微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。

宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号减弱,细胞骨架损伤状态改善。结论 芪地糖肾方可通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡相关通路激活改善高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤。

杨梅素调节NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路对肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞焦亡的影响

目的探讨杨梅素(myricetin,MYR)调节NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain,leucine-rich repeat and pyrin domain-containing 3,NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路对肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞焦亡的影响。方法将人II型肺泡上皮细胞(human type II alveolar epithelial cells,AT II)随机分为5组:对照组、模型组、L-MYR组(20μg/mL)、M-MYR组(40μg/mL)、H-MYR组(80μg/mL)、ATP组(80μg/mL MYR+2 mmol/L NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路激活剂ATP),且除对照组正常培养,其余各组以肺炎链球菌感染建立损伤模型。采用MTT和平板克隆实验检测细胞增殖;TUNEL检测细胞焦亡;ELISA检测细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)水平;Western blotting检测细胞中NLRP3、cleaved caspase-1、焦孔素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-1β蛋白表达。结果与对照组相比,模型组细胞的A 490、克隆数降低,细胞焦亡率、IL-1β、IL-18、LDH、NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD、IL-1β表达升高(P<0.05);与模型组相比,L-MYR组、M-MYR组、H-MYR组细胞的A 490、克隆数升高,细胞焦亡率、IL-1β、IL-18、LDH、NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD、IL-1β表达较低(P<0.05);与H-MYR组相比,ATP组细胞的A 490、克隆数降低,细胞焦亡率、IL-1β、IL-18、LDH、NLRP3、cleaved caspase-1、GSDMD、IL-1β表达升高(P<0.05)。结论MYR可能通过抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路,减轻肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎症反应,抑制细胞焦亡。

瑞马唑仑调节NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路对LPS诱导的神经元焦亡的影响

目的 探讨瑞马唑仑(REM)调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的神经元焦亡的影响。方法 将对数期小鼠海马神经元HT22细胞随机分为正常对照组(Ctrl组)、LPS诱导组(LPS组,10 mg/L LPS)、低浓度REM组(REM-低组,160μmol/L REM)、高浓度REM组(REM-高组,320μmol/L REM)和REM-高+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(REM-高+尼日利亚菌素组,320μmol/L REM+10μmol/L尼日利亚菌素)。除Ctrl组外,其余各组HT22细胞均使用LPS进行诱导。各组加药处理后,采用细胞计数试剂盒8测定HT22细胞的吸光度(A值)。采用Hoechst33342/碘化吡啶(PI)染色检测HT22细胞焦亡率。采用酶联免疫吸附试验检测HT22细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HT22细胞中NLRP3信使RNA(mRNA)、Caspase-1 mRNA、GSDMD mRNA表达水平。采用蛋白质印迹法检测HT22细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达水平。结果 LPS组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于Ctrl组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于Ctrl组(P<0.05)。REM-低组和REM-高组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著高于LPS组,且REM-高组高于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05),而REM-低组和REM-高组HT22细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平显著低于LPS组,且REM-高组低于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。REM-高+尼日利亚菌素组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于REM-高组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于REM-高组(P<0.05)。结论 REM可能通过下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路减轻LPS诱导的神经元焦亡。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3炎症小体的活化调节与牙周疾病的关系

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员(NLRP)3炎症小体是一种位于细胞质内的多蛋白质复合体,由其核心成分感知病原体和宿主危险信号后组装而成,通过激活半胱氨酸天冬酰胺特异蛋白酶-1致促炎因子白细胞介素(IL)-1β成熟与分泌参与免疫炎症反应。牙周病是由宿主和微生物因素相互作用导致的局部炎症反应,而IL-1β又是牙周炎发病的关键因素之一。IL-1β的成熟和分泌与NLRP3炎症小体密切相关,且牙周致病菌可调节该炎症小体的表达及活化,因此NLRP3炎症小体对牙周疾病的发生发展和治疗具有重要意义。本文就NLRP3炎症小体的生物学功能、活化机制及其在牙周病学领域的研究进展作一综述。

Nod样受体蛋白-3(NLRP3)炎症小体在翼状胬肉中的表达

目的观察翼状胬肉组织和正常结膜组织中Nod样受体蛋白-3(Nod-like receptor pyrin domain3,NLRP3)炎症小体、细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)的表达,探讨NLRP3炎症小体在翼状胬肉发生过程中的作用。方法选取20例翼状胬肉组织和6例正常结膜组织为实验对象,采用免疫组织化学法检测NLRP3、IL-1β蛋白的表达,通过Western-blot检测半胱天冬酶-1(cysteine-aspartic acid protease 1,Caspase-1)及Procaspase-1的蛋白表达水平,并通过实时荧光定量PCR检测白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的基因表达水平。结果 NLRP3在正常结膜上皮细胞中无表达,而在翼状胬肉组织的基底部呈阳性表达;IL-1β在正常结膜组织中无表达,而在翼状胬肉组织中呈阳性表达;Pro-caspase-1在正常结膜组织和翼状胬肉中的表达差异无统计学意义(P>0.05),而其活性形式Caspase-1在翼状胬肉组织中的表达明显高于正常结膜组织(P<0.05);IL-18在胬肉组织中的平均表达水平明显高于正常结膜组织(P<0.05)。结论 NLRP3信号通路活化后,其下游信号分子Caspase-1、IL-1β、IL-18在翼状在胬肉组织中异常高表达,说明NLRP3炎症小体及相关信号通路可能在翼状胬肉的进展过程中发挥作用。

丙泊酚通过NLRP3/ASC/Caspase-1通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响

目的探讨丙泊酚通过核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响。方法将肺癌A549细胞随机分为空白对照组、低浓度丙泊酚组(30μmol/L)、中浓度丙泊酚组(60μmol/L)、高浓度丙泊酚组(120μmol/L)、高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组(120μmol/L+100 nmol/L);各组进行相应处理后。四甲基偶氮唑蓝法检测肺癌A549细胞增殖;酶联免疫吸附法检测肺癌A549细胞上清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;Hoechst/碘化丙啶(PI)双重染色检测肺癌A549细胞焦亡;荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测肺癌A549细胞增殖[原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)]、焦亡[消皮素D-N端(GSDM D-N)、IL-1β]及NLRP3、ASC、Caspase-1信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。结果空白对照组细胞呈蓝色荧光;低、中、高浓度丙泊酚组红色荧光逐渐增加;与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组红色荧光较少;表明丙泊酚可促进肺癌A549细胞焦亡,NLRP3抑制剂可反转高浓度丙泊酚的作用效果。与空白对照组相比,低、中、高浓度丙泊酚组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平依次降低,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平依次升高(P<0.05);与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平升高,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论丙泊酚可能通过激活NLRP3/ASC/Caspase-1通路来抑制肺癌A549细胞增殖,促进细胞焦亡。

弱精子症患者精浆炎症相关细胞因子Chemerin、Caspase-1、NLRP3、IL-18及IL-1β水平变化观察

目的观察弱精子症(AS)患者精浆炎症相关细胞因子趋化素(Chemerin)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)及IL-18的水平变化。方法81例AS患者根据病情严重程度分为轻度AS组36例、中度AS组25例和重度AS组20例,另选择46例健康体检者为对照组,留取各组精液标本,采用ELISA法检测精浆Chemerin、NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18采用Pearson相关分析或Spearman相关分析法分析精浆Chemerin、NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18水平与精液质量的相关性,采用单因素及二元Logistic多因素回归分析法分析AS发生的危险因素。结果与对照组相比,轻中重AS组患者精浆Chemerin、NLRP3、Caspase-1、IL-18及IL-1β水平高(P均<0.05)。与轻度AS相比,中度AS患者精浆Chemerin、Caspase-1、IL-18水平(P均<0.05)与中度AS者相比,重度AS患者精浆Chemerin及NLRP3水平高(P均<0.05)。精浆中Chemerin、NLRP3、Caspase-1、IL-18及IL-1β水平与AS患者前向运动精子比例(PR)及精子总活力呈负相关(P均<0.05)。精浆中Chemerin、Caspase-1、IL-18及IL-1β水平升高是AS发生的危险因素(P均<0.05)。结论AS患者精浆Chemerin、NLRP3、Caspase-1、IL-18及IL-1β升高,且随病情加重,精浆Chemerin、NLRP3、Caspase-1、IL-18及IL-1β升高更明显。精浆Chemerin、Caspase-1、IL-18及IL-1β水平升高可能促进AS的发生发展。

褪黑素调控NLRP3/caspase-1通路减轻脂多糖诱导的人肺泡上皮细胞损伤

目的探讨褪黑素通过调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(A549)损伤的影响。方法体外培养A549细胞,分为对照组、LPS组(10 mg/L LPS)、LPS+褪黑素组(LPS+MT组,10 mg/L LPS+800μmol/L褪黑素)、LPS+抑制剂组(10 mg/L LPS+10μmol/L MCC950)。应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平;RT-qPCR法检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平;Western blot法检测细胞中NLRP3、caspase-1蛋白表达水平。结果与对照组比较,LPS组A549细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低,细胞凋亡率、G0/G1期比例、TNF-α、IL-1β、IL-6水平和NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,LPS+MT组与LPS+抑制剂组A549细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例显著升高,细胞凋亡率、G0/G1期比例、TNF-α、IL-1β、IL-6水平和NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论褪黑素可减轻LPS诱导的A549细胞损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3/caspase-1信号通路有关。

子宫内膜异位症患者异位子宫内膜组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达变化观察

目的 观察子宫内膜异位症(EMs)患者异位子宫内膜组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β、IL-18表达变化,分析NLRP3、Caspase-1与EMs患者临床病理特征的关系,以探讨炎症与EMs发生发展中的作用。方法 取80例EMs患者(EMs组)异位子宫内膜组织及80例同期住院子宫肌瘤患者(非EMs组)正常子宫内膜组织,采用免疫组织化学染色法检测组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18;收集上述受试对象中的30例EMs患者和30例子宫肌瘤患者腹腔冲洗液,采用酶联免疫吸附法检测腹腔冲洗液中IL-1β、IL-18。结果 EMs组异位子宫内膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达阳性者分别为46(57.50%)、52(65.00%)、59(73.75%)、55例(68.75%),非EMs组正常子宫内膜组织中分别为32(40.00%)、36(45.00%)、44(55.00%)、42例(52.50%)。两组比较,P均<0.05。EMs组腹腔冲洗液中IL-1β、IL-18水平高于非EMs组(P均<0.01)。不同临床分期及是否存在痛经的EMs患者异位子宫内膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达阳性率比较,P均<0.05。结论 EMs患者异位子宫内膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18高表达,NLRP3、Caspase-1表达水平与患者病情有关。

平喘颗粒对哮喘小鼠NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路的影响

目的 观察平喘颗粒对哮喘小鼠NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路的影响,探讨平喘颗粒治疗哮喘的作用机制。方法 将40只健康雌性小鼠随机分为空白组、模型组、布地奈德组及平喘颗粒组,每组10只。除空白组外,其余组建立哮喘模型。于致敏的前1 d开始,布地奈德组给予布地奈德混悬液0.5 mg/mL雾化吸入30 min,平喘颗粒组给予平喘颗粒药液31.2 g/kg灌胃,空白组和模型组给予等体积的0.9%氯化钠注射液灌胃,均连续干预4周。末次干预结束后,HE染色观察各组小鼠肺组织病理改变,ELISA检测肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)水平,RT-qPCR检测肺组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组小鼠气道大量炎性细胞浸润,肺泡灌洗液中IL-6、IL-18水平和肺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,平喘颗粒组和布地奈德组小鼠气道炎症浸润明显减轻,肺泡灌洗液中IL-6、IL-18水平和肺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),且平喘颗粒组肺泡灌洗液中IL-6水平和肺组织中NLRP3 mRNA相对表达量均明显低于布地奈德组(P均<0.05)。结论 平喘颗粒能够明显减轻哮喘小鼠的气道炎症,其作用机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路有关。

地塞米松对脂多糖诱导人视网膜色素上皮细胞炎症损伤及NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的探究地塞米松(Dex)对脂多糖(LPS)诱导人视网膜色素上皮(HRPE)细胞炎症损伤及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路的影响。方法体外培养ARPE-19细胞株,MMT法检测不同浓度Dex处理细胞24 h、48 h、74 h对LPS诱导ARPE-19细胞存活率的影响,确定Dex最佳处理浓度和时间。ARPE细胞随机分为:正常对照组(NC组)、LPS组(5 mg·L^-1 LPS)、Dex组(0.20 mol·L^-1 Dex)、Dex+LPS组(0.20 mol·L^-1 Dex+5 mg·L^-1 LPS),RT-qPCR检测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量,ELISA法测定TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白表达水平,Western blot检测NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平。结果同一时间点,与NC组比较,LPS组ARPE-19细胞存活率均显著降低(均为P<0.05),且随着Dex浓度增加,细胞存活率呈先升高后下降的趋势;0.20 mol·L^-1 Dex作用LPS诱导的ARPE-19细胞24 h时细胞存活率为(90.77±5.73)%,接近NC组,因此选用0.20 mol·L^-1 Dex作用24 h用于后续实验。NC组与Dex组间TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与NC组、Dex组比较,LPS组、Dex+LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均显著升高,且Dex+LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6、NLRP3、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于LPS组(均为P<0.05)。结论Dex可能通过抑制NLRP3/Caspase-1通路减轻LPS诱导的HRPE炎症损伤。

老年痛风性关节炎患者血清NALP3、Caspase-1、IL-18水平及与肾功能指标相关性分析

血尿酸(SUA)升高是痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者的主要病理特征,同时伴有大量的炎症因子浸润,临床表现为痛风石和疼痛等,严重者还可出现关节畸形和功能障碍,造成肾功能损伤,甚至肾功能衰竭[1-2]。研究证实[3-4],炎性因子在AGA的发生发展及肾功能损害中均发挥了重要作用。

基于NLRP3/caspase-1通路探讨芹菜素对脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征小鼠肺损伤的保护作用

目的基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-1通路探讨芹菜素对脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺损伤的保护作用。方法48只BALB/c健康、雄性小鼠分对照组、模型组、芹菜素组、芹菜素+NLRP3激活剂组各12只,除对照组,其余各组气道滴入2 mg/kg脂多糖(LPS)50μl,对照组相同方法滴入50μl磷酸盐缓冲液(PBS)。2 h后芹菜素组腹腔注射20 mg/kg芹菜素,芹菜素+NLRP3激活剂组腹腔注射20 mg/kg芹菜素+NLRP3激活剂尿酸单钠盐(MSU)。测定肺组织湿/干重比值;苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织形态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液和肺组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;Western印迹检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1、pro-caspase-1蛋白水平。结果模型组肺组织断链、破损现象明显,大量炎症细胞浸润,肺泡间隔增厚;芹菜素组肺组织损伤状况明显减轻,仅出现少量炎症细胞浸润,肺泡间隔厚度变薄;芹菜素+NLRP3激活剂组肺组织症状介于模型组和芹菜素组之间。与对照组相比,模型组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,芹菜素组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05);与芹菜素组相比,芹菜素+NLRP3激活剂组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论芹菜素可通过NLRP3/caspase-1通路抑制炎症反应,从而实现对脓毒症诱导的ARDS小鼠肺损伤的保护。

磷酸甘油酸变位酶5调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用

目的研究磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤(IRI)中的作用及分子机制。方法建立C57小鼠肝脏IRI模型,随机分别予再灌注6 h(6 h组)与12 h(12 h组),并设立假手术组(Sham组),每组10只。分析IRI对小鼠肝组织及血清学指标的影响;分析小鼠肝脏IRI过程中PGAM5、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1的表达情况。建立肝细胞IRI模型(IRI组),采用Caspase-1抑制剂Z-YVAD-FMK预处理后再建立肝细胞IRI模型(抑制剂组),将未处理的AML12细胞作为对照组,分析抑制Caspase-1活性对细胞焦亡的影响。采用脂质体3000将PGAM5小干扰核糖核酸(siRNA)(siRNA组)和siRNA阴性对照(siRNA-NC)(siRNA-NC组)转染至AML12细胞,再建立肝细胞IRI模型,将未处理的AML12细胞作为对照组,分析PGAM5调控细胞焦亡对肝细胞IRI的影响。结果 6 h组和12 h组小鼠肝组织中部分肝细胞水肿,肝窦区变窄,中央静脉充血,偶见点灶状坏死等,且12 h组较6 h组病变加重。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平升高,且12 h组高于6 h组;6 h组和12 h组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组小鼠肝组织IL-1β信使核糖核酸(mRNA)相对表达量升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组肝组织细胞凋亡率升高,12 h组低于6 h组(P<0.01~0.05)。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠肝组织PGAM5 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均升高,且12 h组高于6 h组(P<0.01~0.05);6 h组和12 h组肝组织PGAM5、Caspase-1蛋白表达增多。IRI组细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、裂解Caspase(cleaved Caspase)-1及Gasdermin D(GSDMD)蛋白相对表达量较对照组升高,GSDMD荧光强度较对照组增强;抑制剂组NLRP3、cleaved Caspase-1及GSDMD蛋白相对表达量较IRI组下降,GSDMD荧光强度较IRI组减弱(P<0.01~0.05)。与对照组比较,siRNA-NC组细胞存活率下降,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量升高(P<0.01~0.05);与siRNA-NC组比较,siRNA组细胞存活率升高,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量下降(P<0.01~0.05)。结论 PGAM5可加重小鼠肝脏IRI,其机制可能为通过PGAM5/Caspase-1/GSDMD信号通路调控细胞焦亡,加速肝细胞损伤。

几丁质酶-3样蛋白1对脂多糖诱导小鼠骨骼肌卫星细胞炎症损伤相关分子表达的影响

目的探讨在脓毒症模型中几丁质酶-3样蛋白1(CHI3L1)介导骨骼肌干细胞损伤的潜在机制。方法用6种浓度的脂多糖(LPS)刺激体外培养的小鼠骨骼肌卫星细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和细胞增殖与毒性试剂盒(CCK-8)筛选出细胞处理最佳浓度。构建CHI3L1过表达和干扰载体转染骨骼肌卫星细胞,采用聚合酶链反应(PCR)、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)验证转染效率。将细胞按随机数字表法分为空白对照组(不加任何干预的细胞)、模型组(LPS刺激未转染的细胞)、过表达CHI3L1组(LPS刺激转染了CHI3L1过表达质粒的细胞)、过表达CHI3L1对照组(LPS刺激转染了空载质粒的细胞)、干扰CHI3L1组(LPS刺激转染了CHI3L1干扰序列的细胞)、干扰CHI3L1对照组(LPS刺激转染了CHI3L1干扰序列阴性对照的细胞)。采用ELISA检测细胞外天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用Western blotting检测细胞中IL-1β、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平。结果根据CCK-8和ELISA检测结果筛选出最佳浓度为5 mg/L的LPS进行后续实验,且PCR、Western blotting证实转染有效。与空白对照组比较,模型组细胞外IL-1β、caspase-1含量和细胞中Akt、p-Akt、IL-1β的蛋白表达水平均明显升高〔IL-1β(ng/L):11.22±0.55比8.63±0.63,caspase-1(pmol/L):9.47±0.22比8.65±0.15,Akt/GAPDH:1.36±0.12比1.06±0.15,p-Akt/GAPDH:0.78±0.07比0.09±0.01,IL-1β/GAPDH:1.38±0.12比0.18±0.03,均P<0.05〕。与模型组、过表达CHI3L1对照组比较,过表达CHI3L1组细胞外IL-1β、caspase-1含量和细胞中p-Akt、IL-1β的蛋白表达均明显升高〔IL-1β(ng/L):14.93±0.97比11.22±0.55、9.38±0.40,caspase-1(pmol/L):10.35±0.03比9.47±0.22、8.46±0.24,p-Akt/GAPDH:1.21±0.04比0.78±0.07、0.63±0.04,IL-1β/GAPDH:1.87±0.08比1.38±0.12、1.51±0.17,均P<0.05〕。与模型组、干扰CHI3L1对照组比较,干扰CHI3L1组细胞外IL-1β和caspase-1含量及细胞中p-Akt、IL-1β的蛋白表达均明显降低〔IL-1β(ng/L):8.98±0.73比11.22±0.55、10.44±0.65,caspase-1(pmol/L):7.61±0.63比9.47±0.22、8.37±0.38,p-Akt/GAPDH:0.50±0.04比0.78±0.07、0.94±0.06,IL-1β/GAPDH:0.77±0.02比1.38±0.12、1.13±0.07,均P<0.05〕。结论CHI3L1可能通过caspase-1和IL-1β介导脓毒症模型中小鼠骨骼肌干细胞的损伤;CHI3L1可能参与了调控骨骼肌干细胞中Akt的信号通路,而对STAT3信号通路无明显影响。

中药干预NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血术后脑血管痉挛研究进展

动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)是一种常见的脑血管疾病,也是目前临床上最难治疗的脑血管疾病之一,其中血管痉挛(CVS)是aSAH后预后不良的关键因素之一。NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路参与了aSAH后CVS的病理进程,导致脑血管平滑肌细胞凋亡、炎性因子释放,并激活氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等多种病理机制。目前临床多采用尼莫地平、法舒地尔、克拉生坦及他汀类药物治疗,然而目前尚无一种治疗方法可以完全预防或消除术后血管痉挛的发生。中药在治疗aSAH后CVS方面具有多功能、多靶点、多途径的优势,可为aSAH后CVS的治疗提供新的临床思路。本研究主要对NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路在aSAH后CVS中的作用进行综述,以期为中药干预NF-κB/NLRP3/Caspase-1信号通路治疗aSAH后CVS提供理论基础。

腰椎融合术后手术部位感染外周血NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的表达水平

目的分析腰椎融合术后手术部位感染(SSI)外周血核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1/白细胞介素-1β(NLRP3/Caspase-1/IL-1β)信号通路的表达。方法选取2016年6月-2021年6月河南中医药大学第二附属医院收治的行腰椎融合治疗患者术后发生SSI患者76例为研究组,同期未感染患者80例为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测外周血单个核细胞(PBMCs)中NLRP3炎性小体组分NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和Caspase-1 mRNA及蛋白相对表达,检测血清IL-1β、IL-18、IL-33、C-反应蛋白(CRP)及降钙素原(PCT)水平。结果研究组PBMCs中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA及蛋白表达均高于对照组(P<0.05);研究组患者血清IL-1β、IL-18、IL-33、CRP和PCT水平均高于对照组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,腰椎融合治疗术后感染患者NLRP3 mRNA及蛋白表达分别与CRP、PCT呈正相关(P<0.05),IL-1β、IL-18和IL-33分别与CRP呈正相关(P<0.05)。结论NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路可能参与腰椎融合治疗患者术后SSI的发生发展。

丁苯酞通过NLRP3炎性小体信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞焦亡的影响

目的探讨不同剂量丁苯酞通过NLRP3炎性小体信号通路对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1(IL-1)蛋白表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠50只根据随机分组法分为5组:假手术组、丁苯酞低剂量治疗组、丁苯酞中剂量治疗组、丁苯酞高剂量治疗组和模型组,各10只。采用Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血2 h行再灌注,再灌注24 h后行神经功能缺损评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测各组大鼠的脑梗死体积,苏木素-伊红(HE)染色镜下观察各组大鼠的脑梗死病理变化,免疫组化法检测各组大鼠caspase-1、NLRP3、IL-1蛋白表达情况。结果假手术组无神经功能缺损及脑梗死。与模型组相比,丁苯酞各剂量治疗组神经功能缺损评分及脑梗死体积均减少(P<0.05)。HE染色可见假手术组核膜清晰,细胞膜完整,余各组均可见神经元数量减少,胞核溶解、固缩,胞质染色较浅,细胞水肿,但治疗组均较模型组程度轻。丁苯酞各剂量治疗组caspase-1、NLRP3、IL-1蛋白表达水平均较假手术组高(P<0.05),较模型组低(P<0.05),且存在剂量依赖性。结论丁苯酞能够通过NLRP3炎性小体信号通路改善大鼠脑缺血再灌注损伤。