短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NMDA受体亚单位1mRNA的表达变化

目的 观察短暂性前脑缺血后大鼠海马各区N 甲基 D 天门冬氨酸受体 (NR) 1mRNA的表达变化。方法 采用大鼠前脑缺血 15min再灌注 0 5h～ 7d动物模型和原位杂交、图像分析等技术。 结果 缺血后 ,海马CA1区NR1mRNA的表达呈明显上升趋势 ,至 2 4h达高峰 ;然后表达开始回落 ,至缺血后 7d降至低谷。在CA3区 ,NR1mRNA的表达变化与CA1区类似 ,但变化幅度明显减小。在齿状回 ,缺血后 0 5h～ 72h ,NR1mRNA的表达未见显著性变化 ;缺血后 7d ,表达亦显著降低。 结论 短暂性前脑缺血后 ,大鼠海马各区RN1mRNA的表达变化不同 ,这种不同可能与海马的选择性易损现象和迟发性细胞死亡有关。

短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NMDA受体亚单位NR2A和NR2B mRNA的表达变化

应用原位杂交组织化学和图像处理与分析的方法 ,观察短暂性前脑缺血 (15 m in)再灌注 (0 .5 h～ 7d)大鼠海马各区NR2 A和 NR2 B m RNA的表达变化 ,探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果发现 ,缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m RNA在海马各区呈现出一种相对一致的表达。在海马 CA1 区 ,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达分别在缺血再灌 6h和 12 h降至低谷 (P<0 .0 5 ) ,然后表达开始回升 ,在缺血再灌 48h都升至高峰 (P<0 .0 5 ) ,之后表达再次下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 ) ;在海马 CA3区 ,二者的表达变化规律与 CA1 区相似 ,不同的是表达变化的幅度明显减小。在齿状回 ,缺血后 0 .5 h～ 72 h,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达未见显著性变化 ,72 h后表达开始下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 )。以上结果提示 ,短暂性前脑缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m R-NA在大鼠海马各区表达变化的模式不同 。

生后早期大鼠海马NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达变化

运用免疫组织化学反应和图象分析处理技术研究生后 1d、4d、1周、2周、3周、4周、5周、6周的 SD大鼠海马结构中NMDA受体亚单位 NR1、NR2 A、NR2 B三种蛋白质的表达变化规律。结果表明 ,生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体中均有 NR1、NR2 A、NR2 B的表达 ,NR2 B还在锥体细胞的顶树突中有较强表达。 NR1与 NR2 B的生后表达变化模式相似 ,在生后 1d和 4d,两者在 CA3区的表达均高于 CA1 区 ;生后 1周后两者在 CA1 区的表达则高于 CA3区 ;到生后 2～ 3周其表达达到峰值。而 NR2 A却与此不同 ,生后 1d、4d时其在海马结构各区的表达较高 ,随发育时间延长表达逐渐下降 ,大约在生后 4周降至谷底。整个发育过程中 ,NR1在海马结构各区的表达始终高于 NR2 A和 NR2 B的表达。这些结果提示 ,生后早期大鼠海马结构 NR1、NR2 A、NR2 B的表达具有发育性时空差异和亚单位差异 ,这种差异可能与发育早期海马学习功能的特异性以及海马各区对缺血敏感性不同有关。

前脑缺血再灌流后大鼠海马NMDA受体亚单位NR2A和NR2B蛋白质表达的变化

用免疫组织化学和图像处理方法 ,观察分析了大鼠前脑缺血 15 min后再灌流 2 h～ 7d的海马结构各区域 NMDA受体亚单位 NR2 A和 NR2 B的表达变化规律及其差异 ,藉以探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果显示 :( 1) NR2 A在 CA1 区和CA3 区的表达于再灌早期表现为小幅度下降 ( P<0 .0 5 ) ,此趋势在 CA3 区可以逆转 ;但在 CA1 区逐渐加剧 ,第 7d时降至 2 1% ,NR2 A在齿状回的表达几无改变 ;( 2 )与 NR2 A不同 ,再灌后 2 h,NR2 B在 CA1 区的表达即较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ,并持续到再灌后 2 4h,之后转而急剧下降 ,至第 7d仅余 11% ;在 CA3 区及齿状回 ,再灌后 6～ 48h,NR2 B的表达也较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ;在再灌后 72 h则恢复至对照组水平。结果提示 ,缺血性脑损伤后 NR2 A和 NR2 B表达变化的不同可能是造成 CA1 区。

缺氧对大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位磷酸化的影响

目的观察缺氧模型大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化。方法成年大鼠置于模拟海拔5500m高度的低压氧舱内,每天缺氧8h,分别缺氧3、7、14d和21d。采用免疫组化、Western blot+免疫共沉淀方法检测皮层、海马NR1及其酪氨酸磷酸化的变化。结果免疫组化显示缺氧皮层、海马NR1表达都明显高于对照组(P<0.01)。Western blot检测进一步证明NR1的表达显著高于对照组(P<0.01),且随着缺氧时间的延长而增加。缺氧各组酪氨酸磷酸化水平亦显著高于对照组(P<0.01),缺氧14d后酪氨酸磷酸化达到最高峰,而后开始下降,21d时仍显著高于对照组(P<0.01)。结论高原缺氧条件下大鼠皮层、海马NMDA受体NR1亚单位表达及酪氨酸磷酸化水平显著增加,酪氨酸磷酸化的变化可能是影响NMDA受体功能的主要原因。

NMDA受体亚单位在海马脑片和在体发育海马结构中表达变化的比较

目的:对比长期培养大鼠海马脑片与在体生后发育海马结构中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR1、NR2A和NR2B表达变化的异同,为利用海马脑片研究NMDA受体亚单位在生理和病理状态中的作用提供资料。方法:免疫组织化学染色、海马脑片培养技术及图像分析。结果:NR1、NR2B在海马脑片各区和生后大鼠海马结构各区表达模式相似,均呈“先升后降”的趋势,但升降幅度不同;NR2A在海马脑片各区是“先升、后降”的趋势,在生后海马结构各区则呈现“先降后升”的模式。NR1、NR2A、NR2B在脑片和在体发育海马的相似期间,在CA1、CA3、PG区表达均无显著性差异。结论:P3w/C2w时NR1和NR2B在海马脑片各区的表达强度,和其在生后大鼠海马结构中的表达较相似。

NMDA受体亚单位NR2B拮抗剂和神经退行性疾病

NMDA受体过度激活在多种神经退行性疾病的发生发展过程中发挥着重要作用。虽然NMDA受体拮抗剂在动物模型取得了明显的治疗效果,但严重的副反应限制了这类化合物的临床应用;而NMDA受体NR2B亚单位分布相对集中,选择性NR2B拮抗剂有望成为更安全、有效、副作用低的一类新型药物。该文就近年来国内外NR2B拮抗剂在神经退行性疾病中的研究进展作一综述。

大鼠听皮质NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄-依赖性表达

应用原位杂交技术 ,研究了大鼠生后发育过程中 ,听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄 依赖性的表达变化。特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示 ,NR2B亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后即有高水平表达 ,之后 ,随着天龄增长逐渐递减 ,在出生后 14d出现一过性表达高峰 ,14～ 2 1d时表达水平急剧降低(>5 0 .0 % ) ,2 1d后保持低水平表达至成年。

老年癫痫大鼠海马NMDA受体亚单位1mRNA表达的研究

目的 研究老年癫痫大鼠海马 NMDA受体亚单位 1 (NMDAR1 ) m RNA表达的变化 ,为进一步探明癫痫发病及损伤的分子生物学机制奠定基础。方法 采用在立体定位仪将海人酸注射至老年大鼠杏仁核制备癫痫模型。将老年大鼠随机分为正常对照组 ,假手术组及致癫痫组 ,分别于不同时间取材 ,进行脑组织 NMDAR1 m RNA原位杂交检测。结果 正常海马各区均有极少量的 NMDAR1 m RNA阳性细胞分布 ;致癫痫组NMDAR1 m RNA水平显著高于正常对照组及假手术组 (P<0 .0 1 )。结论 大鼠海马各区都存在着 NMDAR1 m RNA不同程度的表达 ,癫痫后老年大鼠海马 NMDAR1 m RNA的表达水平上调。

NMDA受体亚单位NR2B的结构、功能特性及其表达与调控

NMDA受体是兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)的特异性受体,属配体门控离子通道,是由不同的亚单位组成.现已发现,NMDA受体至少存在7个亚单位(NR1,NR2A-D,NR3A-B),其中NR2B在7个亚单位中扮演非常重要的角色.近年来对NR2B研究表明,其在调控神经元突触的可塑性、学习与记忆以及治疗精神紊乱方面具有重要的意义.对近期有关NR2B亚单位的结构、功能特性及其表达与调控的研究进展做一综述.

大鼠海马脑片长期培养中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达变化

目的 研究在长期培养大鼠海马脑片各区中N -甲基 -D -门冬氨酸 (N -methyl-D -aspartate,NMDA)受体亚单位NR2A、NR2B表达的变化规律。方法 4 0 0 μm厚大鼠海马脑片 ,体外培养 1、2、3、4、5周 ,再作 2 0 μm厚冰冻切片 ,行NR2A、NR2B免疫组织化学反应和图像分析。结果 NR2A、NR2B在培养各周海马脑片各区锥体细胞和颗粒细胞胞体均有表达 ,NR2B还在CA1区锥体细胞顶树突明显着色。 1周时 ,NR2A的表达较弱 ;4周时升至高峰。在CA3区 ,NR2B的表达 1周时即达高峰 ;但在CA1区其表达至 3周时始达高峰。结论 长期培养大鼠海马脑片各区中NR2A、NR2B的表达有时空变化 ,且二者的表达模式不同 。

离体培养神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2B的表达

目的研究离体培养的大鼠神经干细胞（NSCs）中N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B的表达。方法从孕18～19天胎鼠海马中分离、培养、传代、鉴定NSCs，用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹检测传代1次NSCs中NMDA受体亚单位NR2B的表达。结果源自孕18～19天胎鼠海马的NSCs，即可以表达NMDA受体亚单位NR2B。结论体外培养的NSCs能表达NMDA受体亚单位NR2B。

NMDA受体亚单位2A在大鼠海马缺血/再灌注损伤中的作用

目的观察NMDA受体亚单位2A(NR2A)特异性反义寡核苷酸阻断大鼠海马CA1区NR2A表达后在缺血性脑损伤中产生的变化,以揭示NR2A在缺血性脑损伤中的作用。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和缺血/再灌注组。分别经反义寡核苷酸、正义寡核苷酸、生理盐水对照和空白对照预处理后,以四血管阻断法建立短暂性前脑缺血(15min)/再灌注(24h和48h)动物模型。在确定的时间内进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行原位杂交染色、TUNEL染色和焦油紫染色。结果缺血/再灌注早期(24h)大鼠海马CA1区NR2AmRNA的表达水平显著增高(P<0.05)。经反义寡核苷酸预处理后,大鼠海马CA1区NR2AmRNA的表达水平显著降低(P<0.05);同时TUNEL染色显示,在缺血/再灌注24h和48h凋亡阳性细胞的数量也明显降低(P<0.05)。结论短暂性前脑缺血后,NR2AmRNA的表达水平与细胞凋亡在时间上和空间上具有一致性,提示NR2A参与了脑缺血/再灌注诱导的细胞凋亡过程。

异氟醚对大鼠不同脑区NMDA受体功能亚单位磷酸化的影响

目的 探讨异氟醚对大鼠不同脑区NMDA受体 (NR)的功能亚单位NR1磷酸化的影响 ,揭示吸入麻醉药抑制NR开放的机理。方法 SD大鼠 2 0只 ,随机分为对照组 (吸氧 )和实验组(吸异氟醚 ) ,Western blot方法检测吸入异氟醚后大鼠大脑皮层、脑干、海马的磷酸化NR1蛋白量以及NR1蛋白量的变化。结果 大鼠吸入 1 75 %异氟醚 2 0min后。大脑皮层的磷酸化NR1蛋白量比对照组下降 4 1 6 % ,脑干、海马的磷酸化NR1蛋白量也分别比对照组下降 4 9 8%和 39 9% (P <0 0 1) ;但NR1蛋白表达量未发生显著改变 (P >0 0 5 )。结论 异氟醚可抑制NR1的磷酸化 ,这种作用是吸入麻醉药抑制NR通道开放的重要原因 ;而NR1细胞内C

大鼠听皮质NMDA受体亚单位NR2B蛋白质的年龄-依赖性表达

目的:研究SD大鼠生后发育过程中,听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2B蛋白质的表达规律。方法:采用免疫组织化学反应和蛋白质印迹技术,分别检测生后1、2、3周和成年动物听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2B蛋白质的表达。结果:NR2B阳性神经元在生后第1周密度最高,随着生后周龄增长,NR2B阳性神经元密度递减,3周龄后降至成年动物的低表达水平。结论:大鼠生后发育过程中,听皮质NR2B亚单位蛋白质呈现年龄-依赖性表达,此结果与mRNA水平上的表达趋势一致。

离体培养人神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达

目的:研究早期离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达。方法:取胎龄8～12周人胚脑海马,进行NSCs分离、培养、传代和鉴定。通过免疫细胞化学和RT-PCR等方法检测传代1次和2次的人胚胎海马NSCs中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达。结果:自孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs,NMDA受体亚单位NR2A和NR2B免疫细胞化学反应呈阳性,这两种受体亚单位的mRNA均被检测到。结论:体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR2A和NR2B。

NR2A亚单位C末端的部分缺失对NMDA受体功能和表达的影响

目的研究NMDA受体NR2A亚单位羧基末端(以下简称为C末端)不同部位缺失对该受体表面表达和功能的影响。方法以GFP-NR2A为起始质粒构建了4个依次缺失部分C末端的GFP标记的NR2A亚单位表达载体:NR2A-ΔC1(缺失897L至1017S)、NR2A-ΔC2(缺失1024D至1142P)、NR2A-ΔC3(缺失1149D至1347G)及NR2A-ΔC4(缺失1354S至1464V);通过活细胞免疫化学染色分析这些载体与NR1-1a亚单位共转染后在HEK293细胞和海马神经元的表面表达,并通过电生理检测转染HEK293细胞NMDA受体的功能。结果当NR2A-ΔC1、NR2A-ΔC2、NR2AΔC3、NR2A-ΔC4分别与NR1-1a共转染HEK293细胞时,均可获得细胞膜表面表达,其表面染色阳性的细胞在绿色荧光蛋白细胞中的百分比与共转染NR1-1a/GFP-NR2A时的百分比相比均无显著性降低;并且NR1-1a/NR2A-ΔC2或NR1-1a/NR2A-ΔC4转染的HEK293细胞均能记录到谷氨酸诱发的NMDA受体通道电流。在海马神经元中,当转染NR2A-ΔC1、NR2A-ΔC2或NR2A-ΔC3时,单位长度树突表面表达的受体簇数量均显著低于转染GFP-NR2A的神经元,而转染NR2A-ΔC4的树突表面表达的受体簇数量却无显著性降低。结论在HEK293细胞中,C末端部分缺失的NR2A亚单位不影响含NR2A亚单位的NMDA受体在膜表面表达;而在海马神经元中,含NR2A的NMDA受体的表面表达数量受NR2AC末端的调控。

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA在成年大鼠海马的表达

目的 研究NMDA受体亚单位 (NR1、NR2A和NR2B)mRNA在正常成年大鼠海马结构各区的表达及形态特点。方法 原位核酸分子杂交组织化学反应和图像处理与分析。结果 NR1、NR2A和NR2BmRNA在正常大鼠海马结构各区锥体细胞和颗粒细胞普遍表达 ,其中NR1mRNA的表达最强 ,NR2AmRNA的表达最弱。NR1mRNA在齿状回 (DG)的表达水平明显强于CA1区和CA3区 ;NR2AmRNA在CA1区的表达水平则强于CA3区和DG ;NR2BmRNA在海马各区的表达水平基本相同。结论 NR1、NR2A和NR2BmRNA在正常成年大鼠海马各区的表达模式不同 ,其中NR2AmRNA在海马CA1区以及NR1mRNA在DG高表达的分布特点可能与海马的学习。