NLRP3炎性小体在治疗性浅低温后处理大鼠心肌缺血-再灌注中的作用

目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制。方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五组:空白对照组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注组(MH组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP组(HT组)和34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP+MCC950组(HTM组),每组12只。S组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏180 min;IR组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 37℃灌注液再灌注120 min;MH组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 34℃灌注液再灌注120 min;HT组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入沉默信息调节因子2同源蛋白3(sirt3)抑制剂3-TYP后行34℃灌注液再灌注120 min;HTM组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入sirt3抑制剂3-TYP和NLRP3抑制剂MCC950后行34℃灌注液再灌注120 min。再灌注120 min后取离体心脏,采用ELISA法测定灌注后心脏漏液中IL-1β、IL-6浓度,Western blot法检测心肌组织中NLRP3和sirt3蛋白相对含量,1%氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理变化。结果 与S组比较,IR组、MH组、HT组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显升高(P<0.05);IR组、HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低,NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3和NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05)。与IR组比较,MH组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3蛋白含量明显升高,NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05);HTM组心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与MH组比较,HT组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、±dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HT组比较,HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论 治疗性浅低温(34℃)可通过改善离体心脏血流动力学参数、降低IL-6、IL-1β浓度、心肌组织中NLRP3蛋白含量、心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变,减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与线粒体介导sirt3通路抑制炎性小体NLRP3的高表达有关。

P2X7R过表达的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达观察

目的观察嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7的配体(P2X7R)过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞单钠尿酸盐(MSU)晶体诱导痛风炎症反应过程中NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白、IL-1β、TNF-α表达情况。方法取人单核细胞白血病细胞系THP-1,并随机分为过表达组、空白组、模型组、对照组;过表达组和空白组分别转染P2X7R过表达质粒、空白载体质粒,转染5 d,将过表达组、空白组、模型组THP-1细胞用100 ng/mL的PMA刺激3 h后分化为巨噬细胞,另将MSU晶体用氢氧化钠溶解配制成浓度为100μg/mL的MSU乳糜状悬液加入培养液中孵育6 h;对照组正常培养。分别采用RT-PCR法和Western blot法测算巨噬细胞P2X7R mRNA、蛋白,ELISA法检测巨噬细胞上清液IL-1β、TNF-α,Western blot法测算巨噬细胞NOD样受体家族3(NLRP3)蛋白。结果与对照组比较,过表达组、空白组、模型组P2X7R mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05);与模型组、空白组比较,过表达组P2X7R mRNA、蛋白相对表达量升高,细胞上清液IL-1β、TNF-α水平升高,细胞NLRP3蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。结论P2X7R过表达白血病细胞诱导分化的巨噬细胞MSU晶体诱导痛风炎症反应过程中IL-1β、TNF-α、NLRP3表达增加,IL-1β、TNF-α水平升高可能通过激活NLRP3蛋白来实现。

急性脑梗死患者血清miR-22-3p、NLRP3水平与炎性因子及预后不良的关系

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小核糖核酸-22-3p(miR-22-3p)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平与炎性因子及预后不良的关系。方法选取2021年1月—2022年12月上海中医药大学附属第七人民医院神经内科收治ACI患者106例为ACI组,根据预后情况分为预后不良亚组37例和预后良好亚组69例,另选取同期体检健康者60例为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-22-3p水平,酶联免疫吸附法检测血清NLRP3和炎性因子[白介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。通过Pearson相关性分析ACI患者血清miR-22-3p、NLRP3与IL-1β、IL-18、TNF-α的相关性。分析ACI患者预后不良的影响因素,绘制2项指标的受试者工作特征(ROC)曲线分析其预测预后的价值。结果与健康对照组比较,ACI组血清miR-22-3p水平降低,NLRP3、IL-1β、IL-18、TNF-α水平显著升高(t/P=18.698/<0.001、27.091/<0.001、30.154/<0.001、35.104/<0.001、39.834/<0.001)。Pearson相关性分析显示,ACI患者血清miR-22-3p与NLRP3、IL-1β、IL-18、TNF-α水平呈负相关(r/P=-0.733/<0.001、-0.719/<0.001、-0.683/<0.001、-0.680/<0.001),血清NLRP3与IL-1β、IL-18、TNF-α水平呈正相关(r/P=0.716/<0.001、0.715/<0.001、0.707/<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,NIHSS评分、IL-1β、IL-18、TNF-α、NLRP3升高为ACI患者预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=1.244(1.034~1.497)、1.373(1.067~1.767)、1.047(1.011~1.086)、1.577(1.061~2.343)、1.084(1.022~1.149)],miR-22-3p升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.933(0.888~0.980)]。ROC曲线分析显示,血清miR-22-3p、NLRP3水平联合预测ACI患者预后不良的曲线下面积为0.875,大于两者单独预测的0.786、0.759(Z/P=2.405/0.016、2.517/0.012)。结论ACI患者血清miR-22-3p水平降低和NLRP3水平升高,与炎性因子水平升高和预后不良密切相关,血清miR-22-3p、NLRP3水平联合对ACI患者预后不良的预测价值较高。

电针抑制NLRP3炎性小体活化改善缺血性脑卒中的机制研究

目的观察电针对缺血性脑卒中大鼠神经行为学及脑组织结构的影响,探讨电针通过调控NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎性小体途径改善缺血性脑卒中大鼠神经功能的机制。方法36只健康雄性SD大鼠采用随机数字表随机分为假手术组12只及手术组24只,手术组大鼠采用Longa等改良线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)模型。术后2 h行神经行为学评分,造模成功的大鼠再随机分为模型组及电针组。电针组予电针“曲池”“足三里”连续干预7 d,假手术组及模型组不做干预。干预完成后分别评估各组大鼠神经功能缺损情况,HE染色观察脑组织病理学变化,QPCR及Western blot法检测炎性小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平,ELISA检测各组大鼠血清IL-1β和IL-18炎性因子表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能评分均显著提高,差异有高度统计学意义(P<0.01),脑组织缺血皮质区神经元胞体缩小变形,核固缩明显,大鼠脑组织缺血周围区炎性因子相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA及蛋白表达水平升高,差异有高度统计学意义(P<0.01),血清IL-1β和IL-18炎症因子表达增加,差异有高度统计学意义(P<0.01);经电针干预7 d后,电针组神经评分功能较模型组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),所见的病理损伤减少;炎性小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),且电针下调了血清IL-1β和IL-18的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论电针“曲池”“足三里”可减轻缺血性脑卒中大鼠神经功能缺损症状,减少脑组织病理损伤,下调NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平,其机制可能与调控NLRP3炎性小体途径抗细胞焦亡,减轻脑缺血再灌注损伤有关。

急性脑梗死患者外周血炎性小体NLRP3表达及与颅内动脉血栓病理成分、预后的相关性分析

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者外周血炎性小体NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达,并分析其与颅内动脉血栓病理成分、预后的相关性。方法 选取2022年1—12月收治的92例ACI作为观察组,另选取健康志愿者92例作为对照组,检测外周血NLRP3 mRNA、蛋白及血清水平。观察组行机械取栓治疗,采用HE染色法半定量分析血栓取出物,并分为红细胞富集血栓者、纤维蛋白富集血栓者。比较不同组别、不同血栓病理成分、不同预后患者外周血炎性小体NLRP3水平,分析其与血栓病理成分相关性及对预后不良风险的关系。结果 观察组NLRP3 mRNA、蛋白表达及血清水平高于对照组,红细胞富集血栓者高于纤维蛋白富集血栓者,且与红细胞富集血栓呈正相关(P<0.05,P<0.01);预后不良者NLRP3 mRNA、蛋白表达及血清水平高于预后良好者(P<0.01);NLRP3 mRNA、蛋白高表达及血清高水平患者预后不良风险分别是低表达、低水平患者的2.182、2.500、2.182倍(P<0.05)。结论 ACI患者外周血炎性小体NLRP3水平升高,且与颅内动脉红细胞富集血栓相关,可增加预后不良发生风险。

TLR4/NF-κB/NLRP3通路抑制炎症反应作用的研究

Toll样受体(TLRs)是参与非特异性免疫的一类重要的蛋白质,是表达与固有免疫细胞最重要的模式识别受体之一,可识别来源于微生物的具有保守结构的分子,即病原体相关分子模式(PAMAs),从而激活机体产生免疫应答。核因子κB(NF-κB)在几乎所有类型的细胞和组织中都有表达,在调节对外部刺激的显著多样性的反应中起着关键作用,因此是多个生理和病理过程中的关键因素。而核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),即NLRP3炎性小体通路在脑缺血再灌注和焦亡中具有重要意义,如NLRP3在脑缺血再灌注损伤时在小胶质细胞中被激活,随后在神经元和微血管内皮细胞中表达。由TLRs激活、NF-κB传递、NLRP3启动形成的TLR/NF-κB/NLRP3信号通路在机体各器官炎症反应中起到关键性作用,本文探讨了各类药物通过抑制该通路炎症反应,起到保护身体各大重要器官的作用。

抗炎通腑方对脓毒症急性肺损伤大鼠mtDNA-STING-NLRP3信号通路的影响

目的探讨抗炎通腑方对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的影响及作用机制。方法将35只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松(DEX)组、中药(TCM)组和TCM+DEX组,每组7只。分别给予相应药物灌胃、造模。酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及血清中巨噬细胞计数;采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测肺组织中干扰素基因刺激因子(STING)、磷酸化干扰素基因刺激因子(P-STING)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白信使核糖核酸(ASC mRNA)和相关蛋白的表达水平。测定肺组织湿/干比(W/D),观察肺组织病理学改变。检测肺组织中巨噬细胞表达情况。结果与正常组比较,各组指标显著升高;与模型组比较,DEX组、TCM组及TCM+DEX组各指标均显著降低。与模型组比较,TCM+DEX组改变最为明显,肺组织损伤改善,W/D值(4.77±0.29 vs.3.78±0.48)及巨噬细胞计数(13.39±2.06 vs.7.09±1.42)均降低(P<0.05),IL-6(152.51±22.27 vs.58.92±13.53)、IL-1β(126.19±10.02 vs.45.69±6.67)、IL-18(59.12±6.31 vs.31.75±4.23)及TNF-α(126.57±8.25 vs.49.59±8.12)水平均降低(P均<0.01),肺组织中线粒体DNA(mtDNA)损伤及释放、P-STING(0.32±0.03 vs.0.16±0.03)、STING mRNA(19.24±2.70 vs.0.32±0.16)、NLRP3 mRNA(20.03±5.06 vs.1.20±0.04)、ASC mRNA(16.96±4.31 vs.3.41±2.52)和相关蛋白的表达均降低(P<0.01)。结论抗炎通腑方可能通过调控mtDNA-STING-NLRP3信号通路减轻脓毒症ALI大鼠的炎症。

淫羊藿苷通过抑制Nod样受体家族蛋白3炎症小体相关蛋白表达抑制BV2小胶质细胞炎症反应

目的研究淫羊藿苷(ICA)靶向Nod样受体家族蛋白3(NLRP3)炎症小体抑制BV2小胶质细胞炎症反应的作用机制。方法用细菌脂多糖(LPS)+干扰素γ(IFN-γ)诱导小鼠BV2小胶质细胞,构建拟神经炎症反应的小胶质细胞模型。BV2细胞用DMEM高糖培养基培养,分为细胞对照组、ICA 10μmol·L^(-1)组、模型组及模型+ICA 5,10和20μmol·L^(-1)组。细胞对照和模型组加入DMEM高糖培养基培,ICA组加入ICA 10μmol·L^(-1),模型+ICA组分别加入相应浓度的ICA,孵育24 h;随后模型和模型+ICA组加入LPS 100μg·L^(-1)和IFN-γ20μg·L^(-1),细胞对照和ICA组用等体积培养基代替,孵育18 h;最后模型+ICA组加入相应浓度的ICA,其他各组加入等体积培养基,继续孵育24 h。用Luminex法检测细胞上清中白细胞介素3(IL-3)、IL-5、IL^(-1)7和单核/巨噬细胞趋化因子11(CCL11)含量;用细胞免疫荧光染色法检测CD16/CD32(M1型小胶质细胞标志物)阳性和D206(M2型小胶质细胞标志物)阳性细胞百分比;Western印迹法检测细胞NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1和胱天蛋白酶原1蛋白表达。结果①Luminex法检测结果显示,与细胞对照组相比,细胞+ICA组细胞上清中IL-3,IL-5,IL^(-1)7和CCL11水平无明显变化,模型组均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,模型+ICA 20μmol·L^(-1)组上述细胞因子水平均降低(P<0.05,P<0.01)。②细胞免疫荧光染色结果显示,与细胞对照组相比,ICA组CD16/CD32和CD206阳性细胞百分比无明显变化;模型组CD16/CD32阳性细胞百分比明显增加(P<0.01),CD206阳性细胞百分比显著减少(P<0.01)。与模型组相比,模型+ICA 10和20μmol·L^(-1)组CD16/CD32阳性细胞百分比明显减少(P<0.01),CD206阳性细胞百分比显著增加(P<0.01)。③Western印迹法结果显示,与细胞对照组相比,ICA组NLRP3、ASC、胱天蛋白酶1和胱天蛋白酶原1蛋白表达均无明显变化;模型组NLRP3、ASC和胱天蛋白酶1蛋白表达增多(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶原1蛋白表达明显减少(P<0.05)。与模型组相比,模型+ICA 5,10和20μmol·L^(-1)组NLRP3、ASC和胱天蛋白酶1蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01),胱天蛋白酶原1表达无明显变化。结论ICA可减轻LPS和IFN-γ联合诱导的BV2细胞拟神经炎症反应,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体相关蛋白表达有关。

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3对哮喘小鼠气道炎症反应及细胞焦亡的调控作用

目的研究NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nod-like receptor,pyrin domaincontaining 3,NLRP3)对哮喘小鼠气道炎症反应及细胞焦亡的调控作用。方法将NLRP3野生型(wild type,WT)C57BL/6J小鼠分为NLRP3-WT对照组、NLRP3-WT哮喘组,NLRP3敲除(knockout,KO)小鼠分为NLRP3-KO对照组、NLRP3-KO哮喘组,每组各10只。采用卵白蛋白+氢氧化铝腹腔注射致敏、卵白蛋白吸入激发的方法建立哮喘模型。检测各组小鼠气道反应性指标增强呼气间歇;苏木精-伊红染色观察各组小鼠肺组织形态学改变,并进行炎症评分;收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液,计数中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数目,并检测白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18含量;采用Western blot法检测各组小鼠肺组织中NLRP3、裂解型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1、Gasdermin D-N表达水平的差异。结果与NLRP3-WT对照组相比,NLRP3-WT哮喘组小鼠肺组织出现气道平滑肌增厚、炎性细胞浸润等形态学改变;NLRP3-KO哮喘组小鼠上述形态学表现较NLRP3-WT哮喘组小鼠明显改善。与NLRP3-WT对照组相比,NLRP3-WT哮喘组小鼠增强呼气间歇、肺组织炎症评分,支气管肺泡灌洗液中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数及IL-1β、IL-18含量,肺组织中NLRP3、裂解型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1、Gasdermin D-N的表达水平均升高(P<0.05);NLRP3-KO哮喘组小鼠上述各检测指标水平均低于NLRP3-WT哮喘组(P<0.05)。结论NLRP3高表达与哮喘发病有关,激活气道炎症反应及细胞焦亡可能是与之相关的分子机制。

熊果酸对脂多糖诱导胃癌细胞增殖、炎症反应的影响及其与NLRP3炎症小体的关系

目的观察熊果酸(UA)对脂多糖(LPS)诱导的胃癌细胞增殖及炎症反应的影响,并探讨该作用是否与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体有关。方法取人胃癌细胞系HGC-27、SGC-7901、BGC-823、MGC-803、AGS及正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1,RT-q PCR法检测各细胞系中NLRP3表达。将NLRP3表达最高的胃癌细胞BGC-823分为空白对照组、LPS组、LPS+MCC950组及LPS+UA组,LPS组加入100 ng/m L的LPS、LPS+MCC950组加入50μmol/L的NLRP3抑制剂MCC950及100 ng/m L的LPS、LPS+UA组加入50μmol/L的UA及100 ng/m L的LPS,空白对照组不做任何处理。采用CCK-8法观察各组细胞增殖能力,Western blotting、RT-q PCR法检测各组细胞NLRP3蛋白和m RNA,RT-q PCR法检测各组细胞炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)m RNA。结果各时点细胞存活率LPS组>空白对照组>LPS+MCC950组、LPS+UA组,NLRP3蛋白和m RNA表达LPS组>LPS+MCC950组、LPS+UA组>空白对照组,IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-αm RNA表达LPS组>LPS+MCC950组、LPS+UA组>空白对照组(P均<0.05)。结论UA可抑制LPS诱导的胃癌细胞BGC-823细胞增殖及炎症反应,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体的激活有关。

槲皮素调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路对大鼠分泌性中耳炎的作用机制

目的 探究槲皮素(quercetin, Que)对大鼠分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)的作用及机制。方法 选取雄性SD大鼠48只,随机性分为对照组(Control)、模型组(Model)、Que组(100 mg·kg^(-1))、Que+p38 MAPK激动剂组(100 mg·kg^(-1)Que+2 mg·kg^(-1)Anisomycin),每组各12只。除Control组外,其余各组大鼠均采取腹腔注射卵清蛋白复制分泌性中耳炎大鼠模型,造模成功后,各组大鼠进行相应干预21 d。给药干预结束后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠中耳组织形态学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IFN-γ、IL-4水平;实时定量PCR (RT-qPCR)和Western blot检测中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路相关mRNA及蛋白表达变化。结果 与Control组相比,Model组大鼠表现中耳内黏膜层增厚,伴有大量炎性细胞浸润,血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IL-4增加,IFN-γ降低(P <0.01),中耳黏膜组织p-p38MAPK/MAPK、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白及mRNA表达水平均明显升高(P <0.01)。与model组相比,Que能够明显改善中耳内黏膜增厚,抑制炎性细胞浸润,降低TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18、IL-4及中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路mRNA和蛋白表达,升高IFN-γ(P <0.05或P <0.01)。与Que组相比,Anisomycin能够逆转Que对SOM大鼠的保护作用。结论 Que能够有效改善SOM发生、发展,其机制与抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路介导的炎性反应相关。

基于NLRP3/caspase-1通路研究木犀草素对脂多糖诱导的肠上皮细胞焦亡的影响

目的探讨木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的肠上皮细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路的影响。方法体外培养人肠上皮细胞HIEC-6,对其进行(1.0μg/mL)LPS诱导,并将细胞分为对照组、LPS组、LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组、木犀草素+NLRP3激活剂尼日利亚菌素钠盐(NSS)组,除对照组外均添加1.0μg/mL的LPS。MTT法检测各组细胞活力;电阻仪检测单层上皮跨膜电阻(TEER);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测各组细胞焦亡相关蛋白(GSDMD、GSDMD-N)及NLRP3、caspase-1、IL-1β的表达。结果与对照组比较,LPS组HIEC-6细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、蛋白GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组HIEC-6细胞活力、TEER值显著升高,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著降低(P<0.05);与LPS+100μmol/L木犀草素组比较,木犀草素+NSS组HIEC细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.05)。结论木犀草素能够减轻LPS诱导的人肠上皮细胞HIEC-6焦亡和细胞炎性损伤,可能与NLRP3/caspase-1信号通路的抑制有关。

红花黄色素调节NF-κB/NLRP3信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响

目的:探究红花黄色素(CY)调节核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对心肌梗死(MI)大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响。方法:通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MI模型。并将72只SPF级雄性大鼠分为:对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、低剂量CY组(CY-L组,20mg/kg)、高剂量CY组(CY-H组,40mg/kg)和高剂量CY+NF-κB激活剂组(CY-H+LPS组,CY 40mg/kg+LPS 10mg/kg),每组12只。造模后腹腔注射给药,1次/d,共28d。给药结束后对各组大鼠进行超声心电图检查,检测心功能变化情况。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)-伊文斯蓝(EB)法和免疫荧光法检测各组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞焦亡比例。苏木素伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理学变化。试剂盒检测大鼠心肌中白细胞介素(IL)-1β、IL-18和乳酸脱氢酶(LDH)水平。Western Blot检测心肌组织中NF-κB、NLRP3、cleaved-caspase1、胃泌素D-N(GSDMD-N)蛋白表达。结果:与Sham组相比,Model组大鼠心肌组织病理损伤严重,心功能降低,心肌梗死面积、心肌细胞焦亡比例、心肌组织中IL-1β、IL-18、LDH水平和NF-κB、NLRP3、GSDMD-N、cleaved-caspase1蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。与Model组相比,CY-L组、CY-H组大鼠心功能显著提高,心肌组织损伤减轻,细胞焦亡减少,炎症因子IL-1β、IL-18、LDH水平显著下降,NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达显著降低(P<0.05)。LPS减弱了高剂量CY对MI大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论:CY可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路,减少MI大鼠心肌细胞的焦亡和炎性损伤。

二陈汤对PCOS大鼠卵巢中NF-κB和NLRP3介导炎症反应的调控作用

目的研究二陈汤对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢中核因子-κB(factor-kappa-B,NF-κB)和NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)介导炎症反应的调控作用及意义。方法将成年雌性SD大鼠随机分成空白对照组、PCOS组、二陈汤组、二甲双胍组。空白对照组给予普通饲料喂养,PCOS组、二陈汤组和二甲双胍组均采用来曲唑灌胃联合高脂饲料喂养的方式进行PCOS造模;空白对照组和PCOS组进行生理盐水灌胃,二陈汤组进行二陈汤灌胃,二甲双胍组进行二甲双胍灌胃,共30 d。采用HE染色检测卵巢组织形态学变化;采用试剂盒检测血清黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、睾酮(testosterone,T)、抗米勒管激素(anti mullerian hormone,AMH)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用Western blot检测卵巢组织中TLR4、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平。结果PCOS组大鼠卵巢组织中可见大量囊状扩张卵泡和闭锁卵泡,未见优势卵泡,黄体减少;血清LH、T、AMH、TC、TG、FBG、FINS、CRP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,LH-FSH、HOMA-IR水平,卵巢组织中TLR4、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平高于空白对照组(P<0.05),血清FSH、E2水平低于空白对照组(P<0.05)。二陈汤组和二甲双胍组卵巢组织中可见各级卵泡、黄体增多;血清LH、T、AMH、TC、TG、FBG、FINS、CRP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,LH-FSH、HOMA-IR水平,卵巢组织中TLR4、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平低于PCOS组,血清FSH、E2水平高于PCOS组(P<0.05)。结论二陈汤可显著改善PCOS大鼠的卵巢形态学特征、内分泌紊乱并减轻炎症状态,抑制卵巢组织中NF-κB和NLRP3介导的炎症反应可能是相关的分子机制。

高脂饮食致非酒精性脂肪性肝病大鼠小肠、肝脏中NOD样受体蛋白3及相关炎症因子的表达

目的 观察高脂饮食致非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠小肠、肝脏中NOD样受体蛋白3(NLRP3)及相关炎症因子表达情况。方法 SD雄性大鼠20只适应性喂养1周后,随机分为正常组、模型组,每组10只,正常组普通饲料喂养,模型组高脂饲料喂养。8周末取材,观察肝HE及油红O染色病理切片,检测各组血清和肝脏中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、白介素-18(IL-18)、白介素-1β(IL-1β)。RT-PCR、免疫组化检测肝、肠NLRP3表达。结果 与正常组相比,模型组大鼠肝脏表现出明显的脂肪变性和炎性病变,肝脏、血清中ALT、AST、TG显著升高(P<0.05),TC升高,差异不明显,IL-18、IL-1β显著升高(P<0.05);肝脏、小肠NLRP3表达量亦显著升高(P<0.05)。结论 NAFLD可引起大鼠小肠、肝脏中NLRP3及相关炎症因子上调。

川陈皮素调节Notch/NF-κB/NLRP3信号通路对类风湿关节炎大鼠炎性损伤的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节神经源性基因同源蛋白(Notch)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对类风湿关节炎(RA)大鼠炎性损伤的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、NOB低剂量组(NOB-L组,50 mg/kg)、NOB高剂量组(NOB-H组,100 mg/kg)、NOB高剂量+Notch激活剂Jagged1组(NOB-H+Jagged1组,100 mg/kg NOB+50 mg/kg Jagged1)。于给药第0天与末次给药后对各组大鼠进行关节炎指数评价。自给药第0天开始,每7天测定1次大鼠足趾肿胀度。计算各组大鼠胸腺和脾脏指数;HE染色观察每组大鼠踝关节滑膜足趾病理学变化;ELISA法检测各组大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平;RT-qPCR法测定各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA表达;Western blot检测各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NLRP3蛋白表达。结果1)RA的病情进展:与Control组相比,Model组大鼠关节炎指数和足趾肿胀度显著上升(P<0.05),滑膜组织病理学损伤严重。2)大鼠脏器指数及炎性因子变化:与Control组相比,Model组大鼠胸腺和脾脏指数显著上升(P<0.05),血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升(P<0.05)。3)Notch/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达变化:与Control组相比,Model组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA和蛋白、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Model组相比,NOB-L、NOB-H组相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05),滑膜组织病理学损伤有所减轻。Jagged1减弱了NOB对RA大鼠炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论NOB可能通过下调Notch/NF-κB/NLRP3信号通路,减轻RA大鼠的炎性损伤。

甘草酸通过ROS依赖性NLRP3炎性通路减轻缺氧H9c2细胞损伤的实验研究

目的:观察甘草酸(GA)对缺氧H9c2细胞炎症、氧化应激的影响,并探讨其潜在作用机制。方法:将正常培养的H9c2细胞设置为对照组,缺氧培养H9c2细胞设置为缺氧组;GA、GA+N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)处理的缺氧H9c2细胞设置为缺氧+GA组、缺氧+GA+NAC组;将生理盐水、双蒸水+GA处理的缺氧H9c2细胞设置为缺氧+生理盐水组、缺氧+GA+双蒸水组。采用细胞计数试剂盒(CCK8)、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色法测定细胞增殖;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS);实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞NOD样受体蛋白3(NLPR3)mRNA表达。结果:与对照组比较,缺氧组H9c2细胞存活率、EdU阳性率均降低,细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA含量及ROS、NLRP3 mRNA水平均升高,SOD含量降低(P<0.05);与缺氧+生理盐水组比较,缺氧+GA组H9c2细胞存活率、EdU阳性率均升高,细胞上清TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA含量及ROS、NLRP3 mRNA水平均降低,SOD含量升高(P<0.05)。与缺氧+GA+双蒸水组比较,缺氧+GA+NAC组H9c2细胞ROS、NLRP3及TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA降低,SOD含量升高(P<0.05)。结论:GA可减轻缺氧诱导H9c2细胞的炎症、氧化应激反应,其机制与抑制ROS依赖性NLRP3炎性通路有关。

卡格列净联合阿卡波糖对2型糖尿病患者miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平的影响

目的探讨卡格列净联合阿卡波糖对2型糖尿病患者微小RNA(miR)-144、NOD样受体3炎性小体(NLRP3)mRNA及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平的影响。方法选取2019年7月至2020年7月该院收治的2型糖尿病患者186例,依据随机数字表法分为单药治疗组、联合治疗组,每组93例。比较两组患者治疗前后血糖、胰岛素、炎症因子、miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平及治疗效果。结果与单药治疗组比较,联合治疗组治疗后餐后2 h血糖、空腹血糖、糖化血红蛋白水平更低(P<0.05),治疗后两组餐后2 h胰岛素、空腹胰岛素水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组血清白细胞介素(IL)-1β、IL-17A、IL-23水平降低,联合治疗组血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平低于单药治疗组(P<0.05)。与单药治疗组比较,治疗后联合治疗组血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平降低(P<0.05)。联合治疗组治疗有效率高于单药治疗组(P<0.05)。结论采用卡格列净联合阿卡波糖对2型糖尿病患者进行治疗,可降低患者血糖,改善胰岛素抵抗,有效性好。

NLRP3炎性小体水平检测在非霍奇金淋巴瘤患者免疫治疗相关细胞因子风暴及化疗相关间质性肺炎中的预测价值分析

目的分析NOD样受体家族3(NLRP3)炎性小体水平检测在非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者免疫治疗相关细胞因子风暴(CRS)及化疗相关间质性肺炎(IP)中的预测价值。方法回顾性分析2019年3月—2021年4月在北京协和医院血液内科接受嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫治疗联合化疗的NHL患者125例临床资料,按照CAR-T免疫治疗期间是否出现CRS分为CRS组(n=99)、非CRS组(n=26),比较2组一般资料、基线外周血NLRP3炎性小体各基因mRNA表达、炎性细胞因子、血常规、血生化指标水平,经双变量Preason相关性分析NLRP3炎性小体表达与炎性细胞因子水平的相关性;根据化疗期间是否出现IP分为IP组(n=28)、非IP组(n=97),比较2组一般资料、基线外周血NLRP3炎性小体各基因mRNA表达及血常规、血生化指标水平;多因素Logistic回归分析影响NHL患者CRS、IP发生的危险因素;ROC曲线分析NLRP3炎性小体表达预测NHL患者CRS、IP发生的价值。结果CRS组外周血NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的mRNA表达水平均高于非CRS组(t/P=9.546/<0.001、3.456/0.001、4.386/<0.001);CRS组外周血C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、乳酸脱氢酶(LDH)水平均高于非CRS组(P<0.01);双变量Preason相关性显示,CRS患者外周血NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达均与CRP、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α、LDH水平呈正相关(P<0.01)。IP组外周血NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达水平均高于非IP组(t=27.931、4.890、6.319,P均<0.001);IP组血常规、血生化相关指标水平与非IP组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达升高均是影响NHL患者CRS、IP发生的危险因素(P<0.05);绘制ROC结果显示,NLRP3、ASC、Caspase-1及三者联合预测NHL患者CRS发生的AUC分别为0.890、0.715、0.800、0.916,预测IP发生的AUC分别为0.901、0.868、0.880、0.935。结论NHL初诊时NLRP3炎性体信号通路的异常活化与炎性细胞因子水平相关,且NLRP3炎性小体表达水平是影响CRS及IP发生的危险因素,可有效预测CRS及IP发生。

粉葛水提物对2型糖尿病db/db小鼠胰岛细胞炎症损伤的改善作用及其机制

为探讨粉葛水提物对2型糖尿病db/db小鼠胰岛细胞炎症损伤的作用及机制,将30只db/db小鼠随机分为模型组、粉葛水提物高、中、低剂量组和二甲双胍组,正常组则采用6只db/m小鼠。持续给药8周后,测量小鼠体质量变化、计算胰重比、检测血清空腹胰岛素(fasting serum lisulin,FINS)、血清空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP),计算胰岛素抵抗指数(homeostasis model assess-ment for insulin resistance,HOMA-IR);苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察胰腺组织病理学变化;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法检测胰岛细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、核因子-κBp65(nuclear factor kappa-Bp65,NF-κBp65)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的蛋白表达;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)法检测胰腺组织寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(cystein-asparate protease 1,caspase-1)、白细胞介素1β(interle-ukin-1β,IL-1β)、IL-18的蛋白表达;免疫荧光(immunofluorescence,IF)法检测胰腺组织NLRP3的表达。结果表明:与正常组比较,模型组小鼠体质量、胰重比、血清GSP、FBG、FINS含量、HOMA-IR水平明显增加;胰岛细胞变形,出现炎性浸润,胰岛细胞和腺泡细胞边界不清晰,TNF-α、NF-κBp65和IL-18的蛋白表达量明显增加;胰腺组织中相关蛋白表达量明显升高。与模型组比较,二甲双胍和粉葛水提物组体质量、胰重比、血清GSP、FBG、FINS明显降低;胰岛细胞形态完整且边界清晰,炎性浸润明显降低,可见较多胰岛细胞,TNF-α、NF-κBp65和IL-18的蛋白表达量明显减少;胰腺组织中相关蛋白表达量明显降低。综上,粉葛水提物可以减轻db/db小鼠胰岛细胞的炎症损伤,降低胰岛素抵抗,改善2型糖尿病症状。其作用机制可能与抑制NLRP3炎性小体通路及其下游炎症因子IL-1β和IL-18的分泌有关。