A20表达呈负相关,与NLRP3基因呈正相关(P<0.05)。结论应用生物制剂治疗幼年特发性关节炎后,进行外周血A20基因、NLRP3基因检测有助于监测幼年特发性关节炎病情活动及疗效。

NLRP3基因单核苷酸多态性与代谢综合征的关系研究

目的探讨NLRP3基因单核苷酸多态性rsi0754558、rs4612666与代谢综合征（metabolicsyndrome，MetS）的相关性。方法应用病例一对照研究，收集410例MetS患者和475名正常对照，以限制性片段长度多态性一PCR法检测rsl0754558、rs4612666位点的基因型。结果rsl0754558的G等位基因和GG基因型频率在MetS组中显著高于正常对照组（P均〈O．000）。回归分析示rsl0754558GG基因型和G等位基因为MetS的风险因素（GG基因型：OR=2．223，95％CI：1．296～6．924，P=3．4×10^-4；G等位基因：OR=1．440，95％CI：1．189～4．063，P=2．8×10。）。rsl0754558GG基因型者胰岛素抵抗、内脏脂肪指数较高（P〈O．05）。rs4612666等位基因和基因型频率在MetS组和正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NLRP3基因rsl0754558的G等位基因及GG基因型可增加MetS的患病风险。

猪NLRP3基因克隆及其在DF-1细胞的表达

NLRP3蛋白作为NLRP3炎性小体的主要组成蛋白之一,在机体对抗病原微生物和炎症反应中起着重要作用。为了深入研究猪的NLRP3蛋白在炎性疾病发生过程中的作用机制,采用PCR的方法扩增了长白猪NLRP3基因,并对其序列和编码蛋白的结构进行了分析。构建了pIRES2-EGFP-NLRP3真核表达载体,并转染至DF-1细胞中进行表达。结果显示,该基因表现出种属内保守性和种属间差异性,编码蛋白由1 036个氨基酸构成,存在4个潜在跨膜区,分别是第401~419,第721~739,第775~795和第889~910位氨基酸,不含信号肽。单层细胞免疫化学检测结果显示,重组质粒pIRES2-EGFP-NLRP3成功转染并在细胞中表达。本研究为深入探讨炎症小体在猪炎症性疾病的作用机制提供了基础数据。

NLRP3基因Q705K多态性与成人斯蒂尔病之间的相关性研究

目的 :检测成人斯蒂尔病(adult-onset Still′s disease,AOSD)患者g DNA内的NIRP3基因Q705K多态性,并探讨其基因多态性与AOSD发病间的相关性。方法:收集49例AOSD患者及94名正常人的g DNA,对目的 NLRP3片段进行扩增,检测其碱基序列,同时与PUBMED已解码的人源NLRP3进行比对。结果:本研究AOSD患者及正常人中未发现NLRP3基因Q705K突变位点,在比对中发现的A242A(rs3806268)和T219T(rs7525979)位点存在基因多态性,但与亚洲人群基因型频率进行比对后,发现其与AOSD的发病间无统计学相关性。结论:NLRP3基因Q705K多态性与AOSD的发生不相关。

山羊NLRP3基因的克隆及其在DF-1细胞中的表达

为了解山羊NLRP3基因及其编码蛋白的生物学信息,采用RT-PCR扩增了海南黑山羊NLRP3基因并进行了序列及其编码蛋白的结构分析,构建了pIRES2-EGFP-NLRP3真核表达载体,并将其转染至DF-1细胞中进行了表达。结果表明,NLRP3基因在物种内的同源性高,种间同源性低,编码的蛋白由1 031个氨基酸组成,存在3个潜在跨膜区,分别为第401~419、435~453和884~904位氨基酸,不含信号肽;辣根过氧化物酶单层细胞免疫化学检测证实,构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-NLRP3在DF-1细胞中成功表达。本研究结果为建立NLRP3专性表达细胞系及深入研究NLRP3在山羊抗感染免疫的机制奠定了基础。

中国汉族人群NLRP3基因多态性与结肠癌的相关性研究

该实验研究NLRP3基因多态性与中国汉族人群结肠癌之间的相关性。采用TaqMan检测法对中国汉族人群208例结肠癌患者和203名正常对照NLRP3的3个位点(rs4925648、rs10754558、rs10925019)进行关联分析,并使用SPSS软件进行单核苷酸多态性分析,比较病例组和对照组等位基因频率、基因型频率及单倍型的差异。结果发现,NLRP3上三个位点基因频率、基因型频率两组间差异不明显(P>0.05)。rs4925648与rs10925019的LD分析其D’值较大(D’=0.798)。但进一步对两位点的单倍型分析发现其各种组合均无统计学差异。该研究结果提示,NLRP3基因的三个位点与中国汉族人群结肠癌的发生相关性无统计学意义。

NLRP3水平与冠心病风险关联的孟德尔随机化研究

【目的】采用孟德尔随机化法(MR)推断炎症小体NLRP3水平与冠心病发生风险之间的关联。【方法】依托东南大学中大医院心血管内科,对经冠状动脉造影确诊的321个冠心病病例和293个正常对照的人群,进行流行病学调查与血样标本采集。采用ELISA方法测定血清NLRP3水平;采用RFLP-PCR的基因分型方法,检测研究对象的NLRP3基因rs10754558(C/G)的多态性;以NLRP3基因rs10754558(C/G)作为工具变量,结合血清学相关表型NLRP3水平,采用线性回归分析和Logistic回归分析的方法分别构建基因型-表型、基因型-疾病结局之间的关联,进而使用MR方法推断相关细胞因子(表型)与CAD发生之间的因果关联。【结果】NLRP3基因变异rs10754558(C/G)与冠心病风险间以及NLRP3水平之间的关联均具有统计学意义,回归系数β_(ZY)=0.45,β_(ZX)=2.34,进而通过孟德尔随机化法推断出的NLRP3水平与冠心病风险的关联回归系数β_(XY)=β_(ZY)/β_(ZX)=0.45/2.34=0.19,表明NLRP3水平每增加1 ng/mL水平,冠心病的风险增加20.9%(OR=e^(0.19)=1.209)。通过传统病例对照研究设计直接获得的NLRP3水平与冠心病风险的关联回归系数β_(XY)=0.03,表明NLRP3每升高1 ng/mL,个体发生CAD的风险增加了3.1%(OR=e^(0.03)=1.031,95%CI=1.003-1.058),相比MR方法推断的关联强度较小。【结论】通过孟德尔随机化法验证了炎症小体NLRP3水平与冠心病风险之间的关联,比传统关联研究更接近真实因果关联。

ELOVL6基因基于Nod样受体蛋白3通路与大动脉粥样硬化性脑梗死风险的研究

目的探讨超长链脂肪酸延伸酶家族成员6(elongase of very long chain fatty acids family member 6,ELOVL6)基因基于Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体通路参与大动脉粥样硬化性脑卒中(large artery atherosclerosis stroke,LAA)的发病机制。方法以LAA患者为研究对象,同期体检的年龄、性别匹配的健康人群为对照,采用小干扰RNA技术,通过实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法研究目标人群外周血ELOVL6、NLRP3基因的mRNA和蛋白表达量以及白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症细胞因子蛋白定量,以分析ELOVL6基因参与LAA发病的可能机制。结果在LAA患者和健康人群中,ELOVL6基因、NLRP3基因mRNA水平(ELOVL6:0.0011±0.0003 vs.0.0005±0.0003,P<0.05;NLRP3:0.049±0.015 vs.0.003±0.002,P<0.05)和蛋白定量(ELOVL6:0.801±0.347 vs.0.451±0.193,P<0.05;NLRP3:0.897±0.346 vs.0.406±0.339,P<0.05),LAA患者均较对照人群增加;IL-6和TNF-α两个炎性指标蛋白表达量(IL-6:1.087±0.178 vs.0.507±0.094,P<0.05;TNF-α:0.600±0.092 vs.0.196±0.044,P<0.05)高于对照人群。进一步分析发现,LAA患者NLRP3基因与IL-1β(r=0.937,P<0.001)、IL-6(r=0.723,P=0.018)和TNF-α(r=0.672,P=0.033)蛋白表达具有正相关性,ELOVL6基因与NLRP3基因蛋白表达具有正相关性(r=0.785,P=0.007),小干扰RNA干扰ELOVL6基因会引起NLRP3基因mRNA(0.002±0.001 vs.0.049±0.015,P=0.010)和蛋白(0.399±0.081 vs.0.897±0.346,P=0.002)表达水平降低。结论ELOVL6基因可能通过ELOVL6-NLRP3-炎症因子信号通路参与了LAA发病。

NLRP3在小鼠氧诱导视网膜新生血管中的作用

目的本研究旨在于小鼠氧诱导视网膜新生血管病变模型中探讨NLRP3-VEGF信号通路在视网膜新生血管形成中的作用.方法用NLRP3基因敲除(NLRP3^(-/-))小鼠及对照的同种系C57BL/6J小鼠建立氧诱导视网膜新生血管病变模型(OIR).分别在P12、P17、P21天时取材,通过视网膜荧光灌注铺片,观察新生血管情况.选取建立OIR模型的正常C57BL/6J小鼠在P12、P17、P21天时取材,进行视网膜荧光灌注铺片,与OIR模型小鼠进行对比分析,验证OIR模型建立成功.两组OIR小鼠P17时取材,通过RT-PCR检测VEGF的RNA水平变化,评价NLRP3缺失对VEGF表达的调控作用.结果视网膜荧光灌注铺片发现,在正常C57BL/6J未建立OIR模型时,视网膜未出现无灌注区和新生血管,说明OIR模型建立成功.在P12、P17和P21,与C57BL/6J的OIR小鼠相比,在NLRP3^(-/-)OIR小鼠中,新生血管的范围明显缩小,无灌注区减少,正常血管相对增多.P17时,与正常OIR小鼠相比,NLRP3^(-/-)OIR的VEGF表达水平显著下降.结论通过对OIR小鼠视网膜新生血管病变进行研究,发现NLRP3参与调控VEGF的表达,影响视网膜新生血管的形成.本研究提出一条新的调控视网膜新生血管形成的通路,为视网膜血管损伤及新生血管形成的病理机制研究和治疗提供了新的思路和靶点.