鸡Visfatin基因真核表达载体的构建、组织表达和功能研究

研究旨在构建鸡Visfatin基因的真核表达载体,并在LMH细胞中过表达,揭示LMH中Visfatin对脂类代谢相关基因的影响。试验采用RT-PCR扩增鸡Visfatin的编码区片段,构建鸡Visfatin基因的真核表达载体,转染LMH细胞后经Western blot对表达产物鉴定,用荧光定量PCR检测LMH细胞中过表达Visfatin基因对脂类代谢相关基因影响,检测不同组织Visfatin基因的表达情况。结果显示:扩增到的鸡Visfatin基因CDS全长1 479 bp,其编码493个氨基酸,鸡Visfatin蛋白的化学式为C2513H3912N656O751S8,分子量为55 587.13 u,其理论等电点(p I)为6.66,根据稳定性的相关参数分析,该蛋白的不稳定系数小于40,表明Visfatin蛋白是一种相对稳定的蛋白质,鸡Visfatin蛋白的脂肪指数为84.58,总平均亲水性为-0.455,提示其具有一定的亲水性;构建的p CMV-3Tag-9-gga-Visfatin真核表达载体在LMH细胞成功表达出Visfatin-Myc融合蛋白,Visfatin基因过表达后极显著下调LPL和NMRK1基因表达;鸡12种组织中的Visfatin基因在胸肌组织中表达量较高。研究结果表明,Visfatin基因通过下调LPL和NMRK1基因表达对脂类代谢进行调控。