熟地黄对帕金森病异动症模型大鼠纹状体内NMDA-R1、NMDA-R2和GABA-RB1表达的动态变化研究

帕金森病（PD）是一种神经变性疾病，由于黑质-多巴胺（DA）能神经元变性、坏死，导致黑质-多巴胺能神经元受损，引起直接通路-间接通路失调是其主要发病机制。本实验基于前期研究，通过检测大鼠脑内γ-氨基丁酸（GABA）受体和N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体相关基因表达的变化，探索熟地黄治疗PD及左旋多巴诱导异动症（LID）的“增效减毒”机制。

吸入甲醛对小鼠前脑NMDA-R基因转录的影响

通过测定小鼠前脑N—甲基—D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartatereceptor,NMDA-R)的转录水平的变化,研究中低浓度甲醛暴露环境对小鼠中枢神经系统的影响.实验以昆明系小鼠为实验材料,经甲醛染毒后,立即脱颈处死并取其前脑组织提取总RNA,采用RT-PCR二步法对其中的NMDA-R亚基(Grin1,Grin2a,Grin2b)及管家基因β-actin进行扩增,通过光密度分析染毒前后基因转录水平的变化.实验结果表明,与对照组相比,0.5mg·m-3浓度的气态甲醛可使Grin1基因转录稍有上调,但无显著性差异;Grin2a基因转录上调且有显著性差异(p<0.05),Grin2b基因略有下调但无显著性差异.3.0mg·m-3浓度的甲醛可使Grin1基因转录上调并具有极显著差异(p<0.01),且上调幅度明显大于0.5mg·m-3染毒组;Grin2a基因转录显著性上调(p<0.05),但上调幅度小于0.5mg·m-3染毒组;Grin2b基因转录显著性下调(p<0.05).由此可见,低浓度甲醛(0.5mg·m-3)的吸入对NMDA-R(除Grin2a外)的各亚基的影响较小.中等浓度甲醛(3.0mg·m-3)的吸入对NMDA-R影响较大,这可能是持续性气态甲醛吸入对小鼠中枢神经系统产生影响的重要机制之一.

中风膏对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中Glu、NMDA-R1及海马神经元内钙离子浓度的影响

目的:在系统回顾缺血性脑卒中相关文献的基础上,通过大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型实验,探讨了中风膏对缺血性脑卒中引起再灌注脑损伤的治疗及作用机理。分析了中医益气活血法在缺血性脑卒中发病急性期用药的可行性、有效性、及安全性。方法:参照双侧颈总动脉夹闭法(2VO)及气虚血瘀的中医证型复制了缺血性脑卒中大鼠再灌注模型,造模成功后,予以中风膏灌胃治疗,阳性对照药选用益气活血,化瘀通络之步长脑心通。根据卒中评分标准,观察大鼠神经行为体征改变,分别测定相关指标。结果:本实验证明大脑神经元对缺血有不同的敏感性,其中海马区最为敏感,具有全脑缺血变化的全部特征。实验研究发现中风膏治疗组大鼠的神经行为体征较治疗前明显改善,中风膏组与阳性对照组疗效相当,均对缺血性脑卒中有很好的疗效。结论:本实验从细胞、分子水平探索认为中风膏治疗大鼠急性期缺血性脑卒中的机理可能是阻断脑缺血缺氧后的损伤级联反应,抑制兴奋氨基酸中Glu的释放,减少NMDA-R1的过度激活,减轻脑组织中Ca2+超载及脑缺血后引发的神经细胞毒性作用,从而保护脑组织,减轻脑组织的再灌注损伤,起到神经保护剂的作用。

髓鞘形成相关NMDA-R亚基在精神分裂症小鼠模型中的变化

目的:探讨髓鞘形成相关N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA-R)亚基在MK-801诱导的精神分裂症小鼠模型大脑中的变化。方法:35只雄性C57BL/6J小鼠,随机分为:对照组(control)和地卓西平马来酸盐处理组(MK-801),利用旷场实验、探孔实验及高架十字迷宫检测小鼠行为学改变,免疫荧光染色观察小鼠大脑NMDAR亚基NR1的表达,real time RT-PCR检测髓鞘形成相关NMDA-R亚基NR1、NR2C和NR3A mRNA的表达。结果:与对照组小鼠相比,MK-801处理组在旷场内10 min总运动路程较对照组显著增加;3 min及5 min内探孔次数较对照组显著降低;模型组小鼠在开臂内停留总时间较对照组显著降低。NR1在小鼠神经细胞胞膜、轴突周围和髓鞘部位均有表达。大脑皮层、海马内的NMDA-R亚基NR1,NR2C及NR3A mRNA的表达在两组间均无显著差异;胼胝体区域NR1和NR2C mRNA表达在两组间同样无显著差异;但相较于对照组,MK-801慢性给药组小鼠胼胝体区域NMDA-R亚基NR3A mRNA表达显著上调。结论:NMDA-R在少突胶质细胞、髓鞘等部位确有表达;胼胝体部位NR3A亚基上调可能在MK-801诱导的精神分裂症中发挥作用。

斜视性弱视猫发育过程中视皮层神经元NMDA-R1表达的免疫组织化学电镜观察

目的 研究不同发育阶段斜视猫视皮层神经元N 甲基 D 天门冬氨酸受体亚基 1(N methyl D aspartatereceptorsubunit 1,NMDA R1)在超微结构水平的表达与变化。方法 幼猫 11只 ,其中 6只猫在 2周龄行 1只眼外直肌断腱术产生单眼内斜。依动物处死时的年龄分为 3组 :3周龄组(斜视手术后 1周 ) ,2只正常和 2只斜视幼猫 ;5周龄组 (斜视手术后 3周 ) ,2只正常和 2只斜视幼猫 ;成年组 (6月龄 ) ,1只正常和 2只斜视性弱视猫。 3组动物均取初级视皮层组织进行冰冻切片 ,NMDA R1单克隆抗体标记后 ,分Ⅱ～Ⅲ层、Ⅳ层及Ⅴ～Ⅵ层各为一个区块行常规电镜染色切片 ,透射电镜观察。结果 (1)电镜下分析 32 8个视皮层神经元 ,发现 3组正常猫的视皮层神经元NMDA R1标记阳性细胞数均高于斜视猫 (χ2 =4 2 8,4 4 1,4 89;P <0 0 5 )。 (2 )共计数 132 0个NMDA R1阳性突触 ,显示正常猫发育过程中 ,视皮层Ⅱ、Ⅲ层神经元细胞膜上的NMDA R1受体突触数多于Ⅳ～Ⅵ层 ,且随年龄增长而增加 (F =3 2 8,P <0 0 5 ) ;斜视猫视皮层神经元细胞膜上的NMDA R1受体突触数 ,3周龄组与正常幼猫组差异无显著意义 (F =0 17,P >0 0 5 ) ,5周龄组和成年组均较正常猫组显著减少 (F =2 6 94 ,4 7 0 1;P <0 0 0 1)。结论 (1)

感染性疾病诱发的自身免疫性脑炎四例临床特点分析

自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis,AE)是指一类由抗体触发免疫机制介导的脑炎,此类抗体的靶抗原包括神经细胞表面抗原和神经细胞内抗原。抗神经细胞表面抗原的抗体主要结合位点位于神经细胞表面蛋白、离子通道或受体,如抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)、抗富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI1)、抗γ-氨基丁酸B型受体(GABA BR)与α氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸受体(AMPAR)等。抗神经细胞内抗原的抗体多为经典的副肿瘤综合征抗体,如抗Hu、Ma2、谷氨酸脱羧酶(GAD)、两性蛋白、CV2抗体[1-2]。肿瘤与感染作为触发AE的常见因素已见诸文献报道。本文报道4例感染性疾病触发的AE,总结其临床特点及预后,并探讨感染诱发AE的可能机制,期望有助于临床医生对于感染后AE的识别及治疗。

滋补脾阴方药对衰老大鼠学习记忆能力的影响及脑内机制

目的 :观察滋补脾阴方药对衰老大鼠学习记忆能力的影响 ,并探讨其脑内机制。方法 :以 2 3月龄自然衰老大鼠为研究对象 ,通过Y 电迷宫检测大鼠的学习记忆能力 ,同时 ,以免疫组化的方法检测脑内学习记忆相关脑区NMDA r、GABA、GFAP的变化。结果 :滋补脾阴方药能明显提高衰老大鼠Y -迷宫的正确次数 ,增强NMDA r、GABA的表达 ,抑制GFAP的表达。结论 :滋补脾阴方药可以通过减缓NMDA r、GABA能神经元的丧失 ,改善氨基酸递质功能 ,以及减轻反应性胶质化来提高衰老大鼠的学习记忆能力。

麻醉药作用机制及其保护作用与离子通道相关性研究进展

麻醉药广泛应用于临床各类手术中,但其麻醉作用机制至今仍不清楚。随着更多新技术的应用,发现麻醉药的作用机制主要与增强GABAA-R通道,抑制N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate acid,NMDA)和神经元烟碱乙酰胆碱受体通道的功能以及抑制电压门控离子通道开放等有关。同时麻醉药的脏器保护作用也与离子通道有关,主要通过激活K+通道,抑制Ca2+内流等途径实现。本文将从这两方面综述麻醉药与离子通道的关系。

N-甲基-D-天门冬氨酸-R1不同mRNA构型在斜视性弱视猫视皮层的表达

目的 了解在视觉发育可塑期 ,NMDA- R1受体基因的 m RNA构型与斜视性弱视猫视皮层神经元细胞水平表达减少有关的。 方法 同胞正常猫和斜视性弱视猫各两对 (共 4只 )。采用一系列地高辛核酸分子探针做猫脑片原位杂交 ,检测 NMDA- R1不同 m RNA构型在视皮层的表达情况。 结果 与正常猫相比 ,NMDA- R1m RNA“Pan”探针和 R1- a,R1- b,R1- 1构型探针在斜视性弱视猫视皮层的表达显著减少 ,主要在第 层。 R1- 3构型的表达在斜视性弱视猫视皮层比正常猫增加 ,主要在第 - 层。 R1- 2和 R1- 4构型的表达在正常猫和斜视猫视皮层的差异不显著。 结论 斜视性弱视猫视皮层 NMDA- R1m RNA特异构型的转录抑制导致受体蛋白水平表达的改变。

自身免疫性脑炎脑电图及诱发电位特点——附8例病例报告

目的了解自身免疫性脑炎患者的脑电图(EEG)和诱发电位改变,以提高临床早期诊断和治疗。方法收集2014年6月18日—2016年6月18日在四川省人民医院神经内科8例自身免性脑炎患者临床资料,所有患者的血液和脑脊液标本均送北京协和医院神经内科实验室做相关抗体的测定;患者至少做2次以上常规EEG和(或)视频脑电图(VEEG),1次以上脑干诱发电位(Auditory brainstem response,ABR)、上肢体感诱发电位(Somatosensory evoked potential,上肢SEP)、下肢体感诱发电位(下肢SEP)、视觉诱发电位(Visual evoked potential,VEP)的检查。患者出院后对其临床症状、EEG进行随访,对诱发电位有异常的患者进行关注。结果患者的临床表现精神行为异常、癫痫发作、记忆力减退、发热头痛、严重者意识障碍和通气功能下降;8例患者中5例为抗NMDA-R脑炎,2例为抗GABAB-R脑炎,1例是两者均为阳性。抗NMDA-R脑炎的EEG:2例患者病程早期(10 d)出现β波,中期(20 d)出现δ波,在此波上叠加快波,呈现δ刷,2例患者病情重,住院时间长,头颅核磁共振(MRI)阴性,治疗以激素冲击,丙种球蛋白,其中1例使用血浆置换疗法,临床预后良好;另2例可见散在的尖波和尖慢波,病情好转,EEG也有好转;1例EEG为正常,使用激素冲击治疗,临床预后好。抗GABAB-R脑炎:1例以慢波为主,治疗以激素冲击和丙种球蛋白,治疗后EEG恢复正常,临床预后好;另1例表现α波泛化,尤其在额区也出现α波,患者放弃治疗。抗NMDA-R和GABABR均为阳性患者,EEG表现慢波,病情好转,EEG好转。体感诱发电位检测中大部分未见异常,部分患者出现异常:波幅的改变,潜伏期轻度延长,异常患者出院3个月后随访,结果均为正常。结论不同类型自身免疫性脑炎的EEG表现不尽一致,不同的病程阶段有相应的改变,EEG可作为疾病预后的指标。早期EEG有快波出现且临床疑诊脑炎时,应及时筛查血与脑脊液的NMDA-R抗体;EEG出现α波泛化,需注意GABAB-R抗体的筛查。部分患者诱发电位改变在波幅和潜伏期轻度延长,出院3个月复查大部分恢复正常。由于病例数较少,诱发电位在自身免疫性脑炎患者中的改变需进一步研究。

鞘内注射MK801和美金刚对脊髓神经元凋亡的影响

通过小鼠鞘内注射地佐环平(MK801,3、10nmol·L-1)和美金刚(10、30nmol·L-1),运用免疫组织化学染色的方法,探讨这2种药物是否对脊髓神经元产生促进凋亡的作用。结果表明:小鼠鞘内注射MK801和美金刚对脊髓背角神经元(主要为感觉神经元)、腹角神经元(主要为运动神经元)及其他细胞均无促凋亡作用,且对腰段脊髓横切面上的细胞数量无显著影响。该试验为研究NMDA受体在脊髓层面作为用药靶点的安全用药提供了基础和前提。