维生素D_(3)辅助糖皮质激素对小儿支气管哮喘TLR4/NF-κB信号通路相关因子水平的影响

目的研究维生素D_(3)辅助糖皮质激素对小儿支气管哮喘Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关因子水平的影响。方法选取2019年1月—2022年1月长江大学附属荆州医院收治的120例小儿支气管哮喘患儿作为研究对象,按照随机数表法将患儿分为A组、B组和C组,每组40例。所有患儿给予常规治疗,C组在常规治疗基础上给予安慰剂,B组在常规治疗基础上给予糖皮质激素,A组在B组基础上给予维生素D_(3)。观察各组患儿喘息、胸闷、气促及咳嗽症状持续时间,分析各组患儿治疗前后TLR4和NF-κB mRNA表达,并比较3组治疗前后气道炎症指标[嗜酸性粒细胞(EOS)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)]水平,比较各组患儿治疗前后肺功能[第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)、用力肺活量(FVC)、每秒呼气峰流速(PEF)及FEV1/FVC值]。结果A组喘息、胸闷、气促及咳嗽症状持续时间短于B组和C组(P<0.05),B组短于C组(P<0.05)。A组治疗前后TLR4和NF-κB mRNA相对表达量的差值高于B组和C组(P<0.05),B组高于C组(P<0.05)。A组治疗前后IL-4、EOS、TNF-α、CRP的差值高于B组和C组(P<0.05),B组高于C组(P<0.05)。A组治疗前后FEV1%pred、FVC、FEV1/FVC、PEF的差值高于B组和C组(P<0.05),B组高于C组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,IL-4、EOS、TNF-α、CRP水平与TLR4 mRNA呈正相关(r=0.501、0.574、0.462和0.474,均P<0.05),与NF-κB mRNA呈正相关(r=0.496、0.522、0.485和0.492,均P<0.05)。FEV1%pred、FVC、FEV1/FVC、PEF水平与TLR4 mRNA呈负相关(r=-0.596、-0.542、-0.513和-0.505,均P<0.05),与NF-κB mRNA呈负相关(r=-0.561、-0.505、-0.526和-0.518,均P<0.05)。结论维生素D_(3)辅助糖皮质激素治疗小儿支气管哮喘可通过调控TLR4/NF-κB信号通路,减轻患儿气道炎症反应,并有效提升肺功能,具有良好的临床应用价值。

Toll样受体4/核因子-кB信号通路在人颅内动脉瘤形成和破裂过程中的激活

颅内动脉瘤病理过程与免疫炎症反应密不可分,但炎症反应的起源或机制仍不太清楚。核转录因子κB（NF-κB）是炎症细胞因子[如白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6和IL-8]、趋化因子[单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）]、黏附分子[细胞间黏附分子（ICAM）-1和血管细胞黏附分子（VCAM）-1]的主要调节子。

梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路调节大鼠退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制

目的:探讨梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NK-κB)信号通路调节退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制。方法:体外培养大鼠软骨细胞并鉴定,采用CCK-8法检测梅花入骨丹水提物(BCAE)对体外软骨细胞的增殖-毒性,筛选药物作用的最佳浓度和时间。采用10 ng·mL-1白细胞介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症退变模型,将软骨细胞分为空白对照组、模型对照组、BCAE组、抑制剂TAK-242组和抑制剂PDTC组,分别进行相应干预后,qRT-PCR及Western blot法检测各组基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、IκBα、p-p65、ColⅡ的mRNA、蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,模型对照组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达下降(P<0.01);与模型对照组比较,TAK-242组、PDTC组、BCAE组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显减少(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达升高(P<0.01)。结论:梅花入骨丹通过TLR4/NK-κB信号通路抑制MMPs的关键调控因子表达,从而抑制IL-1β介导的退变软骨细胞外基质代谢紊乱,发挥抗炎和保护软骨细胞的作用。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

褪黑素通过NF-κB/NLRP3信号抑制子宫内膜异位症的进展机制研究

目的:探讨褪黑素(MEL)对子宫内膜异位症(EMT)进展的抑制作用,以及其对核转录因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号的调控机制。方法:通过自体子宫内膜皮下种植法构建EMT大鼠。动物实验模型分假手术组(Sham组,大鼠在造模过程中仅进行子宫片段剪取)和实验处理4组,分别为:模型组(EMT组,大鼠进行自体子宫内膜皮下种植)、褪黑素组(EMT+MEL组,以50 mg/kg的MEL灌胃处理)、EMT+NF-κB信号通路激活剂佛波酯(PMA)组(EMT+PMA组,以5 mg/kg的PMA腹腔注射)、EMT+MEL+PMA组(以50 mg/kg的MEL灌胃处理和5 mg/kg的PMA腹腔注射)。检测各组大鼠子宫内膜异位的质量、血清和腹腔液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;免疫组化、免疫荧光检测各组样本中髓过氧化物酶(MPO)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blot实验检测各组样本中NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达。结果:与Sham组相比,实验处理4组大鼠中动情周期紊乱的比例、异位子宫内膜的质量、血清以及腹腔液中TNF-α和IL-6的含量、MPO和VEGF的表达及NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与EMT组相比,EMT+MEL组和EMT+MEL+PAM组以上各项指标明显下降,而EMT+PAM组各项指标明显升高;与EMT+MEL组相比,EMT+MEL+PAM组、EMT+PAM组以上各项指标明显升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MEL能明显抑制EMT中的炎症反应,抑制EMT的进展,这可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号的激活实现的。

鹰嘴豆芽素A通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻卵清蛋白诱导哮喘大鼠的气道炎症

[目的]探讨鹰嘴豆芽素A(BCA)通过调节Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘大鼠气道炎症的影响。[方法]将SD大鼠分为对照(CK)组、模型(Model)组、低剂量BCA组(BCA-L组,25 mg/kg)、高剂量BCA组(BCA-H组,100 mg/kg)、地塞米松阳性对照组(Dex组,1 mg/kg)、BCA-H+LPS(TLR4激活剂)组(100 mg/kg+0.1 mg/kg),每组12只。除CK组,其他组均通过OVA诱导构建哮喘大鼠模型。建模成功24 h后,进行给药处理,给药每日1次,持续10 d。利用动物肺功能测定仪检测大鼠吸气阻力、呼气阻力、肺通气顺应性的变化;吉姆萨(Giemsa)染色检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)水平;苏木精-伊红染色法(HE)染色检测大鼠肺组织病理变化;免疫组化检测大鼠肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测大鼠肺组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达。[结果]与CK组比较,Model组大鼠吸气阻力、呼气阻力、BALF中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平升高,肺组织中的支气管及血管周围炎性细胞浸润明显,肺组织中Eotaxin阳性染色面积百分数、TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达升高,肺通气顺应性降低(P<0.05);与Model组比较,BCA-L组、BCA-H组、Dex组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);LPS减弱了高剂量BCA对哮喘大鼠气道炎症的改善作用。[结论] BCA可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻OVA诱导哮喘大鼠的气道炎症。

基于TLR-4/NF-κB信号通路及水通道蛋白1表达探讨大陷胸汤干预重症急性胰腺炎早期肺损伤的效应机制

目的:探讨大陷胸汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期肺损伤的影响及作用机制。方法:将60只大鼠随机分为实验组、模型组和对照组,每组20只。实验组予大陷胸汤灌胃,对照组及模型组予蒸馏水灌胃,在连续灌胃7 d后,模型组与实验组以胰胆管注射牛磺胆酸钠的方式制备SAP模型,于造模后12、24、48、72 h各时间点分别处死5只大鼠取材,观察大鼠一般情况、胸腹水量、肺湿干重比、胰腺组织及肺组织病理学改变、肺组织白细胞介素(IL)-1及Toll样受体4(TLR-4)水平、肺组织核因子(NF)-κB及水通道蛋白1(AQP1)表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠一般情况较差,胰腺炎症反应以及肺损伤程度较重,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平升高(P<0.05),肺组织AQP1表达水平下降。与模型组相比,实验组大鼠一般情况较好,肺损伤程度较轻,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平下降(P<0.05),肺组织AQP1表达水平升高,造模后72 h后,胰腺组织坏死程度与同期模型组相比明显好转。结论:大陷胸汤可在一定程度上减轻SAP大鼠早期肺损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB炎症信号通路,增强AQP1表达有关。

吴茱萸碱调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响

目的:探讨吴茱萸碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响。方法:采用大脑中动脉栓塞法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组15只,另选取15只健康大鼠设为假手术组,以吴茱萸碱和质粒分组处理后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经损伤;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠海马神经元凋亡率;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清及脑组织促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元超微结构发生损伤,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(P<0.05);与模型组比较,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组大鼠海马神经元超微结构损伤均减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较吴茱萸碱低剂量组进一步减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组大鼠海马神经元超微结构损伤加重,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可通过阻止HMGB1/TLR4/NF-κB信号激活而降低促炎因子表达,从而抑制神经炎症,减轻脑梗死大鼠神经功能损伤。

TLR4/NF-κB/NLRP3通路抑制炎症反应作用的研究

Toll样受体(TLRs)是参与非特异性免疫的一类重要的蛋白质,是表达与固有免疫细胞最重要的模式识别受体之一,可识别来源于微生物的具有保守结构的分子,即病原体相关分子模式(PAMAs),从而激活机体产生免疫应答。核因子κB(NF-κB)在几乎所有类型的细胞和组织中都有表达,在调节对外部刺激的显著多样性的反应中起着关键作用,因此是多个生理和病理过程中的关键因素。而核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),即NLRP3炎性小体通路在脑缺血再灌注和焦亡中具有重要意义,如NLRP3在脑缺血再灌注损伤时在小胶质细胞中被激活,随后在神经元和微血管内皮细胞中表达。由TLRs激活、NF-κB传递、NLRP3启动形成的TLR/NF-κB/NLRP3信号通路在机体各器官炎症反应中起到关键性作用,本文探讨了各类药物通过抑制该通路炎症反应,起到保护身体各大重要器官的作用。

吴茱萸碱对溃疡性结肠炎大鼠HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的探究吴茱萸碱对溃疡性结肠炎(UC)大鼠高迁移率族蛋白(HMG)B1/Toll样受体(TLR)-4/核因子(NF)-κB信号通路的影响。方法制备UC模型采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合法,将建模成功的50只SD大鼠随机分为5组(n=10),模型组、阳性对照组(0.6 g/kg柳氮磺吡啶片)和吴茱萸碱低、中、高(10、15、20 mg/kg吴茱萸碱)剂量组,另取健康SD大鼠10只为正常组。治疗1 w后,观察各组大鼠的一般情况、结肠组织形态学损伤,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织的病理学损伤情况;酶联免疫吸附试验检测结肠组织匀浆液中白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;Western印迹检测结肠组织中IL-6、IL-10、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组精神倦怠、嗜睡、大便黏腻、肛周污秽、体质量减轻,结肠黏膜明显出现充血、水肿、糜烂情况,肠黏膜损伤评分显著升高,杯状细胞数量减少,有大量炎症细胞浸润,肠长明显缩短、肠重显著增加(P<0.05),MDA、IL-6、TNF-α含量及IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著升高,SOD含量及IL-10蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组和吴茱萸碱各剂量组一般情况明显好转,肠黏膜组织充血、水肿、糜烂情况减轻,肠黏膜损伤评分显著降低,杯状细胞数量增多、炎症细胞减少,肠长明显增长、肠重显著减轻(P<0.05),MDA、IL-6、TNF-α含量及IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著降低,SOD含量及IL-10蛋白表达水平显著升高(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组与阳性对照组以上指标无显著性差异(P>0.05);吴茱萸碱各剂量组随着剂量的升高,以上各个指标变化呈剂量依赖性(P<0.05)。结论吴茱萸碱能够缓解UC大鼠肠黏膜损伤,减轻结肠组织炎症反应、氧化应激水平,抑制HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路激活可能为其作用机制。

辛伐他汀对蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠NLRP3炎性小体的表达及NF-κB信号通路的影响

目的探究辛伐他汀(simvastatin)对蛛网膜下腔出血(SAH)早期脑损伤(EBI)大鼠NLRP3的表达及NF-κB信号通路的影响。方法100只大鼠随机分为假手术(Sham)组、SAH组、Simvastatin组、NF-κB信号通路抑制剂(PJ34)组,每组25只。视交叉前池注血法构建SAH模型,建模后2h给药,Simvastatin组、PJ34组腹腔注射辛伐他汀和PJ34,另外两组腹腔注射等体积生理盐水。1次·d^(-1),连续14 d。给药结束24 h后,采用Garcia评分评估造模后大鼠的神经功能;Sugawara出血量评分评价脑组织出血情况;苏木精-伊红染色、透射电镜观察脑组织病理变化与超微结构损伤;测定脑组织含水量;TUNEL染色、ELISA、免疫组化分别检测细胞凋亡情况、炎症因子表达水平与NLRP3表达情况;Western blotting检测脑组织NLRP3、Caspase-1、核因子-κB(NF-κB-p65)的表达水平。结果与SAH组相比,Simvastatin组SAH、炎性浸润明显减轻,脑组织病理损伤明显改善,脑组织含水量、神经细胞凋亡、NLRP3、Caspase-1、NF-κB-p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18表达水平明显下降(P<0.05)。结论辛伐他汀能够降低SAH后发生EBI的大鼠NLRP3炎性小体的表达,通过抑制NF-κB信号通路减轻炎症反应,降低脑水肿和细胞凋亡,从而改善神经功能。

基于NF-κB/NLRP3信号通路探究二黄祛脂颗粒治疗非酒精性脂肪肝病的作用机制

目的探讨二黄祛脂颗粒(Erhuang Quzhi Granules,EQG)对西方饮食(Western diet,WD)联合低剂量CCl_(4)诱导的非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)小鼠模型的治疗效果及其作用机制。方法喂养C57BL/6小鼠WD饲料、高糖水溶液(23.1 g·L^(-1)D-果糖和18.9 g·L^(-1)D-葡萄糖)12周构建NAFLD模型,除空白组外,其它组小鼠每周腹腔注射2%CCl_(4)玉米油溶液(0.01 mL·g^(-1))1次。造模6周后,给药组分别灌胃阿托伐他汀(atorvastatin,ATO,7.2 mg·kg^(-1))和EQG(16.25 g·kg^(-1))。给药6周后收集小鼠血清及组织,检测血清生化指标,通过油红O染色、HE染色和Masson染色观察肝脏病理变化,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-18及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,采用Western blot法检测肝组织NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达水平。结果EQG能够明显改善小鼠血清生化指标、肝脏组织病变和脂质沉积,明显降低血清中IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α的含量,明显下调IKKβ、NF-κB p65、NLRP3、ASC、cleaved-caspase-1蛋白的表达,上调IκBα的蛋白表达。结论EQG能够通过作用于NF-κB/NLRP3通路,减轻肝脏炎症,对NAFLD具有良好的治疗效果,应予以临床推广。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子通过Toll样受体-4信号通路调节巨噬细胞自噬水平

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)是否通过Toll样受体-4(TLR4)通路调节巨噬细胞自噬水平。方法用终浓度为5ng/ml的佛波酯(PMA)诱导人单核细胞白血病细胞系(THP-1)THP-1单核细胞48h,采用分化成功的巨噬细胞进行实验。实验分为空白对照组、EMMPRIN组和TAK-242组。蛋白印迹法检测各组TLR4、核因子-κB(NF-κB)、LC3-Ⅱ、Beclin1及P62蛋白表达水平;免疫荧光检测各组LC3-Ⅱ、Beclin1及P62蛋白荧光表达情况。采用SPSS 22.0软件对数据进行处理。结果Western blot检测发现,EMMPRIN组与对照组及TAK-242组相比,TLR4、NF-κB蛋白表达水平均升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达水平均升高(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平也升高[EMMPRIN组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但仍较对照组升高;EMMPRIN组与TAK-242组比较,差异有统计学意义(P<0.05)],P62蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。免疫荧光检测发现,EMMPRIN组与对照组及TAK-242组相比,LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白荧光表达水平明显升高(均P<0.05),P62蛋白表达水平无差异统计学意义(P>0.05)。结论EMMPRI可能通过TLR4信号通路调节人THP-1巨噬细胞过度自噬。

槲皮素调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路对大鼠分泌性中耳炎的作用机制

目的 探究槲皮素(quercetin, Que)对大鼠分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)的作用及机制。方法 选取雄性SD大鼠48只,随机性分为对照组(Control)、模型组(Model)、Que组(100 mg·kg^(-1))、Que+p38 MAPK激动剂组(100 mg·kg^(-1)Que+2 mg·kg^(-1)Anisomycin),每组各12只。除Control组外,其余各组大鼠均采取腹腔注射卵清蛋白复制分泌性中耳炎大鼠模型,造模成功后,各组大鼠进行相应干预21 d。给药干预结束后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠中耳组织形态学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IFN-γ、IL-4水平;实时定量PCR (RT-qPCR)和Western blot检测中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路相关mRNA及蛋白表达变化。结果 与Control组相比,Model组大鼠表现中耳内黏膜层增厚,伴有大量炎性细胞浸润,血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及中耳灌洗液中IL-4增加,IFN-γ降低(P <0.01),中耳黏膜组织p-p38MAPK/MAPK、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白及mRNA表达水平均明显升高(P <0.01)。与model组相比,Que能够明显改善中耳内黏膜增厚,抑制炎性细胞浸润,降低TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18、IL-4及中耳黏膜组织p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路mRNA和蛋白表达,升高IFN-γ(P <0.05或P <0.01)。与Que组相比,Anisomycin能够逆转Que对SOM大鼠的保护作用。结论 Que能够有效改善SOM发生、发展,其机制与抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路介导的炎性反应相关。

G蛋白偶联胆汁酸受体1调控机体炎症信号通路的研究进展

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)与胆汁酸(BAs)及其衍生物结合后,激活下游通路传导,调控动物的多种代谢过程。GPBAR1通过核转录因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号转导通路,调节动物体炎症反应。因此,本文重点阐述GPBAR1对动物炎症通路的调控进展,为BAs及其衍生物成为治疗炎症性疾病的潜在药物提供参考。

红花黄色素调节NF-κB/NLRP3信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响

目的:探究红花黄色素(CY)调节核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对心肌梗死(MI)大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响。方法:通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MI模型。并将72只SPF级雄性大鼠分为:对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、低剂量CY组(CY-L组,20mg/kg)、高剂量CY组(CY-H组,40mg/kg)和高剂量CY+NF-κB激活剂组(CY-H+LPS组,CY 40mg/kg+LPS 10mg/kg),每组12只。造模后腹腔注射给药,1次/d,共28d。给药结束后对各组大鼠进行超声心电图检查,检测心功能变化情况。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)-伊文斯蓝(EB)法和免疫荧光法检测各组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞焦亡比例。苏木素伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理学变化。试剂盒检测大鼠心肌中白细胞介素(IL)-1β、IL-18和乳酸脱氢酶(LDH)水平。Western Blot检测心肌组织中NF-κB、NLRP3、cleaved-caspase1、胃泌素D-N(GSDMD-N)蛋白表达。结果:与Sham组相比,Model组大鼠心肌组织病理损伤严重,心功能降低,心肌梗死面积、心肌细胞焦亡比例、心肌组织中IL-1β、IL-18、LDH水平和NF-κB、NLRP3、GSDMD-N、cleaved-caspase1蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。与Model组相比,CY-L组、CY-H组大鼠心功能显著提高,心肌组织损伤减轻,细胞焦亡减少,炎症因子IL-1β、IL-18、LDH水平显著下降,NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达显著降低(P<0.05)。LPS减弱了高剂量CY对MI大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论:CY可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路,减少MI大鼠心肌细胞的焦亡和炎性损伤。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨积雪草酸对急性肺损伤大鼠氧化应激和NLRP3炎症小体的影响

目的 观察积雪草酸对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠氧化应激和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白的影响,并探讨其相关分子机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、积雪草酸低剂量组、积雪草酸高剂量组和地塞米松组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠均采用LPS气管滴注法建立急性肺损伤模型。模型建立成功后第2天,积雪草酸低、高剂量组大鼠分别腹腔注射25 mg/kg和75 mg/kg积雪草酸溶液,地塞米松组大鼠腹腔注射2 mg/kg地塞米松注射液,对照组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,连续注射8周。HE染色观察大鼠肺组织病理形态,称重法计算肺组织湿/干重比值,TUNEL染色检测大鼠肺组织细胞凋亡情况,试剂盒检测大鼠支气管肺泡灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见明显病理损伤,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著升高(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,积雪草酸低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤显著改善,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著降低(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著升高(P均<0.05),且积雪草酸高剂量组和地塞米松组大鼠上述指标变化均显著优于积雪草酸低剂量组(P均<0.05)。结论 积雪草酸可通过抑制氧化应激和NLRP3炎症小体激活减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

Ghrelin通过调控NF-κB/NLRP3焦亡信号通路抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡的机制研究

目的探究胃饥饿素(Ghrelin)调控核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路在前交叉韧带成纤维细胞焦亡中的作用。方法前交叉韧带成纤维细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α(tumor necrotic factor-α,TNF-α)炎症模型组、TNF-α+Ghrelin干预组,通过CCK-8确定TNF-α和Ghrelin干预的剂量和时间,Transwell法检测细胞迁移能力,Western Blot检测细胞焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-1)、白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)的表达,q-PCR检测Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD m RNA表达水平,Western Blot检测磷酸化P65(p-P65)和NLRP3的表达。结果绘制CCK-8结果曲线,确定Ghrelin的干预浓度为20 ng/mL,TNF-α干预浓度为20 ng/mL,干预时间都为48 h;与对照组相比,TNF-α炎症模型组的细胞迁移能力明显降低(P<0.001),细胞焦亡相关蛋白表达显著增高(P<0.05),p-P65和NLRP3的表达显著增高(P<0.05),Ghrelin干预后细胞迁移能力明显提高(P<0.001),细胞焦亡相关蛋白显著降低(P<0.05),p-P65和NLRP3的表达显著降低(P<0.05)。结论Ghrelin能够显著抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡,改善其迁移能力,这可能是通过调控NF-κB/NLRP3实现的。

川陈皮素调节Notch/NF-κB/NLRP3信号通路对类风湿关节炎大鼠炎性损伤的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节神经源性基因同源蛋白(Notch)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对类风湿关节炎(RA)大鼠炎性损伤的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、NOB低剂量组(NOB-L组,50 mg/kg)、NOB高剂量组(NOB-H组,100 mg/kg)、NOB高剂量+Notch激活剂Jagged1组(NOB-H+Jagged1组,100 mg/kg NOB+50 mg/kg Jagged1)。于给药第0天与末次给药后对各组大鼠进行关节炎指数评价。自给药第0天开始,每7天测定1次大鼠足趾肿胀度。计算各组大鼠胸腺和脾脏指数;HE染色观察每组大鼠踝关节滑膜足趾病理学变化;ELISA法检测各组大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平;RT-qPCR法测定各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA表达;Western blot检测各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NLRP3蛋白表达。结果1)RA的病情进展:与Control组相比,Model组大鼠关节炎指数和足趾肿胀度显著上升(P<0.05),滑膜组织病理学损伤严重。2)大鼠脏器指数及炎性因子变化:与Control组相比,Model组大鼠胸腺和脾脏指数显著上升(P<0.05),血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升(P<0.05)。3)Notch/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达变化:与Control组相比,Model组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA和蛋白、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Model组相比,NOB-L、NOB-H组相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05),滑膜组织病理学损伤有所减轻。Jagged1减弱了NOB对RA大鼠炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论NOB可能通过下调Notch/NF-κB/NLRP3信号通路,减轻RA大鼠的炎性损伤。

骨化三醇通过B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB通路抑制大鼠高原肺水肿的发生

目的 :探讨骨化三醇通过B细胞受体/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/核因子κB(NF-κB)通路抑制大鼠高原肺水肿的发生及其机制。方法 :雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧+骨化三醇组(0.252μg/kg),连续灌胃给药5 d后,除常氧组外,其余2组均置于模拟海拔6 000 m的低压氧舱内低氧胁迫48h,建立高原肺水肿大鼠模型。干湿比重法测定肺含水量;H-E染色观察大鼠肺组织病理变化,并进行炎症评分;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率;ELISA检测肺组织B细胞激活因子(BAFF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量;免疫荧光染色观察肺组织CD21和核因子κB抑制蛋白α(IκBα)的表达;免疫印迹检测肺组织PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)的表达。结果 :与常氧组比较,低氧组大鼠肺组织见轻微肺泡隔增宽,炎症细胞浸润;肺含水量升高,肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及CD21、p-PI3K、p-AKT表达明显升高;肺组织IL-4、IL-10含量及IκBα、p-IκBα表达明显降低。与低氧组比较,低氧+骨化三醇组炎症细胞浸润减轻;肺含水量降低、肺组织细胞凋亡率、BAFF、TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及CD21、p-PI3K、p-AKT表达明显降低;肺组织IL-4、IL-10含量及IκBα、p-IκBα表达明显升高。结论 :骨化三醇可抑制高原肺水肿炎症反应,其作用机制可能与抑制B细胞受体/PI3K/AKT/NF-κB信号通路有关。