片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1和GluR2表达的影响

目的研究片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白表达的影响。方法健康成年♂SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型对照组、片仔癀给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO)。Zea-Longa标准评分法评价大鼠神经功能损伤;TTC染色法评价脑梗死体积变化;qPCR法和Western blot法分别检测大鼠缺血侧脑组织皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达。结果与MCAO组比较,片仔癀能明显改善大鼠的神经功能损伤,降低大鼠脑梗死体积,促进NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达。结论片仔癀可能通过抑制局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的下调而发挥脑保护作用。

当归对宫内缺氧后新生大鼠大脑CA3区神经元及NMDAR1mRNA表达的影响

目的探讨当归对宫内缺氧后新生大鼠大脑内N-甲基D-天冬氨酸受体亚单位NR1(NMDAR1mRNA)表达及神经元的影响。方法将孕期14d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组。缺氧组孕鼠自孕第14天开始每天1次经尾静脉注射生理盐水8ml/kg(连续7d),后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2h(连续3d:孕期第14天、15天、16天);当归治疗组用250g/L的当归注射液代替生理盐水,其余处理同缺氧组;对照组不缺氧,其余同缺氧组。三组孕鼠分娩当日取脑组织、多聚甲醛固定,石蜡包埋切片NSE免疫组化、NMDAR1原位杂交神经元DAB显色、400倍拍照、IPP6.0软件图像分析。结果缺氧组新生鼠NSE阳性细胞表达较对照组减少(P<0.05),而NMDAR1mRNA的表达较对照组增加(P<0.05);当归组NSE阳性细胞表达较缺氧组增加(P<0.05),而NMDAR1mRNA的表达较缺氧组减少(P<0.05)。结论当归注射液对宫内缺氧新生大鼠脑组织具有保护作用,其作用机制之一可能是与抑制NMDAR1表达有关。

黄芪多糖对血管性痴呆大鼠空间记忆和海马NMDAR1表达的影响

目的:探讨黄芪多糖对血管性痴呆大鼠空间记忆和海马NMDAR1表达的影响。方法:选择血管性痴呆大鼠60只为研究对象,分成对照组和观察组,各30只。对照组:尼莫地平灌胃给药。观察组:黄芪多糖灌胃给药。灌胃给药4周后,通过Morris实验比较两组大鼠上台潜伏期、上台总路程、站台象限停留时间、穿越站台次数的水平。比较灌胃时、灌胃后4周两组大鼠Ach、Ach E水平的变化。比较两组大鼠海马CA1区NMDA基因表达。结果:观察组大鼠上台总路程、大鼠上台潜伏期、大鼠站台象限停留时间、都少于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。观察组大鼠穿越站台的次数多于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。观察组大鼠的Ach水平低于对照组,而观察组大鼠的Ach E水平则高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。观察组大鼠海马CA1区NMDAR1蛋白表达水平都高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:黄芪多糖能够改善血管性痴呆大鼠的空间记忆,促进大鼠海马CA1区受损神经元的恢复。

固定方式对神经细胞膜NMDAR1免疫细胞化学定位的影响

目的探讨不同固定方式对神经细胞膜NMDA受体NR1亚基免疫细胞化学定位结果的影响,并确定NR1在膜上的亚细胞定位分布。方法采用免疫细胞化学ABC法观察不同固定方式分组时NR1亚基在神经元膜上的定位分布。结果-20 ℃纯甲醇和-20 ℃纯丙酮固定5 min组呈现NR1典型的细胞膜阳性染色,定位在神经元两极靠近树突起始部及树突干上。4%多聚甲醛及加上0.5%戊二醛固定20 min组呈现染色假阴性。95%乙醇固定10 min组呈现细胞膜染色假阴性,细胞核染色假阳性。结论每种抗原免疫细胞化学检测中都有各自最适合的固定方法。NMDAR1抗原需要应用缓和的固定方式,-20 ℃纯甲醇和-20 ℃纯丙酮5 min短时间固定效果最好。NMDAR1分布于神经元膜两端树突起始部及树突干上。

耳针对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍及NMDAR1的影响

目的:观察耳针对血管性痴呆(VD)模型大鼠学习记忆能力及脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响。方法:采用4-血管阻断(4-VO)的方法,复制大鼠血管性痴呆模型,采用Y-型迷宫,进行行为学检测,定量测定其学习记忆成绩,用免疫组化法检测脑内NMDAR1表达水平的变化。结果:正常对照组脑组织有少量的NMDAR1免疫阳性神经细胞分布,VD模型组NMDAR1免疫阳性细胞数较正常对照组显著增高,平均光密度显著降低(P<0.05);耳针治疗组脑、肾两耳穴交替治疗3周脑组织NMDAR1免疫阳性神经细胞数显著减少,平均光密度值增高(P<0.05)。结论:耳针对脑缺血性神经元损伤的保护作用可能是通过抑制NMDAR1的过表达、下调NMDAR1的数量而实现的,从而改善VD大鼠学习记忆障碍。

马桑内酯致痫大鼠大脑皮层、海马NMDA受体亚单位1(NMDAR1)mRNA表达的变化

目的 探讨癫痫发病的分子机制。方法 采用原位杂交技术 ,研究了马桑内酯致痫大鼠大脑皮层、海马 N-甲基 - D-天门冬氨酸受体亚单位 1(NMDAR1) m RNA表达的变化。结果 马桑内酶致痫大鼠顶叶大脑皮层及海马齿状回 NMDAR1m RNA水平显著高于生理盐水对照组 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。结论 马桑内酯上调脑组织内NMDAR1m RNA水平 。

NMDAR1和GABA_A受体的α_1及α_3亚单位在成年猴小脑的定位分布

目的 :探讨NMDAR1和GABAA 受体的α1及α3 亚单位在成年恒河猴小脑皮质及小脑核的定位分布。方法 :用免疫组织化学染色技术及尼氏染色技术。结果 :NMDAR1免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和分子层的树突 ,分子层的星形细胞以及颗粒细胞层的颗粒细胞呈免疫反应产物弱阳性 ,胶质细胞呈中等强度的染色 ,小脑核的神经元胞质和部分突起染色明显。GABAA 受体的α1亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突 ,分子层的星形细胞和胶质细胞呈中等强度的染色 ,小脑核的神经元染色明显。GABAA 受体的α3 亚单位免疫反应产物主要分布在Purkinje细胞胞质和树突 ,胶质细胞及小脑核神经元染色明显。在Purkinje细胞层NMDAR1,GABAA 受体α1及α3 亚单位免疫阳性神经元分别占总Purkinje细胞数的 (90 .0± 2 .1) % ,(83.0± 2 .3) % ,及 (78.0± 1.8) %。结论 :NMDAR1,GABAA 受体的α1及α3 亚单位在成年恒河猴小脑具有广泛的分布。

抗痫灵对癫痫大鼠脑电图及海马NMDAR1表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮点燃癫痫大鼠模型脑电图及海马NMDAR1表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠60只,体质量180～220g,随机分成空白组、模型组、抗痫灵高、中、低剂量组、丙戊酸钠(VPA)组各10只。点燃后各组大鼠描记脑电图,低温条件下迅速断头取脑,用免疫印迹(Westernblot)方法观察各实验组大鼠海马的NMDAR1活性变化。结果:抗痫灵组、丙戊酸钠组、模型组阳性细胞表达与空白组相比有显著性差异(P<0.05),抗痫灵组显著低于模型组(P<0.01)。结论:抗痫灵对戊四氮点燃大鼠癫痫发作有显著对抗作用,其作用机制可能与其降低模型大鼠海马NMDAR1活性有关。

宽频噪音对谷氨酸中毒损伤AD模型大鼠不同脑区NMDAR1(ζ1)、NMDAR2A(ε1)亚基表达的影响

目的 :观察AD大鼠模型颞叶和额叶在 98dB宽频噪音暴露 5min后不同脑区NMDAR1(ζ 1)、NMDAR2A(ε1)表达的影响。方法 :采用WesternBlot及RT PCR技术 ,结合ABR测定方法。结果 :①AD模型组大鼠、空白对照组大鼠在 98dB宽频噪音暴露 5min后额叶、颞区、海马及小脑NMDAR1(ζ 1)亚基表达无明显差异 ,但AD模型组表达明显弱于空白对照组 ;②生理盐水组加噪音后NMDAR1(ζ 1)亚基小脑表达最强 ,颞叶最弱 ;NMDAR2A(ε1)表达最强为颞叶 ,海马最弱。③在海马三组大鼠NMDAR1(ζ 1)、NMDAR2A(ε 1)亚基表达有较明显的下调趋势 ;④空白对照组大鼠NMDAR1(ζ 1)、NMDAR2A(ε1)亚基mRNA表达各区无差异。⑤AD模型组大鼠颞叶、海马NMDAR2A(ε 1)表达明显减弱 ,最弱为小脑 ,额叶次之。结论 :噪音刺激抑制AD大鼠模型海马NMDAR1(ζ 1)亚基表达 ,且不在mRNA水平。噪音刺激抑制AD模型大鼠颞叶、海马NMDAR2A(ε 1)亚基表达 ,且有部位差异 ,在mRNA水平已调节。

白香丹胶囊对PMDD肝气逆证模型大鼠海马NMDAR1亚基蛋白分布及表达的影响

目的:以PMDD肝气逆证模型大鼠为载体,研究PMDD肝气逆证的病机以及白香丹胶囊对本病的干预机制。方法:改进情志刺激为主多因素分段刺激造模法,复制PMDD肝气逆证大鼠模型;用白香丹胶囊和氟西汀分散片予以干预,最后进行旷场实验评价模型;免疫荧光技术和蛋白印迹技术检测大鼠海马CA1、CA3区NMDAR1受体亚基分布情况及表达水平。结果:模型组大鼠与正常组相比较,其旷场实验的运动总距离明显增加(P<0.001)、中央区域的进入次数及停留在中央区域的时间显著减少(P<0.01),海马CA1、CA3区细胞呈现稀疏杂乱的分布状态,且同氟西汀组一样,其NMDAR1蛋白表达量明显降低;白香丹组大鼠与模型组相比较,其旷场实验的运动总距离明显降低(P<0.05)、中央区域的进入次数和停留在中央区域的时间明显增多(P<0.05),而氟西汀组与之相比,除了运动总距离明显降低(P<0.05),其它指标不存在显著性差异,同氟西汀组一样,白香丹组大鼠海马CA1、CA3区细胞分布、排列无显著异常,但其NMDAR1蛋白表达量显著升高(P<0.000 1);氟西汀组大鼠与白香丹组相比较,其NMDAR1蛋白表达量明显降低(P<0.05)。结论:情志刺激为主多因素分段刺激造模法对大鼠学习记忆能力的损伤机制可能与大鼠海马CA1、CA3区神经细胞的减少和NMDAR1亚基的表达量降低有关,白香丹胶囊通过调整NMDAR1蛋白表达量纠正上述异常改变,从而改善大鼠的学习记忆能力。

急性胎兔宫内窘迫模型脑组织病理及NMDAr1表达实验研究

目的建立孕兔宫内窘迫模型,观察胎兔脑组织病理及NMDAr1表达情况。方法新西兰大白兔孕兔30只,随机分为缺血模型组(n=9)、假手术组(n=9)和空白组(n=12)。缺血模型组孕兔行开腹子宫动脉结扎术,建立急性胎兔宫内窘迫模型;假手术组行开腹术,不结扎子宫动脉;空白组不行任何手术处理。除空白组胎兔直接断头取脑外,其他组胎兔都在术后6h断头取脑,观察各组胎兔脑组织病理形态及NMDAr1表达情况。结果与空白组及假手术组比较,缺血模型组胎兔脑组织NMDAr1表达呈强阳性,病理形态学为明显的脑组织细胞损伤表现;空白组和假手术组胎兔脑组织NMDAr1表达基本相同,均为少量表达,病理形态学均无脑组织细胞损伤表现。结论急性宫内窘迫可致胎兔脑组织NMDAr1表达增加,可能是造成其脑组织病理损伤的重要机制。

慢性脑缺血大鼠海马区NMDAR1表达的实验研究

目的观察慢性脑缺血时认知相关分子N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR1)mRlNA表达的变化。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎(2-VO)制作慢性脑缺血模型。12只雄性大鼠随机分为正常对照组(6只)和手术组(6只)。术后2个月处死动物,取大鼠海马组织,RT-PCR检测NMDAR1的mRNA水平。结果手术组较正常对照组NMDAR1水平下降(P<0.05)。结论大鼠海马区NMDAR1表达下调可能是慢性脑缺血所致血管性认知功能障碍的分子机制之一。

MgSO_4对急性胎兔宫内窘迫脑损伤NMDAr1表达影响的病理学研究

目的建立孕兔宫内窘迫模型,探讨硫酸镁(MgSO4)胎兔脑损伤后NMDAr1表达的影响。方法新西兰大白兔孕兔39只,随机分为空白对照组(n=12)、假手术组(n=9)、缺血缺氧脑病组(n=9)和MgSO4保护组(n=9),缺血缺氧组和MgSO4保护组建立孕兔开腹子宫动脉结扎胎兔宫内窘迫缺血缺氧模型,并且MgSO4保护组在建立模型前给予腹腔注射MgSO4(100 mg/kg),分别开腹取各组胎兔脑组织做病理及NMDAr1表达检测。结果与空白对照组和假手术比较,缺血缺氧脑病组和MgSO4保护组NMDAr1表达强阳性,脑组织结构层次被破坏,神经细胞变性坏死,间质出血;MgSO4保护组NMDAr1免疫反应强度低于缺血缺氧脑病组,而脑组织结构层次完整性优于缺血缺氧脑病组。结论 MgSO4在一定程度上能减轻NMDAr1导致的胎儿宫内窘迫缺血缺氧病理性脑损伤,对NMDA脑损伤具有一定的保护作用。

肝郁证大鼠外侧膝状体NMDAR1基因表达的实验研究

目的:分析肝郁证大鼠外侧膝状体N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型1(NMDAR1)基因表达的变化,探讨视路疾病肝郁证的微观机制。方法:慢性不可预知温和应激法(CUMS)建立肝郁证大鼠模型,利用体质量测量、旷场实验、糖水偏好实验评价模型造模成功后,运用原位杂交法检测实验大鼠外侧膝状体中NMDAR1基因表达情况。结果:与正常对照组比较,肝郁证模型组大鼠外侧膝状体中NMDAR1基因表达面积、平均光密度、积分光密度均显著增高(P<0.05)。结论:肝郁是导致外侧膝状体损伤的重要因素,其作用机制可能是通过过度激活NMDAR1受体,介导细胞兴奋性毒性作用来实现的,这为从肝论治视路疾病提供了理论依据。

酸性肽对AD大鼠学习记忆功能及NGF和NMDAR1表达的影响

目的研究酸性肽对AD大鼠脑中NGF、NMDAR1表达的影响。方法采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术,建立AD动物摸型,用不同剂量的AP对AD大鼠进行治疗。通过测定与学习记忆有关的行为学指标及脑内与AD相关的NGF、Aβ水平的变化,并与正常组、模型组、生理盐水组结果比较,对数据进行统计处理。结果模型组与正常组比较,学习记忆成绩明显下降(P<0.01);各治疗组与模型组比较,学习记忆成绩明显提高(P<0.01);模型组与空白组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加,各治疗组分别与模型组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加(P<0.01)。结论AP可能通过上调AD基底前脑中NGF的水平并降低NMDAR1水平来发挥对AD的治疗作用。

心肺复苏大鼠行亚低温处理后不同脑区NMDAR1表达变化

目的探讨亚低温对心肺复苏大鼠大脑不同脑区内NMDAR1表达的影响。方法建立心肺复苏大鼠动物模型,应用原位杂交方法观察亚低温对心肺复苏大鼠大脑顶叶皮层、颞叶皮层、海马神经元内NMDAR1表达的变化。结果亚低温组大鼠大脑顶叶皮层、颞叶皮层、海马神经元内NMDAR1受体表达量明显低于对照组,差异有统计学极显著性意义(P<0.01)。结论亚低温能够减轻心肺复苏后脑水肿,其机制可能为:亚低温通过减少NMDAR1的表达,降低阳离子通道通透性的作用,而减轻脑水肿的形成,起到治疗心肺复苏后脑水肿的作用。

视明宝颗粒对形觉剥夺性弱视猫视皮层谷氨酸受体(NMDAR1)表达的影响

目的观察视明宝颗粒对形觉剥夺性弱视猫视皮质17区、21a区N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）mRNA表达的影响。方法家养幼猫（4～6周龄）30只，随机分为正常组、模型组、生理盐水对照组以及视明宝低、中、高剂量组，每组5只。除正常组外其余各组均左侧眼睑缝合制作形觉剥夺弱视模型，应用视觉诱发电位（P—VEP）验证造模是否成功。采用实时定量PCR（real—timePCR）技术，检测各组幼猫双侧视皮质17区和21a区NMDAR1mRNA的相对表达量。结果1．弱视模型幼猫左眼P—VEP与同期正常幼猫左眼P—VEP比较。P波潜伏期延长，波幅降低（P〈0．001）。2．模型组双侧17区、21a区的NMDAR1mRNA表达均较正常组明显降低（P〈0．05），生理盐水对照组、视明宝低剂量组各脑区指标与模型组接近（P〉0．05）；中剂量组左侧21a区的表达与正常组接近（P〉0．05），其他检测部位数值与模型组、生理盐水对照组及视明宝低剂量组相当（P〉0．05）；高剂量组双侧21a区NMDAR1mRNA表达高于其他干预组并与正常组接近（P〉0．05），左侧17区数值与各干预组大致相同（P〉0．05），低于正常组（P〈0．05），右侧17区数值高于正常组（P〈0．05）。3．双侧自身比较，在17区，视明宝高剂量组的右侧NMDAR1mRNA表达明显高于左侧（P=0．043），其他各组双侧差异不明显（P〉0．05）；21a区，正常组、模型组、生理盐水对照组、视明宝低剂量组，右侧高于左侧（P〈0．05），高剂量组右侧低于左侧（P〈0．05）。结论视明宝颗粒可以提高形觉剥夺性弱视猫视皮质NMDAR1的表达，高剂量组作用最明显。

右归饮对去卵巢血管钙化大鼠NMDAR1蛋白表达的影响

目的:观察右归饮对去卵巢血管钙化中谷氨酸受体变化的影响。方法:将40只远交群雌性大鼠(sprague dawley,SD)随机分为假手术组、模型组、低剂量组、高剂量组和辛伐他汀组,采用皮下注射华法令加维生素D3制备血管钙化模型,造模后,低剂量组、高剂量组分别给予右归饮浓缩液5.35 g/(kg·d)和16.05 g/(kg·d)灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀混悬水溶液5.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水,共12周;实验结束时采集血浆标本测定雌二醇及血脂四项,采用苏木精-伊红染色法(HE染色)观察动脉钙化的情况,并采用免疫印迹试验检测N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR,NR)1蛋白的表达。结果 :模型组大鼠雌二醇、甘油三酯含量和NR1蛋白表达降低,P<0.05,低密度脂蛋白升高,P<0.05;高剂量组和低剂量组雌二醇、甘油三酯含量升高,NR1蛋白表达增加,P<0.05;高剂量组、低剂量组和辛伐他汀组低密度脂蛋白的含量降低,P<0.05;辛伐他汀组雌二醇无变化,P>0.05。结论:右归饮可抑制大鼠去卵巢血管钙化的形成,可能与提高雌激素水平和NR1蛋白的表达有关。

NMDAR1在成人心脏中的分布及其法医学意义

目的检测成人心脏中NMDAR1蛋白,观察其分布情况,并探讨法医学意义。方法以12例高坠死亡成人心脏为标本,提取左、右心室和心传导系统(窦房结、房室结、房室束及左右束支)组织作为实验组;取大脑额部组织作为阳性对照组。所取标本各两份,一份采用western b lot技术检测NMDAR1蛋白,另一份采用免疫组化染色法观察NMDAR1在成人心脏中的分布。结果两组中用western b lot均可检出NMDAR1蛋白表达,其强弱程度:脑组织最强,其次为窦房结和房室结,左右心室肌最弱;用免疫组化方法观察,结果在心脏传导系统可见NMDAR1阳性表达,而在心室肌中未见表达。结论成人心脏中存在NMDAR1,主要分布在心传导系统,NMDAR1可能在心脏电生理和病理生理中起作用。