二甲双胍激活腺苷酸活化蛋白激酶抑制心肌缺氧再灌注损伤介导的NOD样受体蛋白3炎症体活化的研究

目的:评价腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)介导的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症体活化在二甲双胍后处理保护心肌缺氧再灌注(H/R)损伤中的作用及机制。方法:选取健康雄性SD大鼠64只,进行麻醉,开胸直接取心脏,将心脏悬挂在Langendoff灌注装置上建立离体心肌缺氧再灌注模型。随机分为4组(n=16):持续灌注组、缺氧再灌注组(H/R组)、二甲双胍后处理组(MET组)、二甲双胍后处理+AMPK抑制剂(CC)组(MET+CC组)。各组进行相应处理后,监测血流动力学指标,测定心肌梗死面积,观察心肌细胞超微结构,ELIS法测定心肌组织内乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,心肌组织原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡发生;蛋白免疫印迹(Western blot)法测定磷酸化AMPK、AMPK、NLRP3、活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)、IL-1β和GAPDH蛋白表达水平。结果:与持续灌注组比较,H/R组心肌梗死面积增大(P<0.05),LDH、CK-MB水平增加(P<0.05),心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与H/R组比较,MET组心肌梗死面积缩小(P<0.05),LDH、CK-MB水平降低(P<0.05),心肌细胞凋亡率下降(P<0.05),磷酸化AMPK/AMPK比值显著增加(P<0.05),而NLRP3、活化caspase-1和IL-1β表达显著下降(P<0.05);与MET组比较,MET+CC组抑制AMPK激活后心肌梗死面积进一步增大(P<0.05),LDH和CK-MB水平进一步升高(P<0.05),心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05);磷酸化AMPK/AMPK比值降低(P<0.05),而NLRP3、活化caspase-1和IL-1β表达显著升高(P<0.05)。结论二甲双胍通过激活AMPK信号通路,抑制心肌内NLRP3炎症体活化,从而减轻离体大鼠心肌缺氧再灌注损伤。

炎症环境下牙髓成纤维细胞中NOD样受体蛋白3炎症体相关分子表达的调节

背景:NOD样受体蛋白3炎症体是细胞抵御外来病原入侵的重要炎性因子,前期研究已证实其在牙髓成纤维细胞中有表达,然而炎症环境下牙髓成纤维细胞NOD样受体蛋白3炎症体相关分子的转录调节机制尚不清楚。目的:阐明炎症环境下牙髓成纤维细胞中NOD样受体蛋白3炎症体相关分子的转录调节机制。方法:选择第4代牙髓成纤维细胞,分6组:A组正常培养,不进行任何处理;B组加入脂多糖刺激6 h;C组加入Toll样受体4特异性抑制剂处理1 h,再加入Toll样受体4特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;D组加入髓样分化因子88特异性抑制剂处理1 h,再加入髓样分化因子88特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;E组加入核因子κB特异性抑制剂处理1 h,再加入核因子κB特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;F组加入髓样分化因子88特异性抑制剂阴性对照处理1 h,再加入髓样分化因子88特异性抑制剂阴性对照与脂多糖混合溶液处理6 h。采用RT-PCR检测NOD样受体蛋白3、Caspase-1与白细胞介素1βmRNA的表达,Western blot检测NOD样受体蛋白3与Caspase-1蛋白表达,ELISA法检测白细胞介素1β释放水平。结果与结论:①与A组比较,B组NOD样受体蛋白3、Caspase-1及白细胞介素1βmRNA表达水平升高(P<0.05);与B组比较,C-E组NOD样受体蛋白3、白细胞介素1βmRNA表达水平降低(P<0.05),C组Caspase-1 mRNA表达水平降低(P<0.05);②与A组比较,B组NOD样受体蛋白3、Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与B组比较,C-E组NOD样受体蛋白3蛋白表达降低(P<0.05),C组Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05);③与A组比较,B组白细胞介素1β水平升高(P<0.05);与B组比较,C-E组白细胞介素1β水平降低(P<0.05);④结果表明,脂多糖通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路上调牙髓成纤维细胞内NOD样受体蛋白3和白细胞介素1β的表达。

衔接蛋白失能同源物2通过抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响

目的:探讨衔接蛋白失能同源物2(DAB2)抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)对结核性胸膜炎大鼠炎症和氧化应激的影响。方法:按照随机数字法将60只SPF级雄性SD大鼠分为四组,每组40只。除正常对照组外,结核性胸膜炎组、DAB2组和pcDNA-NLRP3组进行建模处理,以第2天是否抽出胸腔积液为模型建立成功。正常对照组不注射结核分枝杆菌H37RV悬液,DAB2组建模后第2天静脉注射AAV9-DAB2质粒,每天1次,连续注射7 d,DAB2+pcDNA-NLRP3组在注射AAV9-DAB2质粒500μg/L的同时注射pcDNA-NLRP380μl,正常对照组和结核性胸膜炎组的大鼠尾静脉注射0.9%氯化钠溶液。进行各组呼吸功能指标测定,收集胸腔积液,记录积液量,观察3、5、7 d的胸腔积液粘连性情况,HE染色观察胸膜组织病理学情况,Western blot检测胸膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)和MMP-9蛋白表达,荧光探针DCFH-DA分析检测活性氧(ROS)的水平。结果:与正常组相比,结核性胸膜炎组的大鼠的胸腔积液和胸膜厚度明显增加,用力肺活量(FVC)、最大呼气流量(PEF)、用力呼气容积(FEV)0.3和FEV0.3/FVC显著降低,TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达显著升高,基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)蛋白表达显著降低,丙二醛(MDA)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,ROS累积量明显升高(均P<0.001);与结核性胸膜炎组相比,DAB2组大鼠胸腔积液和胸膜厚度显著降低,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显升高,DAB2组大鼠胸膜组织中的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显降低,TIMP-1水平明显升高,MDA水平降低,SOD水平升高,ROS累积量明显降低(均P<0.001);与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠胸腔积液和胸膜厚度明显升高,FVC、PEF、FEV0.3和FEV0.3/FVC明显降低,DAB2+pcDNA-NLRP3组的TNF-α、IL-8、MMP-1和MMP-9蛋白表达明显升高,TIMP-1蛋白表达显著降低,MDA水平明显升高,SOD水平显著降低,ROS累积量显著升高(均P<0.001),各组大鼠在3、5、7 d的胸腔积液粘连性评分比较采用重复测量设计的方差分析,结果显示,不同时间点的胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分比较差异具有统计学意义(均P<0.001);各组胸腔积液粘连性评分变化趋势比较差异有统计学意义(均P<0.001);与模型组相比,DAB2组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状减轻,有少量的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显减少,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显减少;与DAB2组相比,DAB2+pcDNA-NLRP3组大鼠的胸膜内和肺间质内血管充血症状加重,出现的纤维组织增生,上皮样细胞团以及凝固型坏死也明显增多,淋巴细胞和中性粒细胞浸润也明显增加。结论:DAB2通过抑制NLRP3的活性促进胸腔积液的吸收,降低胸膜厚度和粘连发生率,降低炎症反应和氧化应激水平,缓解结核性胸膜炎的进展。

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的细胞焦亡对哮喘大鼠炎症水平的调控作用

目的:探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在哮喘中炎症水平的调控作用机制。方法:从GSE40732和GSE69683数据集中分析哮喘组和对照组之间的差异表达基因(DEGs),并鉴定程序性细胞死亡在哮喘中的水平。在NLRP3敲降大鼠中建立哮喘大鼠模型,通过HE染色和Tunel染色分析肺组织的病理变化和凋亡水平,通过免疫组化检测肺组织中NLRP3的表达,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测NLRP3介导细胞焦亡相关mRNA和蛋白表达的改变。结果:哮喘组和对照组之间鉴定了926个差异表达基因(DEGs),细胞焦亡在哮喘中的水平显著高于对照组。哮喘模型中的炎症、凋亡和NLRP3水平明显高于对照组,而在NLRP3敲降后,哮喘大鼠中的炎症和凋亡水平降低。与对照组比较,NLRP3、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)和Caspase-8在哮喘大鼠模型中的表达升高,高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达降低(均P<0.05),这些异常表达在NLRP3敲降后得到了显著的改善(P<0.05)。结论:NLRP3通过细胞焦亡信号可能在哮喘中发挥促炎促凋亡作用,阻断该通路可能是改善哮喘炎症的潜在治疗策略。

NOD样受体蛋白3炎症小体在多柔比星诱导心脏毒性中的意义

晚期肿瘤病人的生命周期因新药的出现不断延长,同时,抗肿瘤药物所致的毒副作用也受到重视。多柔比星(DOX)作为强大的广谱抗肿瘤药物虽极大地延长了肿瘤病人的生存周期,但其诱导的剂量相关性的心脏毒性限制了其临床应用。NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体在DOX诱导的心脏毒性(DIC)的炎症过程发挥着重要作用,且一些炎症小体抑制剂还可减轻DIC。该文根据近5年的最新进展,围绕NLRP3炎症小体参与DIC的作用及机制等做一归纳、总结。

白藜芦醇诱导NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3炎性体轴致胰腺腺泡细胞凋亡的机制

目的探讨白藜芦醇对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响及对NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NOD like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性体轴的调节作用。方法将50只大鼠随机分为假手术组、模型组和白藜芦醇低、高剂量组及地塞米松组,每组10只,除假手术组大鼠外,其余组大鼠通过牛黄胆酸钠逆行胰胆管注射制备SAP模型。手术结束5 min后,白藜芦醇低、高剂量组分别腹腔注射白藜芦醇30、60 mg·kg^(-1),地塞米松组大鼠腹腔注射地塞米松2 mg·kg^(-1),每日1次,连续给药3 d,假手术组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水。检测大鼠血清中淀粉酶和脂肪酶活性,白细胞介素(IL)-1β、IL-18和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量,检测胰腺组织病理损伤并进行病理评分,胰腺腺泡细胞凋亡指数以及NLRP3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的蛋白相对表达量。结果假手术组大鼠胰腺组织结构正常,无水肿、充血或坏死;模型组胰腺间质水肿,肺泡间隔变宽,可见大量炎性细胞浸润,实质出现点状或片状出血或坏死;白藜芦醇低、高剂量组和地塞米松组胰腺组织病变程度均减轻。与假手术组比较,模型组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,白藜芦醇低、高剂量组和地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05);与白藜芦醇低剂量组比较,高剂量组和地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05);与白藜芦醇高剂量组比较,地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论白藜芦醇可减轻SAP大鼠胰腺损伤,抑制胰腺腺泡细胞凋亡,其可能是通过阻碍NLRP3炎性体轴激活发挥作用的。

NOD样受体蛋白3在心肌纤维化中的相关研究

心肌纤维化(MF)是导致心功能不全的主要原因,越来越多的证据表明无菌性炎症在导致心肌纤维化中起着非常重要的作用,NOD样受体(NLR)家族成员是控制炎症反应的核心角色,NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性体的NOD样受体家族吡喃结构域是最具特征的炎性体,现就NLRP3在多种疾病所致心肌纤维化中的作用及相关预防进行综述。

老年髋关节置换术患者行椎管内麻醉的效果及对术后认知功能、NOD样受体蛋白3炎性小体的影响

目的:探讨老年髋关节置换术患者实施椎管内麻醉的临床价值。方法:选取收治的120例老年髋关节置换术患者为研究对象,以系统抽样法分为对照组与观察组各60例,对照组实行全身麻醉,观察组实行椎管内麻醉;评估、比较两组麻醉效果。结果:术后12 h内蒙特利尔认识评估表(MOCA)、简易智力状态检查量表(MMSE)评分明显下降,之后逐渐回升,同期观察组评分更高,同时观察组不良反应率明显更低(P<0.05);术后3d观察组NOD样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、白细胞介素(IL-10)水平更低(P<0.05);术毕拔管(T1)~术后1 d(T3)时肾上腺素(AD)、去甲肾上腺素(NE)、皮质醇(Cor)、内皮素(ET)水平和两组不同时间点的AD、NE、Cor、ET水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察组留观时间、住院时间与对照组比较,相对更短(P<0.05)。结论:椎管内麻醉用于老年髋关节置换术患者,降低对认知功能的影响,减轻应激反应。

吴茱萸碱调节Nod样受体蛋白3信号通路对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织损伤的影响

目的探讨吴茱萸碱调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)信号通路影响非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织损伤情况。方法2022年5—11月选取大鼠喂食高脂饲料8周后,通过随机数字表法将大鼠分为模型组、吴茱萸碱低剂量组(吴茱萸碱4 mg/kg)、吴茱萸碱中剂量组(吴茱萸碱8 mg/kg)、吴茱萸碱高剂量组(吴茱萸碱16 mg/kg)、阳性药组(多烯磷脂酰胆碱200 mg/kg)和NLRP3组(吴茱萸碱16 mg/kg+1 mg/kg NLRP3信号通路激活剂尼日利亚菌素),每组各10只,另有10只大鼠喂食普通饲料作为对照组,所有大鼠均给予相对应药物干预,给药4周;生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、胆固醇、三酰甘油(TG);HE染色观察肝组织病理;油红O染色观察肝组织脂肪沉积;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测大鼠肝脏组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠肝组织肝小叶结构紊乱,肝细胞增大,可见明显颗粒状脂滴以及脂质积累,并伴有炎症细胞浸润,肝组织脂肪变性明显,大鼠体质量[(582.65±16.25)g比(476.29±10.62)g]、肝指数[(3.79±0.25)%比(2.48±0.18)%]、血清GPT[(79.62±3.59)U/L比(36.22±2.15)U/L]、GOT[(185.25±5.18)U/L比(71.69±3.56)U/L]、胆固醇[(2.93±0.19)mmol/L比(1.72±0.12)mmol/L]、TG[(1.19±0.11)mmol/L比(0.56±0.07)mmol/L]、TNF-α[(162.48±4.25)ng/L比(41.76±2.49)ng/L]、IL-18[(135.75±3.37)ng/L比(23.52±2.02)ng/L]、IL-1β[(201.88±4.67)ng/L比(92.64±2.99)ng/L]水平,肝组织NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达以及NLRP3、ASC、活化胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,吴茱萸碱低、中、高剂量组和阳性药组大鼠肝组织损伤、肝脏脂肪变性、炎症细胞浸润和脂滴积累明显减轻,大鼠体质量[(551.37±15.72)g、(530.52±15.49)g、(509.48±15.18)g、(517.71±12.73)g比(582.65±16.25)g]、肝指数[(3.41±0.20)%、(3.13±0.16)%、(2.81±0.17)%、(3.02±0.213)%比(3.79±0.25)%]、血清GPT[(68.16±3.41)U/L、(55.94±3.05)U/L、(46.45±2.72)U/L、(48.71±2.34)U/L比(79.62±3.59)U/L]、GOT[(161.32±4.73)U/L、(138.64±4.50)U/L、(113.57±4.05)U/L、(121.48±4.11)U/L比(185.25±5.18)U/L]、胆固醇[(2.58±0.17)mmol/L、(2.25±0.16)mmol/L、(1.91±0.13)mmol/L、(1.99±0.15)mmol/L比(2.93±0.19)mmol/L]、TG[(1.01±0.10)mmol/L、(0.83±0.08)mmol/L、(0.62±0.07)mmol/L、(0.70±0.09)mmol/L比(1.19±0.11)mmol/L]、TNF-α[(137.15±3.69)ng/L、(113.53±3.34)ng/L、(79.37±2.92)ng/L、(85.61±3.07)ng/L比(162.48±4.25)ng/L]、IL-18[(111.34±3.05)ng/L、(72.98±2.66)ng/L、(47.61±2.438)ng/L、(51.59±2.55)ng/L比(135.75±3.37)ng/L]、IL-1β[(171.52±4.34)ng/L、(152.23±4.02)ng/L、(129.95±3.51)ng/L、(517.71±12.73)ng/L比(136.76±3.73)ng/L]水平,肝组织NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达以及NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达均明显降低(P<0.05);NLRP3信号通路激活剂尼日利亚菌素的加入明显减弱了吴茱萸碱对NAFLD大鼠肝组织的保护作用。结论吴茱萸碱可通过抑制NLRP3信号通路明显改善NAFLD大鼠肝组织损伤、脂肪病变和炎症反应。

基于NOD样受体蛋白3/半胱天冬酶-1信号通路探究槲寄生滴眼液对干眼症模型小鼠的治疗效果

目的基于NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(Caspase-1)信号通路探究槲寄生滴眼液对干眼症模型小鼠的治疗效果。方法将干眼症模型小鼠(采用苯扎氯铵溶液滴眼造模)随机分为模型组(以生理盐水干预)、槲寄生滴眼液组(槲寄生滴眼液滴眼5μL,每天2次)、NLRP3/Caspase-1通路抑制剂(VX-765)组(腹腔注射50 mg/kg VX-765,每天1次)、槲寄生滴眼液+VX-765组(槲寄生滴眼液滴眼5μL,每天2次,腹腔注射50 mg/kg VX-765,每天1次),每组12只。另取12只健康小鼠作为对照组(以生理盐水干预)。各组均持续给药14 d。酚红棉线测定泪液分泌情况;苏木精-伊红染色观察结膜上皮和泪腺组织病理改变情况;酶联免疫吸附试验测定血清白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别测定结膜上皮和泪腺组织NLRP3、Caspase-1 mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,模型组结膜上皮细胞排列紊乱,杯状细胞数量减少,固有层可见淋巴细胞浸润等病理损伤,泪腺组织呈现腺泡空泡样改变,结构不清晰,大小不均一,各小叶及腺泡间细胞排列紊乱等病理变化,泪液分泌量(酚红棉线被浸湿的长度,下同)[(2.66±0.42)mm比(6.14±1.09)mm,P<0.05]显著减少,血清IL-18[(53.16±6.95)pg/mL比(15.04±2.14)pg/mL,P<0.05]、IL-1β[(57.28±7.11)pg/mL比(24.51±3.06)pg/mL,P<0.05]、结膜上皮及泪腺组织NLRP3、Caspase-1 mRNA和蛋白[NLRP3 mRNA:(3.05±0.43)比(1.00±0.05),P<0.05;Caspase-1mRNA:(4.41±0.62)比(1.00±0.06),P<0.05;NLRP3蛋白:(1.33±0.21)比(0.17±0.03),P<0.05;Caspase-1蛋白:(1.51±0.26)比(0.20±0.04),P<0.05]表达显著升高。与模型组比较,槲寄生滴眼液组、VX-765组和槲寄生滴眼液+VX-765组结膜上皮和泪腺组织上述病理损伤减轻,泪液分泌量[(4.15±0.53)mm、(4.11±0.55)mm、(5.38±0.62)mm比(2.66±0.42)mm,P<0.05]显著增加,血清IL-18[(36.03±5.71)pg/mL、(35.92±5.66)pg/mL、(20.07±3.38)pg/mL比(53.16±6.95)pg/mL,P<0.05]、IL-1β[(40.85±5.04)pg/mL、(41.06±5.12)pg/mL、(28.08±4.57)pg/mL比(57.28±7.11)pg/mL,P<0.05]、结膜上皮和泪腺组织NLRP3、Caspase-1 mRNA和蛋白[NLRP3 mRNA:(2.11±0.32)、(2.09±0.29)、(1.37±0.22)比(3.05±0.43),P<0.05;Caspase-1 mRNA:(2.93±0.38)、(2.89±0.36)、(1.58±0.25)比(4.41±0.62),P<0.05;NLRP3蛋白:(0.60±0.11)、(0.59±0.09)、(0.19±0.04)比(1.33±0.21),P<0.05;Caspase-1蛋白:(0.72±0.12)、(0.74±0.11)、(0.23±0.05)比(1.51±0.26),P<0.05]表达显著降低。与槲寄生滴眼液组和VX-765组比较,槲寄生滴眼液+VX-765组结膜上皮和泪腺组织上述病理损伤进一步减轻,泪液分泌量[(5.38±0.62)mm比(4.15±0.53)mm、(4.11±0.55)mm,P<0.05]显著增加,血清IL-18[(20.07±3.38)pg/mL比(36.03±5.71)pg/mL、(35.92±5.66)pg/mL,P<0.05]、IL-1β[(28.08±4.57)pg/mL比(40.85±5.04)pg/mL、(41.06±5.12)pg/mL,P<0.05]、结膜上皮和泪腺组织NLRP3、Caspase-1 mRNA和蛋白[NLRP3 mRNA:(1.37±0.22)比(2.11±0.32)、(2.09±0.29),P<0.05;Caspase-1mRNA:(1.58±0.25)比(2.93±0.38)、(2.89±0.36),P<0.05;NLRP3蛋白:(0.19±0.04)比(0.60±0.11)、(0.59±0.09),P<0.05;Caspase-1蛋白:(0.23±0.05)比(0.72±0.12)、(0.74±0.11),P<0.05]表达显著降低。结论炎症,可能通过下调NLRP3/Caspase-1信号通路实现。

热性惊厥患儿外周血NOD样受体蛋白3炎症小体表达水平及临床意义

目的:探讨外周血NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体表达水平与热性惊厥患儿(FS)发生及预后的相关性。方法:选取90例FS儿童作为研究对象(FS组),其中52例单纯性热性惊厥患儿(SPS组);38例复杂性热性惊厥患儿(CFS组);另选取同期在我院因上呼吸道感染导致发热的25例患儿作为发热对照组及25名健康儿童体检者作为健康对照组。使用荧光定量PCR法检测各组外周血NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、Caspase-1)mRNA表达水平;比较各组间血清NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平等指标的差异;使用Pearson相关分析法探讨NLRP3 mRNA表达水平与FS患儿血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等指标的相关性;并使用受试者工作特征(ROC)曲线评价NLRP3 mRNA表达水平对FS的诊断价值和预后判断效能。结果:FS组外周血NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平高于发热对照组和健康对照组(P<0.05),且CFS组高于SPS组(P<0.05)。FS患儿外周血NLRP3 mRNA表达水平与FS患儿血清IL-1β(r=0.351)、IL-6(r=0.339)、TNF-α(r=0.342)水平均呈正相关关系(P<0.05)。与预后良好组(n=68)相比,预后不良组(n=22)外周血NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平增高(P<0.05)。ROC曲线分析显示,NLRP3 mRNA表达水平诊断FS的曲线下面积(AUC)为0.724(95%CI:0.617~0.814),预测预后的AUC为0.715(95%CI:0.611~0.809)。结论:NLRP3炎症小体可能参与了FS的发生及发展,其检测对于临床诊治和预后判断有重要意义。

NOD样受体蛋白3炎症小体在女性生殖系统疾病中的作用及机制研究进展

NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体是涉及免疫系统和炎症反应的蛋白质复合物。NLRP3炎症小体可被各种内源性或外源性因素激活,从而介导caspase-1依赖的细胞焦亡,触发促炎细胞因子白细胞介素-1β和白细胞介素-18的释放,是目前最受关注的炎症小体之一。NLRP3炎症小体与女性生殖系统相关疾病如盆腔炎症性疾病、生殖系统肿瘤、生殖内分泌疾病、妊娠相关疾病的发生、发展有关。本文就近年来NLRP3炎症小体在女性生殖系统相关疾病中的作用及机制进行综述,以期为进一步的研究提供思路。

Maresin1通过抑制NOD样受体家族蛋白3炎症小体活化改善糖尿病大鼠视网膜炎症反应

目的探讨Maresin1(MaR1)通过抑制NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎症小体介导的炎症反应来保护大鼠糖尿病视网膜病变(DR)。方法SPF级SD大鼠,建立糖尿病模型。按照随机数字表法分为4组:正常(Con)组、糖尿病(DM)组、MaR1组、MaR1+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(Nigericin)组。成模后,MaR1组4 ng/g MaR1腹腔注射给药,每周2次,Con组和DM组给予等量PBS注射。Nigericin组1 mg/kg Nigericin每天1次腹腔注射和4 ng/g MaR1每周2次腹腔注射联合给药。HE染色观察组织病理改变。免疫组化检测神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。ELISA测定视网膜白介素(IL)-18、IL-1β、IL-6水平。Western blot检测视网膜IL-18、IL-1β、IL-6、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天冬酰胺特异酶半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)表达。结果DM组神经节细胞(RGC)数量明显少于Con组,GFAP表达高于Con组,IL-18、IL-1β、IL-6、NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平高于Con组,差异有统计学意义(P<0.05)。MaR1组RGC数量多于DM组,GFAP表达低于DM组,IL-18、IL-1β、IL-6、NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平低于DM组,差异有统计学意义(P<0.01)。然而在MaR1组基础上给予NLRP3激活剂Nigericin后,MaR1的保护作用被逆转。结论MaR1能够明显抑制DR炎症反应,这可能与抑制NLRP3炎症小体激活有关。

基于NOD样受体热蛋白结构域3/胱天蛋白酶-1通路探讨鱼腥草注射液缓解脂多糖诱导的小鼠急性肺炎肺损伤的作用机制

目的探究鱼腥草注射液(HHI)对急性肺炎小鼠的保护作用及对NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(caspase-1)通路的调控作用。方法2019年7月至2020年6月,将购自广东省医学实验动物中心的90只BALB/c雄性小鼠分为正常对照组、模型组、HHI低(10 mL/kg)及高(30 mL/kg)剂量组、NLRP3激动剂(DDC)组(300 mg/kg)、HHI+DDC组(30 mL/kg+300 mg/kg),每组15只。除正常对照组外,其余各组均通过雾化吸入脂多糖(LPS)2.5 g/L建立急性肺炎模型。末次给药后检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平、中性粒细胞数目;取右肺,检测右肺湿重/干重(W/D);左肺组织病理损伤情况,肺组织凋亡相关斑点样蛋白(ASC)mRNA及蛋白、NLRP3 mRNA及蛋白、TNF-α、IL-6、caspase-1蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠出现肺泡破坏及炎性细胞浸润等病理损伤现象,W/D、IL-6[(1692.06±95.26)µg/L比(569.91±50.89)µg/L]、TNF-α[(1846.24±99.26)µg/L比(506.99±55.48)µg/L]水平及中性粒细胞数目[(66.24±2.56)×10^(6)个/毫升比(5.09±1.98)×10^(6)个/毫升]、肺组织NLRP3 mRNA及蛋白(1.01±0.13比0.22±0.12)、ASC mRNA及蛋白(1.03±0.13比0.29±0.11)、caspase-1(1.06±0.14比0.25±0.12)、TNF-α、IL-6蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,HHI低、高剂量组肺泡破坏及炎性细胞浸润等现象缓解,W/D、小鼠BALF中炎性因子IL-6[(1069.13±75.12)µg/L、(889.02±65.13)µg/L比(1692.06±95.26)µg/L]、TNF-α[(1225.33±84.02)µg/L、(806.63±69.12)µg/L比(1846.24±99.26)µg/L]含量及中性粒细胞数目[(45.33±2.22)×10^(6)个/毫升、(22.63±2.02)×10^(6)个/毫升比(66.24±2.56)×10^(6)个/毫升]、肺组织中NLRP3 mRNA及蛋白(0.83±0.11、0.52±0.12比1.01±0.13)、ASC mRNA及蛋白(0.82±0.12、0.54±0.11比1.03±0.13)、caspase-1(0.80±0.15、0.59±0.12比1.06±0.14)、TNF-α、IL-6蛋白表达降低(P<0.05);DDC组小鼠上述指标与HHI低、高剂量组相反(P<0.05)。结论HHI可通过抑制NLRP3/caspase-1通路激活,改善肺炎小鼠炎症反应,缓解肺损伤。

益气定眩饮通过Nod样受体蛋白-3炎性小体调节糖尿病合并缺血性脑卒中大鼠炎症因子的研究

目的:探讨益气定眩饮调节糖尿病合并缺血性脑卒中大鼠Nod样受体蛋白-3(NLRP3)炎性小体及白介素-18(IL-18)、IL-1β炎症因子的作用及机制。方法:将130只SD雄性大鼠复制糖尿病合并缺血性脑卒中动物模型并进行研究,成模后采用随机数字表法分为空白组、模型组、益气定眩饮组、丁苯酞胶囊组、益气定眩饮联合丁苯酞胶囊组。分别给予蒸馏水及相应药物干预3 d后,收集大鼠血清及脑组织。采用神经功能评分法评估大鼠神经功能变化;苏木精-伊红染色法观察脑组织形态结构;酶联免疫吸附测定检测血清炎症因子IL-18、IL-1β水平;逆转录PCR检测NLRP3炎症小体及半胱天冬酶-1(Caspase-1)表达。结果:与空白组比较,模型组均可改变大鼠脑组织结构,神经功能评分、IL-18水平、IL-1β水平、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,用药组均可改善大鼠脑病变组织结构,神经功能评分、IL-18水平、IL-1β水平、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表达降低(P<0.05),且与单一用药比较,联合用药组IL-18水平、IL-1β水平、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论:益气定眩饮可改善糖尿病合并缺血性脑卒中大鼠脑损害,降低脑NLRP3、Caspase-1蛋白及血清IL-18、IL-1β表达,减轻炎症状态,发挥治疗作用,且联合丁苯酞用药效果更佳。

电针百会、神庭对脂多糖诱导的抑郁样小鼠行为及海马NOD样受体蛋白3炎症小体的影响

目的观察电针百会、神庭对脂多糖(LPS)诱导的抑郁样小鼠行为及NOD样受体蛋白3炎症小体(NLRP3)的影响。方法将32只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组和氟西汀组,每组8只。模型组、电针组、氟西汀组小鼠每日予腹腔注射脂多糖(LPS)建立急性抑郁小鼠模型,连续5天。在造模同时,电针组每日予百会、神庭穴电针治疗,氟西汀组每日予氟西汀20 mg/kg灌胃,对照组、模型组小鼠每日予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,连续5天。干预结束后采用旷场实验、强迫游泳实验进行行为学测试,评估各组小鼠行为学变化。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测海马组织NLRP3、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达。结果旷场实验结果显示,各组小鼠的总运动总路程比较差异无统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠中央区域停留时间明显缩短(P<0.05);与模型组比较,电针组、氟西汀组小鼠中央区域停留时间均明显延长(P<0.05);与电针组比较,氟西汀组小鼠中央区域停留时间延长(P<0.05)。强迫游泳实验结果显示,与对照组比较,模型组小鼠不动时间明显延长(P<0.05);与模型组比较,电针组、氟西汀组小鼠不动时间均缩短(P<0.05);与电针组比较,氟西汀组小鼠不动时间缩短(P<0.05)。Western Blot结果显示,与对照组比较,模型组海马NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组比较,电针组、氟西汀组NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达均降低(P<0.05);电针组与氟西汀组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针治疗可显著改善LPS诱导的小鼠抑郁样行为,其作用机制可能与抑制NLRP3信号通路的活化有关。

NOD样受体家族蛋白3炎症小体对肝硬化轻微型肝性脑病的影响及诊断价值分析

目的探讨NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎症小体对肝硬化轻微型肝性脑病的影响及诊断价值。方法回顾性分析2020年2月至2021年8月北部战区总医院感染科确诊的145例乙型肝炎肝硬化患者的临床资料,采用单因素和多因素Logistics回归分析肝硬化轻微型肝性脑病的影响因素,绘制ROC曲线分析血浆NLRP3炎症小体对肝硬化轻微型肝性脑病的诊断价值。结果145例乙型肝炎肝硬化患者中,轻微型肝性脑病肝硬化患者62例,非轻微型肝性脑病肝硬化患者83例。轻微型肝性脑病肝硬化患者与非轻微型肝性脑病肝硬化患者年龄、性别、肝硬化病程及天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平比较差异无统计学意义;轻微型肝性脑病肝硬化患者外周血总胆红素(TBil)、血氨水平与数字连接实验-A、数字连接实验-B、数字符号实验、轨迹描绘实验、系列打点实验评分及血清白细胞介素6(IL-6)、NLRP3炎症小体水平均高于非轻微型肝性脑病肝硬化患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistics回归分析结果显示,TBil、血氨、IL-6及NLRP3炎症小体是肝硬化患者发生轻微型肝性脑病的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清NLRP3炎症小体诊断肝硬化轻微型肝性脑病的AUC为0.76,Cut-off值为52.35 ng/L,灵敏度为62.46%,特异度为95.00%。结论血清NLRP3炎症小体与乙型肝炎肝硬化轻微型肝性脑病关系密切,对该病诊断具有参考价值。

利拉鲁肽对糖尿病肾病大鼠NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3表达的影响

目的探讨利拉鲁肽是否通过抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的活化在糖尿病肾病(DN)中发挥肾脏保护作用。方法22只4周龄的Wistar品系雄性大鼠随机分为正常对照组(n=6)、利拉鲁肽组(n=8)和生理盐水组(n=8)。利拉鲁肽组予利拉鲁肽200μg/(kg·d)皮下注射,生理盐水组予等体积的生理盐水皮下注射,正常对照组不做任何处理,共治疗4周。治疗结束后检测大鼠体质量、24 h尿总蛋白定量(UTP)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)等生化指标,各组大鼠肾组织进行苏木素-伊红染色(HE),光镜下观察肾组织病理形态学改变,Western blot检测肾组织中NLRP3炎症小体相关蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素-18(IL-18)及血清白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。采用SPSS 26.0统计软件和Graph Prism 9.0软件进行分析及绘图。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用Tukey检验。结果利拉鲁肽组大鼠FBG、UTP、BUN、SCr、TC、TG等生化指标水平较生理盐水组改善(P<0.01)。肾脏组织病理切片提示正常对照组肾小球、肾小管结构正常;生理盐水组可见肾小球体积增大、结构紊乱,系膜外基质增多,基底膜增厚明显;利拉鲁肽组大鼠肾脏病理变化减轻。Western blot检测提示经过利拉鲁肽的干预,NLRP3炎症小体相关蛋白的表达明显低于生理盐水组;ELISA检测提示生理盐水组IL-18、IL-1β水平明显增加,经利拉鲁肽干预后,IL-18、IL-1β水平下降。结论利拉鲁肽可改变糖尿病肾病大鼠的疾病进程,这可能与利拉鲁肽抑制NLRP3炎症小体的激活有关。

巴戟天多糖通过上调沉默信息调节因子1抑制炎性牙周膜细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3的表达及活性

目的 探讨炎性微环境下巴戟天多糖(MOP)对牙周膜细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法 将30只大鼠随机分为对照组(n=6)和模型组(n=24),模型组采用正畸丝结扎法建立牙周炎模型,3周后每组各处死6只大鼠,Micro-CT检测确认建模成功。剩余模型组大鼠随机分为牙周炎自然恢复组、生理盐水(NS)组和MOP组。MOP组于大鼠左上颌第一磨牙腭侧注射MOP [200 mg/(kg·3d),50μL,持续4周],NS组注射等体积NS,牙周炎自然恢复组不做任何处理。取大鼠左上颌骨组织,采用苏木精-伊红(HE)染色观察牙周膜细胞病理改变,免疫组织化学检测SIRT1、NLRP3表达量。体外培养人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs),CCK-8检测MOP对细胞活性的影响。将第4代细胞分为对照组、炎症组(10μg/mL脂多糖)及实验组(5μmol/L MOP,5μmol/L MOP+10μg/mL脂多糖)。利用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot检测SIRT1和NLRP3表达变化,免疫沉淀及酶联免疫法(ELISA)分别检测NLRP3乙酰化及白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量。采用Prism 9.0软件对数据进行统计学分析。结果在体内实验中,MOP组较牙周炎自然恢复组和NS组NLRP3表达下降,SIRT1表达升高(P<0.05),炎细胞浸润减少。在体外实验中,与对照组相比,炎症组NLRP3 mRNA和蛋白表达量均增高(P<0.05),SIRT1表达降低(P<0.01);MOP能上调炎症细胞SIRT1表达(P<0.05),降低NLRP3表达及其乙酰化水平(P<0.05),减少上清液中IL-1β、IL-18含量(P<0.01)。结论 炎性牙周膜细胞SIRT1表达降低,NLRP3表达升高;MOP干预能促进SIRT1表达,导致NLRP3表达受抑制,同时通过去乙酰化作用使NLRP3乙酰化水平下降,从而NLRP3活性降低,由此发挥抑制炎症作用。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体在脑卒中后认知障碍中的研究进展

脑卒中后认知障碍(PSCI)是脑卒中患者常见的并发症,严重影响患者的生活质量。目前,PSCI在临床治疗中尚未发现有效的针对性治疗措施。大量研究证实核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的活化在PSCI中起关键作用,且对其进行的许多抑制性治疗显示出了改善认知障碍的功效。为此,本文总结了NLRP3炎症小体的活化和影响因素及其与PSCI的关系,发现在PSCI的细胞和动物模型中,针对NLRP3或其炎症小体成分的抑制措施可以减轻炎性反应和相应的病理特征,从而促进其认知功能的恢复,因此,靶向NLRP3炎症小体可能是PSCI治疗的新趋势。然而到目前为止,尽管许多药物和治疗措施已成功鉴定出能够抑制NLRP3炎症小体的活化,但其在临床中的治疗效果和安全性仍有待进一步验证。