多氯联苯对胎鼠神经干细胞Nnat基因表达的影响

目的探讨环境污染物多氯联苯Aroclor 1254对神经发育损伤的作用机制.方法不同剂量的Aroclor 1254(A1254)作用于胎鼠的神经干细胞(NSC)72 h,通过实时定量RT-PCR检测Neuronatin(Nnat)mRNA的表达,Western blot检测Nnat蛋白质含量和流式细胞技术检测细胞凋亡情况.结果 (1)免疫荧光显示所培养细胞表达Nestin,且能进一步被诱导分化;(2)随着A1254剂量增加,Nnat mRNA和蛋白质表达水平下降,NSC细胞凋亡增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论多氯联苯可能通过下调Nnat基因表达,神经细胞凋亡增加,导致胎儿的神经发育损伤.

猪NNAT基因印记鉴定及单核苷酸多态性分析

本实验旨在探究猪NNAT(Neuronatin)基因印记状态、遗传多态性及其与胴体和肉质性状的关系,为印记基因成为猪肉质性状遗传改良的分子标记提供理论依据。通过PCR产物直接测序发现在NNAT基因3’UTR区存在一处C/T突变,鉴定了NNAT基因在梅山猪与大白猪正反交产生的65d胚胎的背部脂肪组织中的印记状态;在起始密码子上游-107 bp处存在一处G/A突变,利用PCR-Alu I-RFLP技术在大白猪、长白猪和梅山猪中进行了基因分型,并在279头大白猪与梅山猪杂交产生的F2代群体中进行性状关联分析。结果表明,猪NNAT基因在所检测组织中为父本表达、母本印记;-107 bp处的G/A突变与眼肌高、眼肌宽、眼肌面积、背最长肌含水量、背最长肌大理石纹、股二头肌大理石纹显著相关。

Nnat基因在大鼠脑发育过程中表达的初步研究

目的:观察Nnat基因在大鼠脑发育过程中基因表达的变化规律,藉以探讨Nnat在神经系统发育过程中的作用。方法:采用半定量RT-PCR法分析出生前后大鼠脑内Nnat表达水平的变化,Western blot检测Nnat蛋白的表达。结果:在大鼠胚胎第9 d(E9)脑内Nnat mRNA开始表达,但表达量较低,以后其表达量逐渐升高,出生前有轻微下调。出生后大鼠的不同脑区Nnat mRNA的表达量都呈现下降趋势,60 d时达到较低的水平。Nnat蛋白在不同脑区都具有表达,但不同亚型蛋白量的相对比例不同。结论:Nnat基因在胚胎期及出生后大鼠脑内的表达量与中枢神经系统发育及分化过程的时间上有一定的同步性,提示Nnat的作用可能与神经元分化的调节有关。

猪Neuronatin基因在pTr2细胞内葡萄糖转运中的功能研究

本研究旨在探索印记基因NNAT 2个转录本NNAT-α、NNAT-β在猪胎盘滋养层细胞(pTr2)中的功能。实验通过NCBI数据库公布的猪NNAT-α、NNAT-β的CDs序列信息设计引物,并构建了pcDNA3.1-NNAT-α和pcDNA3.1-NNAT-β真核表达载体,经过双酶切、连接转化、测序鉴定后,将表达载体转染至pTr2细胞,48 h后通过酶标仪检测细胞内葡萄糖含量的变化,RT-PCR检测NNAT基因、葡萄糖转运基因(GLUT1、GLUT3)和PI3K-AKT通路基因的表达。结果表明在pTr2细胞中过表达NNAT-α、NNAT-β可显著提高细胞内葡萄糖含量、葡萄糖转运基因(GLUT1、GLUT3)和PI3K-AKT通路基因mRNA的表达量。

Neuronatin对人视网膜色素上皮细胞增殖迁移的影响

目的:研究胚胎时期表达部位广泛、丰度高,而成年后分化表达的印记基因Neuronatin(Nnat)的两种剪接形式Nnatα和Nnatβ对人视网膜色素上皮细胞(RPE)增殖、迁移的影响。方法:构建Nnatα、β两种剪接形式的表达质粒,转染RPE获得表达该基因的稳定表达细胞株;CCK-8实验检测稳定表达细胞株的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,细胞划痕实验检测其迁移能力。结果:成功构建了Nnatα和Nnatβ表达质粒,并获得了Nnatα和Nnatβ基因稳定表达PRE细胞株。CCK-8实验结果显示cNNATα组与对照组相比较,增值率为23.33%(P<0.05),cNNATβ组相较于对照组无显著性差异,细胞周期分析cNNATα组和cNNATβ组细胞在G2-S期的百分率分别为18.60%、11.11%,对照组细胞的为9.94%;相较于对照组,cNNATα组的细胞迁移能力显著增强,cNNATβ组的细胞迁移能力微弱增强。结论:Nnatα对RPE有一定的增殖作用,其影响主要在S期;同时,Nnatα显著促进RPE细胞的迁移能力。