NME1在皮肤黑色素瘤中的表达及其与临床预后的相关性分析

为探讨非转移性细胞1(NME1)基因在皮肤黑色素瘤(SKCM)中的表达及其与临床预后的相关性,通过GEPIA数据库及UALCAN数据库分析NME1在SKCM组织中的表达;通过GSCA数据库、GEPIA数据库和TIMER数据库分析NME1表达水平与SKCM患者总生存率的相关性;通过cBioPortal数据库分析SKCM患者中NME1基因的突变情况及其与患者总生存率的相关性;通过STRING数据库分析可能与NME1相互作用的蛋白,并利用Metascape数据库对其进行功能富集分析;通过TIMER数据库分析SKCM中NME1的表达水平与免疫细胞浸润水平的相关性。结果显示:NME1在SKCM组织中表达水平明显高于正常组织;NME1的高表达与转移性SKCM患者较低的总生存率显著相关;NME1基因变异与SKCM患者总生存率无明显相关性;NME1及其相互作用蛋白主要参与ARF6运输通路、嘌呤代谢、细胞发育的调节、DNA代谢等生物学过程;转移性SKCM中NME1的高表达与CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞较低的免疫浸润水平相关。本研究表明,在转移性SKCM患者中,NME1高表达与较低的免疫细胞浸润水平和总生存率相关。NME1有望成为转移性SKCM免疫细胞浸润和预后相关的生物学标志物。

NME1重组腺病毒构建及表达鉴定

目的应用AdEasyTM腺病毒载体系统构建含人NME1基因的重组腺病毒,检测NME1基因在肺癌细胞的表达。方法从人肝脏标本克隆带有KpnⅠ,XhoⅠ双酶切位点的NME1cDNA,利用细菌体内同源重组法将NME1正向连接至腺病毒载体上,测序鉴定正确后,于QBI-293A细胞中包装扩增,TCID50法检测重组腺病毒滴度,重组腺病毒转染至肺癌细胞GLC-82,检测NME1在细胞内表达。结果肝脏组织克隆出470bp条带,测序与NME1编码序列相符,测得重组腺病毒滴度为1010TCID50/mL,免疫实验显示NME1在GLC-82细胞成功表达。结论成功构建含人NME1基因的重组腺病毒并转染肺癌细胞,检测到NME1在肺癌细胞中正常表达。

肝癌细胞中NME1功能研究及调控的pHis修饰底物发现

目的:研究核苷二磷酸激酶1(Nucleoside diphosphate kinase A,NME1)在肝癌细胞HCCLM3中的功能作用及其调控的组氨酸磷酸化(Histidine phosphorylation,pHis)修饰底物。方法:采用划痕愈合实验和Transwell小室实验以及蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学分析方法,对NME1敲除后细胞表型与分子水平变化进行分析。结果:在肝癌细胞中敲除组氨酸激酶NME1能降低细胞运动能力,全蛋白组差异分析发现NME1敲除后差异表达蛋白主要参与细胞底物黏附调控、细胞周期调节及蛋白激酶活性调控等生命活动过程。Western blot检测发现敲除NME1表达使细胞整体pHis修饰水平显著下调。随后使用整合pHis修饰位点鉴定策略,即通过双甲基标记、强阳离子交换色谱(Strong cation exchange,SCX)分离磷酸化修饰肽段与非修饰肽段、铜珠(Cu-iminodiacetic acid,Cu-IDA)富集组氨酸肽段以及质谱检测等过程,首次在肝癌细胞系中鉴定到242个pHis修饰位点及206个pHis修饰蛋白。大约25%的pHis修饰蛋白为首次发现,其中NME1敲低组pHis修饰水平显著下调的蛋白有(Cell adhesion molecule 3,CADM3)、(Cytochrome C,CYCS)、(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)及(Phosphofructokinase,PFKM)等近30个,表明NME1可能通过这些蛋白及代谢酶的组氨酸磷酸化修饰水平的变化影响肿瘤细胞间的黏附及代谢能力。结论:肿瘤细胞中NME1表达水平的变化会影响肿瘤细胞的运动能力,细胞内pHis修饰水平的失调可能全面参与疾病进程。

NME1基因多态性与疾病易感性、药物代谢的关联研究进展

非转移细胞(non-metastatic cells,NME)基因家族,系首个被发现的肿瘤转移抑制相关基因。NME1基因及其编码蛋白通过发挥酶活性和与多种细胞内蛋白相互作用,参与调节细胞增殖、分化和代谢、凋亡、骨架动力学、信号转导、基因调节等多种生理功能与病理过程。本文综述发现NME1基因启动子区rs16949649,rs3760468,rs3760469和rs2302254等单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点基因多态性与一些疾病易感性和预后存在关联,包括乳腺癌、妇科癌症、消化系统癌症、肺癌等,但结果并不完全一致;同时分析了NME1基因及其编码蛋白与嘌呤类药物和阿糖胞苷代谢的关联性。以上关联作用机制复杂且尚不完全清楚,需实施大规模、设计严谨临床试验,分析参与调控具体信号通路及NME1基因表达干预等内容,为临床常见恶性肿瘤精准靶向防治及嘌呤类药物个体化应用奠定基础。

肿瘤转移抑制基因NME1多态性与河北地区非小细胞肺癌相关性研究

目的肿瘤转移抑制基因NMEl启动子区的多态位点rsl6949649T〉C和rs2302254C〉T与多种恶性肿瘤的侵袭能力及预后相关，但其与非小细胞肺癌（non—smallcelllungcancer，NSCLC）的研究报道较少见。本研究探讨NMEl基因rsl6949649和rs2302254多态性与河北地区NSCLC的相关性。方法选取2005—10—01—2010—01—31河北医科大学第四医院胸外科手术治疗的190例NSCLC患者以及190名性别与年龄相匹配的同一地区健康对照作为研究对象。应用聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）-连接酶检测反应（1igasedetectionreaction，LDR）的方法进行rsl6949649和rs2302254基因分型。应用Y。检验比较基因型和等位基因频率在不同组间的分布；非条件Logistic回归模型计算相对风险度的比值比（oddsratio，OR）及95％可信区间（confidentialinterval，CI）；应用SHEsis在线软件构建单倍型并计算单倍型的OR值。结果对照组NMEl基因的rsl6949649TT基因型和rs2302254CC基因型所占比例分别为40．5％和68．9％，显著高于NSCLC组的27．9％和53．7％，P值分别为0．012和0．007。携带rsl6949649C等位基因的基因型（TC＋CC）个体患NSCLC的风险是携带TT基因型个体的1．86倍（95％CI：1．20～2．88），携带rs2302254T等位基因的基因型（CT＋TT）个体患NSCLC的风险是携带CC基因型个体的1．94倍（95％CI：1．27～2．96）。单倍型分析显示，携带rsl6949649C／rs2302254T单倍型可显著增加NSCLC的发病风险（0R=1．82，95％CI：1．28～2．58）。rsl6949649和rs2302254基因型与肿瘤的病理类型、原发瘤大小、TNM分期和肿瘤转移无关，均P〉0．05；但是随着肿瘤转移程度的加重，风险型基因型所占比例出现逐步增高的趋势。结论NMEl基因的rsl6949649和rs2302254多态性与河北地区NSCLC的发病风险相关。携带rsl6949649C等位基因的基因型（TC＋CC）和携带rs2302254T等位基因的基因型（CT＋TT）可分别增加NSCLC的发病风险；携带rsl6949649C／rs2302254T单倍型亦可显著增加NSCLC的发病风险。

NMES1基因在恶性肿瘤中作用的研究进展

食管正常黏膜特异性1基因(NMES1)被认为是一个抑癌基因,在多种恶性肿瘤中的表达水平显著降低。NMES1可以影响肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移等多种细胞生物学行为,为寻找恶性肿瘤早期标志物或治疗靶点提供新的方向及策略,有助于评估患者的疾病进程和预后。