缺血再灌注损伤后nNOS、eNOS及iNOS表达的变化

目的观察脑缺血再灌注后中晚期三型NOS表达的变化规律。方法采用蛋白质印迹法检测大鼠缺血再灌注后人脑皮层NOS的表达。结果三型NOS在缺血再灌注12、24、72h后与正常对照组比较均明显增加。iNOS在12￣72h表达逐渐增加,nNOS在12￣72h表达逐渐减少,eNOS在12￣72h表达呈逐渐减少趋势。结论缺血再灌注12￣72h,随着时间的延长及神经元损伤程度的增加,nNOS、eNOS所起的作用逐渐减弱,而iNOS的表达却越来越强,可见在缺血再灌注中晚期损伤的病理进程中三种NOS担当着不同的作用,提示在此期间选择应用iNOS抑制剂有可能减少迟发性神经元损伤。

小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究

目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤区及损伤周边区内的表达及其变化规律。方法小鼠背部制作全层切创,应用免疫组织化学技术观察伤后切创组织中iNOS和eNOS的表达,并和无切创的小鼠作为对照。结果损伤区及损伤周边区细胞,伤后3h的损伤皮肤组织中可见少量的多型核细胞表达iNOS和eNOS,伤后6～24h,大部分浸润的中性粒细胞和单核细胞为iNOS和eNOS阳性。随着时间的延长,iNOS和eNOS阳性细胞以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后3hiNOS的阳性细胞比率较低,6h～1d持续性增加并于1d达到最高峰,3～7d维持在一个相对稳定的水平直至伤后10d再次达高峰,10～14d开始下降。eNOS的阳性细胞率在伤后1～3h表达较低,6h～3d持续性增高,并在3d达到最高峰,在其后的5d内保持稳定表达,之后开始下降。而且损伤区及损伤周边区、特别是肉芽组织内的新生血管可见iNOS和eNOS不同强度的表达。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤周边区内多型核细胞、单核细胞和成纤维细胞中表达,其时序性变化可望用于皮肤损伤时间的推断。

慈菇消脂丸对大鼠非酒精性脂肪性肝病iNOS、eNOS表达的影响

目的观察中药慈菇消脂丸对大鼠非酒精性脂肪性肝病的防治作用。方法建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,随机分为正常对照组、模型对照组、慈菇消脂丸高剂量组、慈菇消脂丸低剂量组、阳性对照组,观察肝组织病理形态学的变化。免疫组化技术检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝脏的表达。结果模型组大鼠肝组织出现脂肪变性及不同程度的炎性细胞浸润,镜下可见肝细胞内大量脂滴。与正常组相比较,模型组大鼠肝组织内iNOS蛋白表达显著提高,eNOS蛋白表达降低(P<0.01);与模型组相比较,中药治疗组大鼠肝组织内iNOS蛋白表达显著降低,eNOS蛋白表达提高;与阳性药物对照组相比较,中药慈菇消脂丸高剂量组作用显著(P<0.05)。结论慈菇消脂丸对大鼠非酒精性脂肪性肝病具有明显的防治作用,其作用机制与改善肝组织脂肪变性程度、抑制脂质过氧化、抗炎有关。

一氧化氮合酶抑制剂L-NNA对福尔马林大鼠脑nNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨一氧化氮合酶抑制剂L NNA对福尔马林实验大鼠脑一氧化氮合酶表达的影响。方法 应用免疫组织化学ABC法研究了nNOS、iNOS在福尔马林大鼠脑内的表达。结果 在福尔马林实验大鼠不同脑区 ,nNOS和iNOS表达较强。一氧化氮合酶抑制剂L NNA可抑制福尔马林实验大鼠脑nNOS、iNOS的表达 ,NO生成减少。结论 一氧化氮合酶抑制剂L NNA可通过抑制一氧化氮合酶作用 ,参与伤害性痛觉调制。一氧化氮在脑的痛觉调制过程中起重要作用。

大鼠急性肺损伤时iNOS mRNA和eNOS mRNA表达的时相变化

目的 :观察内毒素性急性肺损伤时肺组织中一氧化氮 (NO)和一氧化氮合酶mRNA的时相变化 ,并探讨其相互关系。方法 :用内毒素 (LPS)复制急性肺损伤模型 ,分别测定 0 .5 ,1,2 ,3,4h各组肺组织NO和丙二醛 (MDA)的含量 ;用原位杂交方法检测各组大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOSmRNA)和内皮型一氧化氮合酶mRNA(eNOSmRNA)的表达水平。结果 :大鼠给予LPS后 ,①肺组织MDA含量随时间延长而逐渐增加 ,不同时点的均值互有差异 (P <0 .0 5 ) ,并且均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;②各时点肺组织NO含量和iNOSmRNA表达量均显著大于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,并且均在 2h时达到高峰 ,以后呈下降趋势。二者的变化呈显著正相关 (P <0 .0 1) ;③ 2h前 (含 2h)肺组织MDA含量随iNOSmRNA表达增加所致的NO产量增多而增加 ,2h后二者变化趋势相反 ;④各时点肺组织eNOSmRNA表达量与正常对照组比差异均无显著性。结论 :内毒素性急性肺损伤时 ,肺组织iNOSmRNA大量表达 ,导致内源性NO爆发式产生 ,从而介导肺损伤。NO产量在静注内毒素后 2h达到高峰 ,以后呈下降趋势。

兔股动脉结扎诱导动脉生成过程中iNOS和eNOS的表达

目的:研究兔后肢动脉生成过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达特征。方法:将兔一侧股动脉结扎,另一侧设为对照组。1周后动物被处死。应用免疫荧光组织化学技术检测侧支血管中iNOS及eNOS的表达。用Leica激光共聚焦显微镜观察并拍照,图片用silicon graphicsoctane进行处理。结果:在正常小动脉血管中iNOS的表达很低,在生长的侧支血管iNOS的表达显著上调,是正常小动脉血管的2.8倍。其表达在血管壁的各层可见。正常小动脉血管eNOS的表达呈现一定基础水平,在生长的侧支血管中eNOS的表达呈强阳性,集中在内皮细胞,是正常小动脉血管的2.2倍。结论:侧支血管发育过程中iNOS的表达上调,上调的iNOS和eNOS可能通过生成NO,调节内皮细胞的增殖、移动及炎症的形成,从而对侧支血管的生长发挥重要作用。

当归四逆汤有效成分组合对大鼠缺血再灌注模型中iNOS eNOS表达相关性的实验研究

目的研究当归四逆汤有效成分单体组合对大鼠心肌缺血再灌注的保护作用及其机制。方法 SD大鼠体质量为250～300 g,分为正常组,缺血再灌注(IR,Ischemia-Reperfusion)组,缺血再灌注加药物(IR+药)组,缺血再灌注加药物加阻断剂(IR+药+L-NAME)组,实时荧光定量PCR方法分析各组心肌组织iNOSmRNA,eNOS mRNA表达的变化,各组大鼠血清中CK-MB、NO的水平变化。结果药物组NO水平增高(P<0.01),CK-MB量下降(P<0.05),eNOS表达量升高(P<0.001),iNOS表达量下降(P<0.01)。结论当归四逆汤有效成分组合缺血预处理对心肌起到了保护作用,其机制与上调eNOS,下调iNOS表达,从而调节NO产生有关。

盐敏感性高血压大鼠eNOS、iNOS表达与心肌细胞凋亡关系分析

目的探讨盐敏感性高血压形成和心肌细胞损害产生的机制。方法以辣椒辣素损伤Wistar大鼠感觉神经,饲喂高盐饲料,建立盐敏感性高血压大鼠模型。苏木素—伊红染色观察大鼠组织病理学改变;分光光度法检测心肌组织iNOS活性和NO含量;免疫组织化学方法检测心肌eNOS、iNOS蛋白表达;RT-PCR检测心肌eNOS、iNOS mRNA的表达。单细胞凝胶电泳检测心肌细胞凋亡。结果实验结束时各组比较体重无显著性差异(P>0.05)。在第2、3、4周时,辣椒辣素高盐组鼠尾收缩压与对照组相比差异显著(P<0.05)。辣椒辣素高盐组心肌细胞排列紊乱、细胞间隙明显增大,细胞核排列不整齐;心肌iNOS、NO水平升高(P<0.05);eNOS蛋白表达减少(P<0.05)与eNOS mRNA表达减少(P<0.01);iNOS蛋白表达和iNOSmRNA表达显著增高(P<0.01);凋亡细胞数升高(P<0.05)。结论 eNOS mRNA和蛋白的低表达与感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠形成相关。iNOS mRNA和蛋白的高表达及iNOS活性升高使心肌组织局部产生大量NO。NO可能使得感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠心肌细胞凋亡增加,从而加重心肌的损伤。

脑缺血再灌注大鼠模型eNOS和nNOS的变化

目的通过对缺血再灌注早期eNOS与nNOS表达情况的观察,探讨NO在脑缺血再灌注损伤中发挥神经毒性作用时是否出现一氧化氮合酶(NOS)不同亚型的变化。方法采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,激光多普勒灌流监测仪测血流来判断模型是否成功,Western blot方法检测eNOS与nNOS变化。结果血管内皮细胞内eNOS表达在缺血1h内升高,之后到再灌注2h内持续降低;而nNOS的表达在缺血到再灌注2h内持续上升。结论大鼠脑缺血再灌注模型中eNOS与nNOS的变化趋势不同。表明NO在缺血性脑损伤的病理过程的发挥作用与NOS亚型的变化有关。

脉络宁对肢体缺血/再灌注兔骨骼肌iNOS mRNA及eNOS mRNA表达的影响

肢体缺血/再灌注损伤常见于骨外科、创伤外科、血管外科等,其后果是通过一系列病理生理反应,最终导致组织细胞的损伤乃至坏死.

外源性生理水平的雄激素对去势大鼠动脉壁eNOS和iNOS表达的影响

目的探讨补充生理水平的外源性雄激素对去势大鼠动脉壁内皮型NO合酶(eNOS)和诱导型NO合酶(iNOS)表达的影响。方法将大鼠随机分为去势组、外源性生理水平雄激素补充组和对照组。采用实时荧光定量PCR和Western blot,观察不同处理组胸主动脉壁一氧化氮合酶(NOS)亚型eNOS和iNOS mRNA和其蛋白表达的变化。结果与对照组相比,去势组大鼠eNOS的表达显著降低(P<0.05),而外源性雄激素生理水平补充组大鼠eNOS的表达接近正常水平;两个处理组iNOS mRNA的水平与对照组比较均无统计学差异。结论补充外源性生理水平的雄激素对去势大鼠心血管系统的保护作用,可能是通过血管壁eNOS影响NO的合成与释放而介导的。

雄激素对大鼠脑缺血/再灌注损伤后脑内顶叶皮层eNOS及iNOS表达的影响

目的探讨雄激素对大鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤后,脑内内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法将大鼠45只随机均分为去势组、雄激素组和假手术组,喂养2周后,各组再按照I/R后不同时间点分为6,24和72 h 3个亚组,共9组,每组均5只。采用W estern b lot检测不同处理组脑内顶叶皮层中eNOS和iNOS表达的变化。结果随着再灌注时间的延长,各组大鼠eNOS的表达水平均有下降的趋势;而去势组和假手术组大鼠iNOS表达的水平均有上升的趋势。与假手术组相比,再灌注各时间点雄激素处理组eNOS的水平显著升高(P<0.01),去势组大鼠eNOS的水平明显降低(P<0.05)。而iNOS的表达水平则呈现出相反的趋势:即雄激素处理组明显低于正常水平(P<0.05);而去势组大鼠则显著升高(P<0.05)。结论脑I/R后,在雄激素存在的情况下,eNOS的表达水平升高,而iNOS的表达水平降低;去势组eNOS的表达水平下降,而iNOS的表达水平上升,提示雄激素对脑I/R损伤可能具有保护作用。

芦丁对大鼠缺血再灌注心肌组织iNOS和eNOSmRNA表达的影响

目的研究芦丁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法通过左冠状动脉结扎建立SD大鼠心肌缺血再灌注模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、芦丁组、L-NAME(eNOS抑制剂)组,ELISA法检测血清一氧化氮(NO)水平,免疫抑制法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)浓度,实时荧光定量PCR分析各组心肌组织iNOS和eNOS mRNA表达的变化。结果与模型组比较,芦丁组血清NO水平增高(P<0.01),CK-MB浓度下降(P<0.01),eNOS mRNA表达升高(P<0.01),iNOS mRNA表达下降(P<0.01)。结论芦丁缺血预处理对心肌起到了保护作用,其机制可能与上调心肌组织eNOS mRNA、下调iNOS mRNA表达有关。

局灶脑缺血/再灌注后nNOS、iNOSmRNA的表达

目的 :了解 n NOS m RNA和 i NOSm RNA在局灶性脑梗死表达中的时程变化与细胞定位。方法 :鼠局灶性脑缺血 /再灌注模型 ;用原位杂交技术进行缺血 /再灌注后 1,3,5天 n NOS m RNA、i NOSm RNA表达的细胞定位并用点杂交方法测量不同时间段梗死半球与非梗死半球内 n NOS m RNA、i NOSm RNA水平。结果 :正常鼠 n NOSm RNA以神经元表达为主 ,i NOSm RNA无表达 ,梗死后 i NOSm RNA表达以小胶质细胞为主 ,梗死区未见 n NOSm RNA;n NOSm RNA表达从 4h就开始下降 ,1～ 3天最低 ,5天左右又上升 ,i NOSm RNA在缺血再灌注后 12 h开始表达 ,1天左右升至高峰 ,3天左右缓慢下降。结论 :n NOSm RNA在缺血损伤后有一短暂表达增高 ,而在缺血损伤 4h后就开始缓慢下降 ;而 i NOSm RNA在缺血 /再灌注后 12 h开始表达 ,高峰在 1天左右 ,3天左右开始下降 ,其细胞定位以小胶质细胞为主。

热射病大鼠中eNOS和iNOS基因的表达

目的研究热射病大鼠中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达。方法构建经典型和劳力型热射病大鼠模型,利用实时荧光定量PCR方法检测不同热射病大鼠模型的脑、肝、肾和心脏组织中eNOS和iNOS基因的表达情况。结果 2种热射病大鼠中,eNOS和iNOS mRNA在脑、肝、肾和心脏组织中的表达量均高于对照组;eNOS mRNA在劳力型热射病大鼠各器官中的表达量高于经典型热射病大鼠(P<0.05);iNOS mRNA在经典型热射病大鼠的脑、肝和肾组织中的表达量低于劳力型热射病大鼠(P<0.05),在心脏组织中,二者无显著性差异(P>0.05)。结论eNOS和iNOS mRNA的上调表达在热射病发病机制中发挥重要作用。

生后不同发育阶段大鼠卵巢内eNOS和iNOS的表达

目的观察eNOS和iNOS在卵巢中的表达,并探讨其意义。方法采用免疫组化和图像分析系统检测大鼠生后各发育阶段卵巢中eNOS和iNOS的定位分布和表达。结果 0 d大鼠卵巢卵母细胞eNOS和iNOS均呈弱阳性反应;4 d后,eNOS和iNOS在正常卵母细胞中均呈强阳性,退化卵母细胞中反应非常弱;卵泡细胞与膜细胞中的iNOS在30 d前均呈强阳性表达,30 d后,生长卵泡中表达降低,闭锁卵泡中较正常生长卵泡表达增强,eNOS的表达稳定;240 d后卵巢内间质成分和闭锁卵泡增多,间质中的iNOS表达增强。360d后大鼠卵巢逐渐纤维化,iNOS染色强于eNOS。结论大鼠不同发育时期卵巢中,eNOS的表达相对稳定;iNOS的表达以性成熟后育龄期最低,随着年龄增加及卵巢功能的衰退,其表达逐渐增高。

心脏骤停复苏犬脑组织iNOS mRNA nNOS mRNA的表达及中药的干预作用

目的:探讨复苏饮对犬心脏骤停复苏后iNOSmRNA、nNOSmRNA表达的影响。方法:在自主循环恢复180min,以逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组海马组织iNOSmRNA、nNOSmRNA表达的情况。结果:iNOSmRNA在假手术组未发现表达,nNOSmRNA有表达,模型组、复苏饮组iNOSmRNA、nNOSmRNA的表达均比假手术组的表达明显增高(P<0.01,P<0.05),模型组iNOSmRNA、nNOSmRNA表达又明显高于复苏饮(P<0.05)。结论:复苏饮抑制iNOSmRNA、nNOSmRNA的表达,是其脑保护作用机制之一。

iNOS和eNOS在严重急性呼吸综合症肺标本中的表达和意义

将确诊的SARS病人肺标本用甲醛固定，常规石蜡切片，厚度6μm，其他非SARS肺标本为对照标本。采用免疫组织化学技术LSAB法，第一抗体为iNOS和eNOS，所有实验结果进行使用Motic-CMIAS多功能病理彩色图像分析系统图像分析，测定指标为平均光密度（AOD），每个病例测试25个视野。结果显示，iNOS阳性反应部位表现为肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞、中性粒细胞和血管内皮细胞等；eNOS阳性反应部位表现为血管内皮细胞和部分间质细胞。iNOS部分，2个SARS标本与正常和其它病理标本比较有较明显差异；eNOS部分，各个标本之间没有明显差异。

雄激素致无排卵大鼠卵巢nNOS、eNOS、ET-1的表达

目的观察雄激素致无排卵大鼠(ASR)血浆及卵巢血管舒张因子一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(nNOS、eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)、血管收缩因子内皮素1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)的变化,探讨卵巢血管舒-缩因子在无排卵发病机制中的作用。方法建立雄激素致无排卵大鼠模型,分为模型组和正常组。采用放射免疫法测定模型组、正常组大鼠血浆NO、cGMP、ET-1、ATⅡ以及血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)含量;采用免疫组化法检测大鼠卵巢nNOS、eNOS、ET-1表达;采用HE染色观察大鼠卵巢组织形态学变化。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆NO、cGMP含量降低(P<0.01),血浆ET-1、ATⅡ含量升高(P<0.01)。血清E2、T含量及E2/P显著升高(P<0.01),血清P含量无统计学差异(P>0.05);与正常组比较,模型组大鼠卵巢颗粒细胞以及髓质nNOS、eNOS表达减弱(P<0.01),ET-1表达增强(P<0.01);正常组大鼠卵巢皮质可见发育期各级卵泡及黄体;模型组大鼠卵巢皮质卵泡囊状扩张,颗粒细胞层极薄。结论雄激素致无排卵大鼠血浆及卵巢血管舒张因子降低、收缩因子增高,可能使卵巢血液供应障碍、颗粒细胞凋亡,导致卵泡在排卵前闭锁,无排卵的发生。

葛根素对心肌梗死大鼠心肌iNOS，eNOS蛋白表达及AKT磷酸化水平的影响

目的:探讨葛根素诱导血管生成的分子机制。方法:通过大鼠心肌梗死动物模型,运用Western-blot的方法检测心肌iNOS、eNOS,AKT,p-AKT的蛋白表达。结果:葛根素120mg/kg腹腔注射四周能不同程度增加心肌梗死大鼠缺血区域和非缺血区域心肌eNOS蛋白表达以及AKT磷酸化水平,而对iNOs蛋白表达没有明显的影响。结论:葛根素诱导血管生成作用的分子机制与其促进AKT磷酸化水平,从而激活eNOS,使NO生成增加有关。