微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。

宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3炎症小体的活化调节与牙周疾病的关系

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员(NLRP)3炎症小体是一种位于细胞质内的多蛋白质复合体,由其核心成分感知病原体和宿主危险信号后组装而成,通过激活半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1致促炎因子白细胞介素(IL)-1β成熟与分泌参与免疫炎症反应。牙周病是由宿主和微生物因素相互作用导致的局部炎症反应,而IL-1β又是牙周炎发病的关键因素之一。IL-1β的成熟和分泌与NLRP3炎症小体密切相关,且牙周致病菌可调节该炎症小体的表达及活化,因此NLRP3炎症小体对牙周疾病的发生发展和治疗具有重要意义。本文就NLRP3炎症小体的生物学功能、活化机制及其在牙周病学领域的研究进展作一综述。

穴位埋线调控NOD样受体热蛋白结构域3/半胱氨酸蛋白酶-1信号通路抗溃疡性结肠炎损伤的机制研究

目的:观察穴位埋线对“虚、瘀”状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用及对NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)信号通路的调控作用,探讨穴位埋线治疗UC的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组10只和造模组48只,采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃,再予2,4,6-三硝基苯磺酸与乙醇复合物灌肠复制“虚、瘀”状态下UC大鼠模型。造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、非穴位埋线组和穴位埋线组,每组11只。穴位埋线组选“足三里”“天枢”“肾俞”等穴进行穴位埋线治疗,非穴位埋线组于大鼠臀部肌肉丰厚处进行埋线治疗,每14 d治疗1次,共治疗3次;SASP组予SASP溶液(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,每日1次,共治疗42 d。观察大鼠一般情况,计算大鼠疾病活动指数(DAI);测量各组大鼠结肠长度;肉眼评估结肠黏膜大体病理学改变,并进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;HE染色评估结肠组织病理学改变,进行结肠病理损伤(TDI)评分;ELISA法检测各组大鼠血清NLRP3、白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量;荧光定量PCR法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β及IL-18 mRNA水平;Western blot法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平;免疫组织化学染色法检测结肠组织ASC阳性表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),结肠长度明显缩短(P<0.01),结肠黏膜形成明显溃疡面,隐窝破坏明显,大量炎性细胞浸润,DAI、CMDI及TDI评分升高(P<0.01),血清中NLRP3、IL-1β及IL-18含量升高(P<0.01),结肠组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA水平和Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,穴位埋线组和SASP组体质量升高(P<0.01),大鼠结肠长度增长(P<0.01),结肠黏膜病理损伤明显减轻,DAI、CMDI及TDI评分显著降低(P<0.01),血清中NLRP3、IL-1β及IL-18含量显著降低(P<0.01),结肠组织内NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA和Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。穴位埋线组各指标较非穴位埋线组均有明显改善(P<0.01)。结论:穴位埋线可通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路抑制炎性小体活化,缓解UC大鼠的炎性反应。

温针灸对兔膝骨关节炎软骨中ASC、Caspase-1和P2X7蛋白表达的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎(KOA)模型兔关节软骨组织中凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、嘌呤能离子通道型受体7(P2X7)表达的影响,研究温针灸治疗KOA的作用机制。方法 取40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、抑制剂组和温针灸组,每组10只。除空白组外,其余各组采用经典右后肢膝关节伸直位,用石膏管型固定4周制备兔KOA模型。造模成功后,各组给予相应干预措施。应用Lequesne MG评分量表评估兔膝关节状态改变与行为学改变,HE染色观察膝关节软骨病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测软骨组织中ASC、Caspase-1、P2X7蛋白的表达,免疫荧光检测Caspase-1蛋白的表达。结果 造模前,各组实验兔Lequesne MG评分差异无统计学意义(P>0.05);造模后,与空白组相比,其余组Lequesne MG评分均上升(P<0.05);干预治疗后,与模型组比较,温针灸组和抑制剂组评分降低(P<0.05)。HE染色显示,空白组软骨表面结构完整,软骨细胞排列均匀;模型组软骨表面粗糙不平,软骨受损明显,软骨细胞形态大小不一,排列紊乱;抑制剂组和温针灸组软骨表面相对光滑、完整,软骨细胞分布较为均匀,软骨层结构相对清晰。与空白组比较,模型组Mankin’s评分升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组Mankin’s评分降低(P<0.05)。免疫组织化学法、免疫荧光及Western blot检测结果显示,与空白组比较,模型组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均升高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组和抑制剂组ASC、Caspase-1、P2X7的表达均降低(P<0.05);温针灸组和抑制剂组相比,ASC、Caspase-1、P2X7表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 温针灸可减轻兔KOA软骨损伤,其机制可能与ASC、Caspase-1、P2X7表达降低及细胞焦亡抑制有关。

细胞焦亡相关蛋白在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系

目的:探究细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系。方法:选择2020年1月至2023年1月于常熟市中医院妇产科就诊并分娩的胎膜早破孕妇135例作为观察组,另选择同期产检并分娩的健康孕妇135例作为对照组,比较两组孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达。依据妊娠结局将135例胎膜早破孕妇分为妊娠不良组(n=50)和妊娠良好组(n=85),通过单因素和多因素Logistic分析胎膜早破孕妇妊娠不良的独立危险因素;应用Logistic回归模型结合限制性立方样条(restricted cubic splines,RCS)分析胎膜早破孕妇胎膜组织中细胞焦亡相关蛋白表达量与妊娠不良的剂量反应关系;依据独立因素构建列线图预测模型,并对模型进行验证。结果:观察组胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达显著高于对照组(P<0.001)。就诊时间≥2 h、生殖道感染、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA高表达是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素(P<0.05);RCS结果显示,胎膜早破孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA表达量与妊娠结局不良呈非线性剂量反应关系,在NLRP3 mRNA表达量为1.20(OR=1.818,95%CI:1.673~1.932)和Caspase-1 mRNA表达量为1.25(OR=2.735,95%CI:1.132~3.821)处发生妊娠结局不良的风险最大;构建的列线图预测模型具有良好的区分度、准确性和临床适用性。结论:NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA在胎膜早破孕妇胎膜组织中呈高表达,二者是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素,随着表达量升高,胎膜早破孕妇妊娠不良的危险性也随之升高。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期舒张功能的分子机制

目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)/消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)通路探讨其潜在的分子作用机制。方法40只自发性高血压大鼠高盐高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素溶液建立HFpEF早期大鼠模型,分为HFpEF组、恩格列净组(1.8 mg/kg)、苓桂气化方低剂量组(4.96 g/kg)、苓桂气化方高剂量组(9.92 g/kg),予相应药物灌胃;正常血压组、空白组予等剂量生理盐水灌胃,连续干预9周。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(left atrial diameter,LAD)、舒张早期二尖瓣血流速度(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)与舒张晚期二尖瓣血流速度(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)比值、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);酶联免疫吸附测定法检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;苏木精—伊红染色观察心肌组织病理变化;蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果与正常血压组相比,HFpEF组LAD和E/A增加(P<0.05),LVEF无明显变化(P>0.05);血清ANP含量升高(P<0.05);病理观察显示心肌炎症浸润;WB结果示NLRP3、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白含量升高(P<0.05),表明建模成功。与HFpEF组比,恩格列净组和苓桂气化方低、高剂量组的LAD和E/A减小(P<0.05),血清ANP含量降低(P<0.05),病理观察显示心肌炎症浸润减轻,WB结果示恩格列净组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方低剂量组NLRP3、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方高剂量组NLRP3、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),其余蛋白含量有下降趋势。结论苓桂气化方能改善HFpEF早期模型大鼠心脏舒张功能,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路、减轻心肌炎症浸润、抑制心房重构相关。

迷迭香吸嗅通过SIRT1、NLRP3、Caspase-1信号通路介导细胞焦亡改善血管性认知障碍作用机制

目的:探讨迷迭香吸嗅调控沉默信息调节因子1(SIRT1)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)信号通路介导细胞焦亡改善血管性认知障碍(VCI)的作用机制。方法:选取雄性SD大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、迷迭香组和迷迭香+SIRT1抑制剂组,每组10只。给予正常组、假手术组、模型组蒸馏水吸嗅,给予迷迭香组迷迭香精油吸嗅,迷迭香+SIRT1抑制剂组在迷迭香组基础上腹腔注射SIRT1抑制剂EX527。评价各组大鼠的学习记忆能力,海马神经元中SIRT1表达,海马组织中SIRT1、NLRP3和Caspase-1通路相关蛋白[剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)]表达情况。结果:相较于正常组和假手术组,模型组逃避潜伏期更长、过站台次数更少(P<0.05);相较于模型组,迷迭香组和迷迭香+SIRT1抑制剂组逃避潜伏期缩短,过站台次数增加,但迷迭香组变化更为显著(P<0.05)。相较于正常组和假手术组,模型组海马神经元中SIRT1水平更低(P<0.05);相较于模型组,迷迭香组和迷迭香+SIRT1抑制剂组海马神经元中SIRT1有所升高,且迷迭香组升高更明显(P<0.05)。与正常组和假手术组比较,模型组海马组织中剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素(IL)-18和IL-1β明显升高,SIRT1明显降低(P<0.05);相较于模型组,迷迭香组、迷迭香+SIRT1抑制剂组海马组织中cleaved Caspase-3、NLRP3、ASC、IL-18和IL-1β有所降低,SIRT1有所升高,其中迷迭香组变化更大(P<0.05)。结论:迷迭香吸嗅可改善VCI大鼠的空间记忆和学习能力,保护海马组织,减少神经元凋亡,其作用机制与SIRT1、NLRP3和Caspase-1信号通路介导的细胞焦亡有关。

芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号减弱,细胞骨架损伤状态改善。结论 芪地糖肾方可通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡相关通路激活改善高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤。

瑞马唑仑调节NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路对LPS诱导的神经元焦亡的影响

目的 探讨瑞马唑仑(REM)调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的神经元焦亡的影响。方法 将对数期小鼠海马神经元HT22细胞随机分为正常对照组(Ctrl组)、LPS诱导组(LPS组,10 mg/L LPS)、低浓度REM组(REM-低组,160μmol/L REM)、高浓度REM组(REM-高组,320μmol/L REM)和REM-高+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(REM-高+尼日利亚菌素组,320μmol/L REM+10μmol/L尼日利亚菌素)。除Ctrl组外,其余各组HT22细胞均使用LPS进行诱导。各组加药处理后,采用细胞计数试剂盒8测定HT22细胞的吸光度(A值)。采用Hoechst33342/碘化吡啶(PI)染色检测HT22细胞焦亡率。采用酶联免疫吸附试验检测HT22细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HT22细胞中NLRP3信使RNA(mRNA)、Caspase-1 mRNA、GSDMD mRNA表达水平。采用蛋白质印迹法检测HT22细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达水平。结果 LPS组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于Ctrl组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于Ctrl组(P<0.05)。REM-低组和REM-高组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著高于LPS组,且REM-高组高于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05),而REM-低组和REM-高组HT22细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平显著低于LPS组,且REM-高组低于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。REM-高+尼日利亚菌素组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于REM-高组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于REM-高组(P<0.05)。结论 REM可能通过下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路减轻LPS诱导的神经元焦亡。

杨梅素调节NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路对肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的探讨杨梅素(myricetin,MYR)调节NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain,leucine-rich repeat and pyrin domain-containing 3,NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路对肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法将人II型肺泡上皮细胞(human type II alveolar epithelial cells,AT II)随机分为5组:对照组、模型组、L-MYR组(20μg/mL)、M-MYR组(40μg/mL)、H-MYR组(80μg/mL)、ATP组(80μg/mL MYR+2 mmol/L NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路激活剂ATP),且除对照组正常培养,其余各组以肺炎链球菌感染建立损伤模型。采用MTT和平板克隆实验检测细胞增殖;TUNEL检测细胞焦亡;ELISA检测细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)水平;Western blotting检测细胞中NLRP3、cleaved caspase-1、焦孔素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-1β蛋白表达。结果与对照组相比,模型组细胞的A 490、克隆数降低,细胞焦亡率、IL-1β、IL-18、LDH、NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD、IL-1β表达升高(P<0.05);与模型组相比,L-MYR组、M-MYR组、H-MYR组细胞的A 490、克隆数升高,细胞焦亡率、IL-1β、IL-18、LDH、NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD、IL-1β表达较低(P<0.05);与H-MYR组相比,ATP组细胞的A 490、克隆数降低,细胞焦亡率、IL-1β、IL-18、LDH、NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD、IL-1β表达升高(P<0.05)。结论MYR可能通过抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路,减轻肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎症反应,抑制细胞焦亡。

基于Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路探讨异荭草苷治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的探讨异荭草苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗效果及其作用机制。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组(600 mg·kg^(-1))、异荭草苷低剂量组(25 mg·kg^(-1))、异荭草苷高剂量组(50 mg·kg^(-1))及异荭草苷对照组(50 mg·kg^(-1)),每组8只。小鼠自由饮用2%DSS溶液复制UC模型,实验进行3周后,各给药组给予相应药物灌胃治疗4周。给药结束后,称取体质量,摘眼球取血,剖取结肠组织。采用苏木素-伊红(HE)、阿利新蓝-过碘酸-雪夫染色(AB-PAS)法观察小鼠结肠组织病理形态变化;透射电子显微镜观察小鼠结肠组织超微结构;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)和髓过氧化物酶(MPO)水平;免疫组化法检测小鼠结肠组织中半乳糖凝集素(Gal-3)蛋白表达;免疫荧光法检测黏蛋白(MUC2)表达及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)共定位情况;免疫印迹(Western Blot)法检测小鼠结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量明显下降,结肠长度明显缩短,肠质量指数明显增加(P<0.01);小鼠肠黏膜结构紊乱,微绒毛稀疏,隐窝结构见大量炎性细胞浸润,线粒体肿胀明显,杯状细胞明显减少;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显升高,IL-10水平明显降低(P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达减少及NLRP3和ASC共定位增强;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显增加,Occludin和ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,异荭草苷低、高剂量组小鼠体质量明显上升,结肠长度明显增长,肠质量指数明显降低(P<0.05,P<0.01);肠黏膜、微绒毛及线粒体结构明显恢复,炎性浸润减轻,杯状细胞明显增加;血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α、LPS和MPO水平明显降低,IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织MUC2蛋白阳性表达增加,NLRP3和ASC共定位减弱;结肠组织中Gal-3、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,Occludin和ZO-1蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论异荭草苷对DSS诱导的UC小鼠具有良好的治疗效果,其机制可能与抑制Gal-3/NLRP3/IL-1β信号通路,保护肠黏膜屏障有关。

老年痛风性关节炎患者血清NALP3、Caspase-1、IL-18水平及与肾功能指标相关性分析

血尿酸(SUA)升高是痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者的主要病理特征,同时伴有大量的炎症因子浸润,临床表现为痛风石和疼痛等,严重者还可出现关节畸形和功能障碍,造成肾功能损伤,甚至肾功能衰竭[1-2]。研究证实[3-4],炎性因子在AGA的发生发展及肾功能损害中均发挥了重要作用。

颞下颌关节滑液中IL-1β、IL-18、NLRP3以及Caspase-1水平检测在颌骨成骨细胞焦亡中的意义

目的探讨颞下颌关节滑液中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLRP3)以及半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)水平检测在颌骨成骨细胞焦亡中的意义。方法选取2020年8月至2021年8月牡丹江医学院第二附属医院收治的颞下颌关节紊乱病患者64例作为研究对象。所有患者均进行电子计算机断层扫描(CT)或核磁共振成像(MRI)扫描,根据检查结果,将伴有髁突骨质破坏的28例患者作为研究组,不伴有髁突骨质破坏的36例患者作为对照组。比较两组患者焦亡经典途径相关分子的表达水平,观察两组患者颞下颌关节滑液中成骨细胞72 h内的焦亡情况,分析检测IL-1β、IL-18、NLRP3以及Caspase-1水平对颌骨成骨细胞焦亡的临床价值。结果研究组IL-1β、IL-18、NLRP3以及Caspase-1水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组24、48和72 h颞下颌关节滑液中成骨细胞Caspase-1+PI+水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL-1β、IL-18、NLRP3以及Caspase-1水平在骨质破坏患者中均明显升高。

重症溃疡性结肠炎患者血清NOD样受体蛋白3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1和核因子κB mRNA表达水平及临床意义

目的探讨重症溃疡性结肠炎(UC)患者血清NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(CASP1)和核因子κB(NF-κB)mRNA表达水平及临床意义。方法选取温州市中西医结合医院消化内科收治的重症UC患者116例作为重症UC组,同期健康体检者50例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测受试者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测所有受试者血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18表达水平,采用Pearson相关分析重症UC组患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β、IL-18表达的相关性。结果重症UC组患者血清NLRP3 [(6.3±1.1)vs.(1.2±0.3)]、CASP1 [(5.4±1.1)vs.(1.1±0.3)]和NF-κB [(6.73±1.13)vs.(0.51±0.15) mRNA表达水平均显著高于对照组(t=32.016、27.873、38.710,P均<0.001)。重症UC组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级患者NLRP3[(2.4±0.6)、(4.5±1.1)、(6.8±1.2)]、CASP1 [(2.2±0.4)、(3.9±1.0)、(5.9±1.1)]及NF-κB [(2.5±0.6)、(5.4±1.2)、(7.2±1.4)] mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(F=49.852、43.224、33.293,P均<0.001)。进一步两两比较发现,Ⅱ级、Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅰ级患者(P均<0.05),Ⅲ级重症UC患者NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA的表达水平均显著高于Ⅱ级患者(P均<0.05)。重症UC组患者血清IL-1β[(90±7)ng/L vs.(69±7)ng/L]、IL-18 [(121±4)ng/L vs.(102±6)ng/L]表达水平较对照组均显著升高(t=16.555、24.249,P均<0.001)。重症UC患者血清NLRP3 mRNA与CASP1、及NF-κB mRNA表达均呈正相关(r=0.767、0.676,P均<0.001),而CASP1 mRNA与NF-κB mRNA表达无相关性(r=0.263,P=0.175)。重症UC患者血清NLRP3、CASP1、NF-κB mRNA与IL-1β表达均呈正相关(r=3.372、3.724、3.424,P=0.035、0.011、0.026),与IL-18表达亦均呈正相关(r=2.963、3.513、3.312,P=0.043、0.018、0.023)。结论重症UC患者血清NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA表达水平均显著升高,且NLRP3 mRNA与CASP1、NF-κB mRNA表达呈正相关。NLRP3、CASP1和NF-κB mRNA参与重症UC病理过程,临床上可通过检测NLRP3、CASP1和NF-κB表达水平判断UC病程进展。

参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏NLRP3炎症复合体相关蛋白表达的影响

目的探讨参芍口服液对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾脏核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症性复合体(以下简称NLRP3炎症体)表达的影响及对肾脏的保护作用。方法选择健康雄性Wistar大鼠45只,随机分为模型组、治疗组、对照组各15只。模型组、治疗组予一次性腹腔注射STZ制备DN模型,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。造模成功后,治疗组给予参芍口服液250 mg/(kg·d)灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均干预12周。各组大鼠干预12周后,以代谢笼收集24 h尿液,检测24 h尿量及尿蛋白定量(PRO),断尾取血测定血糖、血清Scr、血BUN。采用Masson染色法观察肾脏组织病理改变。采用免疫组化法检测肾脏组织NLRP3炎症体成分核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β蛋白定性表达,采用Western blot法检测肾脏组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达量。结果治疗组、对照组血糖、24 h尿量、PRO、血Scr、血BUN均低于模型组(P均<0.05)。模型组肾小球中重度纤维化,系膜基质重度增生,基底膜明显增厚;治疗组病理改变较模型组明显减轻。模型组肾脏组织中NLRP3、Caspase-1及IL-1β的定性及定量表达均高于对照组及治疗组(P均<0.05)。结论参芍口服液可降低DN大鼠血糖水平、减轻肾脏纤维化、保护肾功能,其机制可能与降低肾脏组织中NLRP3炎症体相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达有关。

子宫内膜异位症患者异位子宫内膜组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达变化观察

目的 观察子宫内膜异位症(EMs)患者异位子宫内膜组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18表达变化,分析NLRP3、Caspase-1与EMs患者临床病理特征的关系,以探讨炎症与EMs发生发展中的作用。方法 取80例EMs患者(EMs组)异位子宫内膜组织及80例同期住院子宫肌瘤患者(非EMs组)正常子宫内膜组织,采用免疫组织化学染色法检测组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18;收集上述受试对象中的30例EMs患者和30例子宫肌瘤患者腹腔冲洗液,采用酶联免疫吸附法检测腹腔冲洗液中IL-1β、IL-18。结果 EMs组异位子宫内膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达阳性者分别为46(57.50%)、52(65.00%)、59(73.75%)、55例(68.75%),非EMs组正常子宫内膜组织中分别为32(40.00%)、36(45.00%)、44(55.00%)、42例(52.50%)。两组比较,P均<0.05。EMs组腹腔冲洗液中IL-1β、IL-18水平高于非EMs组(P均<0.01)。不同临床分期及是否存在痛经的EMs患者异位子宫内膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达阳性率比较,P均<0.05。结论 EMs患者异位子宫内膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18高表达,NLRP3、Caspase-1表达水平与患者病情有关。

血清NLRP3、Caspase-1对脓毒症患者疾病转归的评估价值

目的分析血清核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)对脓毒症患者疾病转归的评估价值。方法选择2021年8月至2023年8月承德医学院附属医院重症监护病房收治的106例脓毒症患者,并根据入院后疾病转归情况分为生存组(n=65)与死亡组(n=41)。所有研究对象入院24 h内检测血清NLRP3、Caspase-1水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估血清NLRP3、Caspase-1对脓毒症患者疾病转归的评估价值。结果死亡组脓毒症患者血清NLRP3、Caspase-1均高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清NLRP3、Caspase-1评估脓毒症患者疾病转归的AUC为0.844(95%CI:0.794~0.894)、0.858(95%CI:0.808~0.908),血清NLRP3联合Caspase-1评估脓毒症患者疾病转归的AUC为0.903(95%CI:0.853~0.953)。多因素回归分析显示,血清C-反应蛋白≥136.65 mg/L[OR(95%CI)=3.047(1.852~5.012)]、N末端脑利钠肽原≥986.39 ng/L[OR(95%CI)=2.591(1.703~3.941)]、NLRP3≥425.63 ng/mL[OR(95%CI)=4.536(2.263~9.096)]、Caspase-1≥7.84 ng/mL[OR(95%CI)=4.055(2.162~7.608)]及APACHEⅡ评分≥32.17分[OR(95%CI)=2.872(1.773~4.651)]、SOFA评分≥7.84分[OR(95%CI)=3.459(1.918~6.240)]均为影响脓毒症患者疾病转归的独立危险因素(P<0.05)。结论血清NLRP3、Caspase-1水平与脓毒症患者疾病转归密切相关,二者有望作为评估脓毒症患者疾病转归的有效指标,且联合评估价值更高。

氟西汀调节TLR4/NF-κB/NLRP3炎症体信号通路改善CUMS大鼠抑郁样行为

目的基于Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症体信号通路探究氟西汀对慢性不可预知性轻度应激(CUMS)模型大鼠抑郁样行为的作用。方法18只SD大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀组。模型组和氟西汀组大鼠随机给予不可预知性轻度刺激11周,制备抑郁症模型。氟西汀组于第7~11周灌胃氟西汀(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),其余组大鼠灌胃1 mL生理盐水。干预结束后进行行为学检测,酶联免疫吸附试验检测脑组织中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量,免疫荧光染色观察海马CA3区和皮质区中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(Caspase-1)的表达情况。Western blot测定脑组织TLR4、NF-κB、NLRP3、Caspase-1和活化的Caspase-1(cleaved Caspase-1)蛋白的表达水平。结果与模型组比较,氟西汀组大鼠在旷场的运动距离及站立次数显著增多,在高架十字迷宫的运动距离增加,且在闭臂的停留时间减少,大鼠脑组织中IL-1β和IL-18含量显著降低,TLR4、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达降低(P<0.05)。结论氟西汀可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3炎症体信号通路,降低脑组织中炎性因子IL-1β和IL-18的水平,从而改善CUMS大鼠的抑郁样行为。

基于NLRP3/caspase-1通路探讨芹菜素对脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征小鼠肺损伤的保护作用

目的基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-1通路探讨芹菜素对脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺损伤的保护作用。方法48只BALB/c健康、雄性小鼠分对照组、模型组、芹菜素组、芹菜素+NLRP3激活剂组各12只,除对照组,其余各组气道滴入2 mg/kg脂多糖(LPS)50μl,对照组相同方法滴入50μl磷酸盐缓冲液(PBS)。2 h后芹菜素组腹腔注射20 mg/kg芹菜素,芹菜素+NLRP3激活剂组腹腔注射20 mg/kg芹菜素+NLRP3激活剂尿酸单钠盐(MSU)。测定肺组织湿/干重比值;苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织形态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液和肺组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;Western印迹检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1、pro-caspase-1蛋白水平。结果模型组肺组织断链、破损现象明显,大量炎症细胞浸润,肺泡间隔增厚;芹菜素组肺组织损伤状况明显减轻,仅出现少量炎症细胞浸润,肺泡间隔厚度变薄;芹菜素+NLRP3激活剂组肺组织症状介于模型组和芹菜素组之间。与对照组相比,模型组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,芹菜素组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05);与芹菜素组相比,芹菜素+NLRP3激活剂组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论芹菜素可通过NLRP3/caspase-1通路抑制炎症反应,从而实现对脓毒症诱导的ARDS小鼠肺损伤的保护。