喉癌肿瘤组织NOC2L、p53表达及其临床价值研究

目的检测喉癌肿瘤组织中NOC2L、p53 mRNA表达并研究其临床价值。方法选取2020年1月—2022年1月武汉大学附属同仁医院诊治的喉癌患者103例(喉癌组)和喉良性疾病患者57例(对照组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测组织NOC2L、p53 mRNA表达。比较喉癌不同临床病理特征中肿瘤组织NOC2L、p53 mRNA表达差异。受试者工作特征(ROC)曲线分析肿瘤组织NOC2L、p53表达预测喉癌患者预后不良的价值;多因素Cox回归模型分析喉癌预后不良的危险因素;Kaplan-Meier模型分析NOC2L、p53表达对喉癌生存期的影响。结果与对照组比较,喉癌组患者NOC2L表达升高,p53表达降低(t/P=19.307/<0.001、13.726/<0.001)。组织学分级3级、原发肿瘤大小≥3 cm、转移淋巴结数N2~3、远处转移M1及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期喉癌患者肿瘤组织NOC2L mRNA表达高于组织学分级1~2级、原发肿瘤大小<3 cm、转移淋巴结数N0~1、远处转移M0及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者(t/P=3.681/0.001、4.167/<0.001、2.554/0.012、4.005/<0.001、3.228/<0.001),p53 mRNA表达低于组织学分级1~2级、原发肿瘤大小<3 cm、转移淋巴结数N0~1、远处转移M0及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者(t/P=4.162/<0.001、4.789/<0.001、4.053/<0.001、3.492/<0.001、3.724/<0.001);NOC2L、p53及二者联合预测喉癌预后不良的AUC分别为0.756、0.712、0.917,二者联合优于各自单独预测效能(Z=7.238、8.102,P<0.001)。NOC2L≥0.73、p53≤0.65、组织学分级3级、原发肿瘤大小≥3 cm、转移淋巴结数N2~3、远处转移M1及TNM分期Ⅲ~Ⅳ期为喉癌预后不良的独立危险因素[HR(95%CI)=5.328(1.455~9.201)、4.200(1.279~7.122)、1.992(1.127~2.857)、2.164(1.099~3.299)、2.228(1.304~3.152)、2.406(1.131~3.681)、2.514(1.278~3.762)];NOC2L≥0.81且p53≤0.54喉癌患者中位生存期显著低于NOC2L<0.81或p53>0.54患者中位生存期(Log Rankχ^(2)=9.033,P<0.001)。结论喉癌患者NOC2L及p53表达与病情严重程度及生存期显著相关,可为喉癌病情及预后评估提供客观证据,NOC2L及p53联合检测可显著提高其临床价值。

NOC2L基因重组慢病毒表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

目的构建NOC2L基因重组慢病毒并使其在293T细胞中表达。方法通过设计引物及PCR扩增获得NOC2L全基因片段,将pCDH-GFP载体分别用XbaⅠ和BamHⅠ双酶切制备线性化载体;NOC2L全基因片段和线性化载体经切胶回收后,通过同源重组反应将NOC2L全基因片段连接到线性化的pCDH-GFP载体上,构建pCDH-NOC2L-GFP慢病毒表达载体;通过菌落PCR、质粒双酶切、测序等方法对构建的NOC2L基因重组慢病毒表达载体进行鉴定,利用构建的pCDH-NOC2L-GFP包装NOC2L慢病毒并使用该慢病毒感染293T细胞。结果菌落PCR、质粒双酶切和测序结果显示成功将NOC2L基因连接到pCDH-GFP载体上,使用构建成功的pCDH-NOC2L-GFP转染293T细胞,能够成功转染及包装NOC2L基因重组慢病毒,同时包装好的NOC2L基因重组慢病毒能够成功感染293T细胞并过表达293T细胞中的NOC2L基因。结论采用本研究方法能成功构建NOC2L基因重组慢病毒表达载体。