炎症环境下牙髓成纤维细胞中NOD样受体蛋白3炎症体相关分子表达的调节

背景:NOD样受体蛋白3炎症体是细胞抵御外来病原入侵的重要炎性因子,前期研究已证实其在牙髓成纤维细胞中有表达,然而炎症环境下牙髓成纤维细胞NOD样受体蛋白3炎症体相关分子的转录调节机制尚不清楚。目的:阐明炎症环境下牙髓成纤维细胞中NOD样受体蛋白3炎症体相关分子的转录调节机制。方法:选择第4代牙髓成纤维细胞,分6组:A组正常培养,不进行任何处理;B组加入脂多糖刺激6 h;C组加入Toll样受体4特异性抑制剂处理1 h,再加入Toll样受体4特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;D组加入髓样分化因子88特异性抑制剂处理1 h,再加入髓样分化因子88特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;E组加入核因子κB特异性抑制剂处理1 h,再加入核因子κB特异性抑制剂与脂多糖混合溶液处理6 h;F组加入髓样分化因子88特异性抑制剂阴性对照处理1 h,再加入髓样分化因子88特异性抑制剂阴性对照与脂多糖混合溶液处理6 h。采用RT-PCR检测NOD样受体蛋白3、Caspase-1与白细胞介素1βmRNA的表达,Western blot检测NOD样受体蛋白3与Caspase-1蛋白表达,ELISA法检测白细胞介素1β释放水平。结果与结论:①与A组比较,B组NOD样受体蛋白3、Caspase-1及白细胞介素1βmRNA表达水平升高(P<0.05);与B组比较,C-E组NOD样受体蛋白3、白细胞介素1βmRNA表达水平降低(P<0.05),C组Caspase-1 mRNA表达水平降低(P<0.05);②与A组比较,B组NOD样受体蛋白3、Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与B组比较,C-E组NOD样受体蛋白3蛋白表达降低(P<0.05),C组Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05);③与A组比较,B组白细胞介素1β水平升高(P<0.05);与B组比较,C-E组白细胞介素1β水平降低(P<0.05);④结果表明,脂多糖通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路上调牙髓成纤维细胞内NOD样受体蛋白3和白细胞介素1β的表达。

慢性鼻窦炎患儿血清LTB4、NLRC4水平变化及对术后复发的预测价值

目的探究慢性鼻窦炎(CRS)患儿血清白三烯B4(LTB4)、Nod样受体家族蛋白4(NLRC4)水平变化及其临床意义。方法2020年1月至2021年10月选取接受鼻窦内窥镜治疗的184例CRS患儿(CRS组),根据术后3个月预后分为复发组与未复发组。另以同期100例体检健康儿童作为对照(NC)组。酶联免疫吸附法检测血清LTB4、NLRC4水平,比较各组血清LTB4、NLRC4水平。分析CRS组患儿在术前以及术后1周、4周、8周视觉模拟量表(VAS)评分、Lund-Kennedy评分及血清LTB4、NLRC4水平变化。采用Pearson法分析血清LTB4与NLRC4水平的相关性。多因素logistic回归分析CRS患儿术后复发的可能影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析术前血清LTB4、NLRC4对术后复发的预测价值。结果CRS组患儿血清LTB4水平为(62.85±13.17)pg/mL、NLRC4水平为(759.82±108.46)pg/mL,NC组的血清LTB4水平为(17.43±4.08)pg/mL、NLRC4水平为(203.75±36.93)pg/mL,两组比较差异均有统计学意义(P<0.001)。相关性分析显示,CRS组血清LTB4与NLRC4水平呈正相关性(r=0.638,P<0.001)。血清LTB4水平、NLRC4水平与CRS患儿年龄、性别、是否伴有鼻息肉无关(P>0.05)。术前、术后1周、术后4周、术后8周VAS评分、Lund-Kennedy评分及血清LTB4、NLRC4水平依次下降(P<0.05)。复发组术前血清LTB4水平为(77.62±15.85)pg/mL、NLRC4水平为(860.39±126.92)pg/mL,显著高于未复发组的(57.78±12.25)pg/mL、(725.32±102.13)pg/mL,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素logistic回归分析结果显示,术前血清LTB4、NLRC4水平均是CRS患儿复发的危险因素(OR=2.114,95%CI=1.129~3.958;OR=1.883,95%CI=1.190~2.979)(P<0.05或0.01)。NLRC4、LTB4及二者联合预测术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.839、0.824、0.913。结论慢性鼻窦炎患儿血清LTB4、NLRC4表达水平升高,且与预后密切相关,两者联合有望成为慢性鼻窦炎术后复发的早期预测指标。

基于VSIG4/NLRP3炎症复合通路探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响及其可能的作用机制。方法用卵清蛋白建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型。将Balb/c小鼠随机分为对照组(给予等量的0.9%NaCl处理)、模型组(卵清蛋白建模)、地塞米松组(腹腔注射4 mg·kg^(-1)的地塞米松)、低剂量实验组(腹腔注射100 mg·kg^(-1)的异甘草素)、高剂量实验组(腹腔注射200 mg·kg^(-1)的异甘草素),每组11只。在最后1次雾化激发后的24 h内,检测各组小鼠气道阻力后处死小鼠取支气管肺泡灌洗液及肺组织。用细胞计数板进行总细胞计数;用瑞氏-吉姆萨染色法进行细胞分类计数;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液炎性因子水平;用蛋白质印迹法检测肺组织蛋白表达水平。结果对照组、模型组、地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的气道阻力值分别为(0.84±0.08)、(3.34±0.34)、(1.23±0.15)、(2.47±0.19)和(1.54±0.18)cmH_(2)O·s^(-1),白细胞总数分别为(15.03±0.11)、(331.20±26.64)、(38.73±3.28)、(180.35±16.89)和(82.74±10.51)×10^(4)·mL^(-1),白细胞介素17(IL-17)水平分别为(4.79±0.58)、(19.21±2.39)、(6.35±0.81)、(15.96±1.10)和(9.04±0.65)pg·mL^(-1),含V型集和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)蛋白表达水平分别为0.67±0.04、0.24±0.04、0.59±0.06、0.37±0.04和0.53±0.05,NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白表达水平分别为0.24±0.02、0.74±0.07、0.35±0.04、0.65±0.08和0.44±0.03。模型组的上述指标与对照组比较,地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异甘草素可能通过调节VSIG4/NLRP3复合炎性通路,降低气道阻力、抑制炎性介质的释放改善中性粒细胞哮喘小鼠气道炎性。

细菌鞭毛蛋白作为佐剂的研究进展

细菌鞭毛蛋白作为Toll样受体5(TLR5)或NOD样受体C4(NLRC4)的配体,其结构决定了其既有抗原性又具有佐剂效应。将细菌鞭毛蛋白与外源抗原混合或融合表达,已获得多种有效的候选疫苗。细菌鞭毛蛋白佐剂效应主要是通过TLR5和NLRC4信号途径协同实现的。TLR5位于细胞表面,可触发炎性因子、趋化因子和Ⅰ型干扰素的分泌,启动天然免疫应答。NLRC4是细胞质中的模式识别受体,可识别细胞质中的多种配体并诱导相应免疫应答。另外,细菌鞭毛蛋白能募集T淋巴细胞和B淋巴细胞至次级淋巴器官,促进DCs和T淋巴细胞的活化。细菌鞭毛蛋白的可塑性将会使得以细菌鞭毛蛋白为基础的疫苗成为当前和未来研究的热点。

基于肠黏膜屏障及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨燮和饮改善PCOS-IR小鼠炎症反应的影响

目的:探讨燮和饮对改善肥胖型多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR),减缓炎症反应的可能作用机制。方法:将60只SPF级雌性C57BL/6J小鼠随机抽取10只,并设为正常组,其余小鼠均采用粪菌混悬液(2 g·kg^(-1))联合来曲唑溶液(0.002 g·kg^(-1))灌胃4周建立PCOS-IR模型。将模型复制成功的动物随机分为模型组,二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1))及燮和饮低、中、高剂量组(10,20,40 g·kg^(-1)),给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续治疗4周。除空白组外,其余各组小鼠在治疗期间持续灌胃粪菌混悬液和来曲唑溶液以维持模型。动物每周称1次体质量;治疗结束后测量空腹血糖(FBG);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清睾酮(T),促卵泡生成素(FSH),促黄体生成素(LH),空腹胰岛素(FINS)水平,计算LH/FSH及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)值;摘取子宫和双侧卵巢称质量后固定,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠结肠组织中Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路及下游炎症相关因子半胱氨酸天冬氨酸水解酶-1(Caspase-1),白细胞介素-1β(IL^(-1)β),紧密连接蛋白-1(ZO-1),闭合蛋白(occludin)表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量显著升高(P<0.01);血清FBG,FINS和HOMA-IR明显升高(P<0.05);血清T,LH/FSH显著升高(P<0.01);子宫脏器比显著降低(P<0.01),卵巢脏器比显著升高(P<0.01),镜下可见卵巢中囊性扩张卵泡及闭锁小卵泡数量明显增多,黄体数量显著减少,卵泡颗粒细胞层减少,卵泡膜显著增厚;结肠组织中ZO-1,occludin的相对表达量显著下调(P<0.01),炎症相关蛋白TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL^(-1)β表达量明显上调(P<0.05)。与模型组比较,燮和饮低、中、高剂量组小鼠体质量显著降低(P<0.01);燮和饮中、高剂量组血清FBG,FINS,HOMA-IR明显降低(P<0.05);高剂量组血清T,LH/FSH显著降低(P<0.01);卵巢脏器比明显降低(P<0.05),子宫脏器比显著升高(P<0.05),卵巢中囊状卵泡明显减少,内见黄体,卵巢颗粒细胞正常排列,卵泡膜略增厚;高剂量组结肠组织TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL^(-1)β蛋白表达显著下调(P<0.01),ZO-1,occludin蛋白表达量显著上调(P<0.01)。结论:燮和饮调控肠道TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,减少下游炎症因子释放,通过重建肠黏膜屏障功能及抑制肠道炎症反应,改善肥胖和IR,从而逆转PCOS-IR。

瘦素预处理对机械通气肺损伤大鼠NLRC4炎症小体表达的影响

目的探讨瘦素预处理对机械通气肺损伤(VILI)大鼠NLRC4炎症小体表达的影响。方法健康雄性SD大鼠36只,体质量200~250 g,6~8周龄,采用随机数字表法分为3组:对照组、VILI模型组和瘦素组,每组12只。对照组麻醉后气管插管并保留自主呼吸;VILI模型组连接小动物呼吸机行机械通气,潮气量40 ml/kg,容量控制通气4 h;瘦素组气管插管后腹腔注射外源性重组瘦素50μg/kg,应用40 ml/kg潮气量行呼吸机机械通气4 h。机械通气结束时采集股动脉血样,进行动脉血气分析,并记录PaO_(2)。处死大鼠,收集剩余血液和支气管肺泡灌洗液(BALF),离心后用酶联免疫吸附试验检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的浓度。取右肺上叶组织行苏木素-伊红染色,光镜下观察病理学结果,并行病理损伤评分;取右肺中叶组织计算湿/干重比值;取右肺下叶组织采用蛋白质印迹法检测caspase-1、NLRC4的表达水平。结果与对照组相比,VILI模型组和瘦素组肺损伤评分、湿/干重比值、血清中IL-18和IL-1β、BALF中IL-18和IL-1β、肺组织中caspase-1和NLRC4表达明显升高(P值均<0.01),PaO_(2)明显下降(P<0.01);与VILI模型组比较,瘦素组肺损伤评分、湿/干重比值、血清中IL-18和IL-1β、BALF中IL-18和IL-1β、肺组织中caspase-1和NLRC4蛋白表达量降低(P值均<0.05),PaO_(2)升高(P<0.05)。结论外源性瘦素预处理可明显减轻大鼠VILI,其机制可能与抑制NLRC4炎症小体活化、减轻肺组织炎症反应有关。

木瓜总三萜和吲哚美辛联用对弗氏完全佐剂诱导大鼠类风湿性关节炎的治疗作用研究

目的:观察木瓜总三萜和吲哚美辛联用对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用,并探寻其可能作用机制。方法:将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、吲哚美辛5 mg/kg组、木瓜总三萜100 mg/kg组、木瓜总三萜100 mg/kg+吲哚美辛5 mg/kg联用组。除正常对照组外,各组大鼠右后脚底皮下注射弗氏完全佐剂(CFA)。14 d后,灌胃给予相应药物,1次/d,连续28 d,计算足肿胀度及关节炎指数评分。末次给药次日,取血和踝关节滑膜组织,检测血清中活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)和内源性抗氧化酶活性,踝关节中炎症因子含量、滑膜组织和溶酶体中组织蛋白酶B和D、β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖醛酸酶活性及形态学分析;实时定量PCR和Western blot法检测踝关节组织中Toll样受体4/核因子κB/NOD样受体家族3(TLR4/NF-κB/NLRP3)通路相关的mRNA和蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠足肿胀度、关节炎指数评分显著增加(P<0.01),软骨破坏和炎性浸润出现,血清中ROS、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、LDH和踝关节组织中环氧酶(COX-1)、COX-2、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-18及踝关节组织蛋白酶B、D、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶和溶酶体细胞器胞质中β-葡萄糖醛酸酶、组织蛋白酶D含量显著升高(P<0.01),血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和踝关节组织中IL-4、IL-10含量及细胞器溶酶体中组织蛋白酶D、β-葡萄糖醛酸酶活力或含量显著降低(P<0.01),踝关节组织中Tlr4、髓样分化因子(Myd88)、Nlrp3、凋亡相关的斑点样蛋白(Asc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase1)、Cox1、Cox2、Pge2mRNA及磷酸化IκB激酶-α(p-IκBα)、磷酸化KB抑制蛋白激酶β(p-IKKβ)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、细胞有丝分裂相关酶(NEK7)、NLRP3、ASC、Pro-caspase-1、Caspase-1、消皮素(GSDMD)、GSDMD的N端结构域(GSDMD-N)、Pro-IL-1β、Pro-IL-18、胞核中NF-κB p65蛋白表达显著上调和p-IκBα/IκBα、p-IKKβ/IKKβ比值显著增加(P<0.01),胞浆中NF-κB p65蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,木瓜总三萜100 mg/kg和吲哚美辛5 mg/kg联用组大鼠足肿胀度、关节炎指数评分显著降低(P<0.01),软骨破坏和炎性浸润减少,踝关节组织中COX-1活力和mRNA表达显著上调(P<0.01),血清中ROS、LDH、氧化应激指标、踝关节组织中细胞因子、踝关节组织及溶酶体细胞器和胞质中溶酶体酶活力以及TLR4/NF-κB、NLRP3炎症小体信号通路相关的mRNA和蛋白表达被显著逆转(P<0.01)。结论:木瓜总三萜100 mg/kg和吲哚美辛5 mg/kg联用对模型大鼠有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制CFA诱导AA模型大鼠氧化应激和TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活,减轻炎症反应及纠正溶酶体功能障碍有关。