NLRP3炎性小体在治疗性浅低温后处理大鼠心肌缺血-再灌注中的作用

目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制。方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五组:空白对照组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注组(MH组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP组(HT组)和34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP+MCC950组(HTM组),每组12只。S组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏180 min;IR组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 37℃灌注液再灌注120 min;MH组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 34℃灌注液再灌注120 min;HT组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入沉默信息调节因子2同源蛋白3(sirt3)抑制剂3-TYP后行34℃灌注液再灌注120 min;HTM组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入sirt3抑制剂3-TYP和NLRP3抑制剂MCC950后行34℃灌注液再灌注120 min。再灌注120 min后取离体心脏,采用ELISA法测定灌注后心脏漏液中IL-1β、IL-6浓度,Western blot法检测心肌组织中NLRP3和sirt3蛋白相对含量,1%氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理变化。结果 与S组比较,IR组、MH组、HT组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显升高(P<0.05);IR组、HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低,NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3和NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05)。与IR组比较,MH组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3蛋白含量明显升高,NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05);HTM组心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与MH组比较,HT组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、±dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HT组比较,HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论 治疗性浅低温(34℃)可通过改善离体心脏血流动力学参数、降低IL-6、IL-1β浓度、心肌组织中NLRP3蛋白含量、心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变,减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与线粒体介导sirt3通路抑制炎性小体NLRP3的高表达有关。

急性脑梗死患者血清miR-22-3p、NLRP3水平与炎性因子及预后不良的关系

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小核糖核酸-22-3p(miR-22-3p)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平与炎性因子及预后不良的关系。方法选取2021年1月—2022年12月上海中医药大学附属第七人民医院神经内科收治ACI患者106例为ACI组,根据预后情况分为预后不良亚组37例和预后良好亚组69例,另选取同期体检健康者60例为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-22-3p水平,酶联免疫吸附法检测血清NLRP3和炎性因子[白介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。通过Pearson相关性分析ACI患者血清miR-22-3p、NLRP3与IL-1β、IL-18、TNF-α的相关性。分析ACI患者预后不良的影响因素,绘制2项指标的受试者工作特征(ROC)曲线分析其预测预后的价值。结果与健康对照组比较,ACI组血清miR-22-3p水平降低,NLRP3、IL-1β、IL-18、TNF-α水平显著升高(t/P=18.698/<0.001、27.091/<0.001、30.154/<0.001、35.104/<0.001、39.834/<0.001)。Pearson相关性分析显示,ACI患者血清miR-22-3p与NLRP3、IL-1β、IL-18、TNF-α水平呈负相关(r/P=-0.733/<0.001、-0.719/<0.001、-0.683/<0.001、-0.680/<0.001),血清NLRP3与IL-1β、IL-18、TNF-α水平呈正相关(r/P=0.716/<0.001、0.715/<0.001、0.707/<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,NIHSS评分、IL-1β、IL-18、TNF-α、NLRP3升高为ACI患者预后不良的独立危险因素[OR(95%CI)=1.244(1.034~1.497)、1.373(1.067~1.767)、1.047(1.011~1.086)、1.577(1.061~2.343)、1.084(1.022~1.149)],miR-22-3p升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.933(0.888~0.980)]。ROC曲线分析显示,血清miR-22-3p、NLRP3水平联合预测ACI患者预后不良的曲线下面积为0.875,大于两者单独预测的0.786、0.759(Z/P=2.405/0.016、2.517/0.012)。结论ACI患者血清miR-22-3p水平降低和NLRP3水平升高,与炎性因子水平升高和预后不良密切相关,血清miR-22-3p、NLRP3水平联合对ACI患者预后不良的预测价值较高。

NLRP3炎症小体在心力衰竭中的作用及相关治疗的研究进展

心力衰竭是许多心血管疾病的终末阶段,由于人口老龄化、心力衰竭合并症和危险因素负担加重,患病率不断增加。几十年来虽然在其诊疗方面有了巨大的进展,但目前仍缺乏具体且有效的治疗方案。NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体是一种蛋白质复合物,可参与心室重塑病理生理过程,进而影响心力衰竭的发生和进展。抑制NLRP3炎症小体激活是减少心力衰竭不良心室重塑和改善左心室功能的可行策略。现就NLRP3炎症小体的结构功能、激活途径、在心力衰竭中的作用及相关治疗进行综述。

急性脑梗死患者外周血炎性小体NLRP3表达及与颅内动脉血栓病理成分、预后的相关性分析

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者外周血炎性小体NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达,并分析其与颅内动脉血栓病理成分、预后的相关性。方法 选取2022年1—12月收治的92例ACI作为观察组,另选取健康志愿者92例作为对照组,检测外周血NLRP3 mRNA、蛋白及血清水平。观察组行机械取栓治疗,采用HE染色法半定量分析血栓取出物,并分为红细胞富集血栓者、纤维蛋白富集血栓者。比较不同组别、不同血栓病理成分、不同预后患者外周血炎性小体NLRP3水平,分析其与血栓病理成分相关性及对预后不良风险的关系。结果 观察组NLRP3 mRNA、蛋白表达及血清水平高于对照组,红细胞富集血栓者高于纤维蛋白富集血栓者,且与红细胞富集血栓呈正相关(P<0.05,P<0.01);预后不良者NLRP3 mRNA、蛋白表达及血清水平高于预后良好者(P<0.01);NLRP3 mRNA、蛋白高表达及血清高水平患者预后不良风险分别是低表达、低水平患者的2.182、2.500、2.182倍(P<0.05)。结论 ACI患者外周血炎性小体NLRP3水平升高,且与颅内动脉红细胞富集血栓相关,可增加预后不良发生风险。

抗炎通腑方对脓毒症急性肺损伤大鼠mtDNA-STING-NLRP3信号通路的影响

目的探讨抗炎通腑方对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的影响及作用机制。方法将35只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松(DEX)组、中药(TCM)组和TCM+DEX组,每组7只。分别给予相应药物灌胃、造模。酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及血清中巨噬细胞计数;采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测肺组织中干扰素基因刺激因子(STING)、磷酸化干扰素基因刺激因子(P-STING)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白信使核糖核酸(ASC mRNA)和相关蛋白的表达水平。测定肺组织湿/干比(W/D),观察肺组织病理学改变。检测肺组织中巨噬细胞表达情况。结果与正常组比较,各组指标显著升高;与模型组比较,DEX组、TCM组及TCM+DEX组各指标均显著降低。与模型组比较,TCM+DEX组改变最为明显,肺组织损伤改善,W/D值(4.77±0.29 vs.3.78±0.48)及巨噬细胞计数(13.39±2.06 vs.7.09±1.42)均降低(P<0.05),IL-6(152.51±22.27 vs.58.92±13.53)、IL-1β(126.19±10.02 vs.45.69±6.67)、IL-18(59.12±6.31 vs.31.75±4.23)及TNF-α(126.57±8.25 vs.49.59±8.12)水平均降低(P均<0.01),肺组织中线粒体DNA(mtDNA)损伤及释放、P-STING(0.32±0.03 vs.0.16±0.03)、STING mRNA(19.24±2.70 vs.0.32±0.16)、NLRP3 mRNA(20.03±5.06 vs.1.20±0.04)、ASC mRNA(16.96±4.31 vs.3.41±2.52)和相关蛋白的表达均降低(P<0.01)。结论抗炎通腑方可能通过调控mtDNA-STING-NLRP3信号通路减轻脓毒症ALI大鼠的炎症。

基于NLRP3炎症小体探讨半夏泻心汤对炎症性结直肠癌小鼠的影响

目的 基于NLRP(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein,NLRP)3炎症小体探讨半夏泻心汤对炎症性结直肠癌(colorectal cancer,CRC)小鼠的改善作用。方法 小鼠CRC模型采用腹腔注射氧化偶氮甲烷联合口服葡聚糖硫酸钠法制备。100只小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型组、半夏泻心汤低剂量、半夏泻心汤高剂量组及美沙拉嗪组,每组各20只,连续给药14 d。记录各组小鼠一般情况;光镜观察小鼠结肠和脾脏病理改变;TUNEL染色检测结肠组织肿瘤细胞凋亡情况、荧光定量PCR检测结肠组织NLRP3、芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)、三叶因子(trefoil factor,TFF)3和p53肿瘤蛋白(tumor protein 53,P53)m RNA表达水平;免疫组化和Western Blot分别检测各组结肠组织中核增殖抗原Ki-67(Ki-67 antigen,Ki67)、AhR及NLRP3、AhR、TFF3和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9蛋白表达。结果 与正常对照组比较,模型组小鼠体质量明显减轻,结肠瘤体数目增多,脾脏和胸腺指数升高,血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白介素(interleukin,IL)-6和干扰素(interferon,IFN)γ含量显著升高(P<0.01),IL-10含量下降;结肠组织中Ki67、AhR、NLRP3、AhR、MMP-9蛋白以及NLRP3、AhR和P53mRNA表达明显增高(P<0.05);而TFF3 m RNA和蛋白显著降低(P<0.01)。与模型组比较,半夏泻心汤和美沙拉嗪组上述指标的变化均发生逆转,均具有统计学差异(P<0.05),且以半夏泻心汤高剂量组变化更为显著。结论 半夏泻心汤可减轻CRC小鼠炎症反应,诱导肿瘤细胞凋亡从而改善肠黏膜屏障功能,其机制与阻断AhR通路活化抑制NLRP3炎症小体生成有关。

BMSCexo促进E3泛素连接酶TRIM31而调控阿尔茨海默症小鼠认知功能障碍和NLRP3炎症小体的产生研究

目的探究骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCexo)对阿尔茨海默症(AD)小鼠认知功能障碍的影响和机制。方法提取并鉴定APP/PS1双转基因小鼠的骨髓间充质干细胞及其外泌体。APP/PS1小鼠分为模型组和BMSC exo组,C57BL/6J小鼠作为对照组,BMSC exo组小鼠每天尾静脉注射0.5μg BMSC exo,模型组和对照组注射等体积的无菌PBS溶液,连续给药21d后进行水迷宫行为学检测,记录各组小鼠逃避潜伏期、小鼠游泳轨迹及记录小鼠穿越原平台象限所在区域的时间占活动总时间的比例。Western blot检测小鼠脑组织中Toll样受体2(TRL-2)、一氧化氮合酶(iNOS)、核因子κB(NF-κB)、三基序的蛋白质31(TRIM31)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达。结果相比于对照组,模型组小鼠逃避潜伏期显著增加,小鼠活动轨迹没有目的性,小鼠穿越原平台象限所在区域的时间占活动总时间的比例显著减少,TRL-2、iNOS、NF-κB、NLRP3表达显著增加,TRIM31表达显著减少。相比于模型组,BMSC exo组小鼠逃避潜伏期显著减少,小鼠在原平台象限所穿越区域的时间占活动总时间的比例显著增加,TRL-2、iNOS、NF-κB、NLRP3表达显著减少,TRIM31表达显著增加。结论BMSC exo可改善AD小鼠认知功能障碍,其机制可能为促进TRIM31表达以及抑制NLRP3炎症小体的产生。

丁苯酞联合依达拉奉对急性脑梗死患者脑血管功能及NLRP3炎性小体信号通路的影响

目的探讨丁苯酞联合依达拉奉对急性脑梗死(ACI)患者脑血管功能及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路的影响。方法选取义马煤业集团股份有限公司总医院2020年1月至2022年1月收治的120例ACI患者为研究对象,采用奇偶数分组法分为单一组60例和联合组60例。单一组患者予以依达拉奉治疗,联合组患者予以丁苯酞联合依达拉奉治疗。治疗14 d后比较两组患者的临床疗效,以及治疗前、治疗14 d后的脑血管功能[脑血管储备功能(CVR)、屏气指数(BHI)、搏动指数(PI)]、神经功能[中枢神经特异蛋白(S-100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、脑源性神经营养因子(BNDF)]、氧化应激指标水平[丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)]和NLRP3炎性小体信号通路相关蛋白[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)]水平。同时比较两组患者神经功能缺损[美国国立卫生研究所脑卒中评分(NIHSS)]和日常生活能力[Barthel指数评分(BI)]。结果联合组患者的治疗总有效率为95.00%,明显高于单一组的83.33%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的CVR、BHI分别为(12.36±2.12)%、1.16±0.28,明显高于单一组的(10.24±2.01)%、0.84±0.22,PI为0.51±0.10,明显低于单一组的0.62±0.13,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的血清S-100β、NSE、MDA水平分别为(0.41±0.09)ng/m L、(15.03±3.01)ng/m L、(4.78±1.03)nmol/mL,明显低于单一组的(0.56±0.12)ng/mL、(18.75±3.08)ng/mL、(8.96±1.38)nmol/mL,血清BNDF、GSH-Px、SOD水平分别为(2.86±0.42)U/mL、(113.02±17.62)U/L、(328.16±50.38)U/mL,明显高于单一组的(2.30±0.31)U/mL、(79.08±12.36)U/L、(255.08±40.12)U/m L,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的NLRP3、ASC、Caspase-1表达量明显低于单一组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的NIHSS评分为(5.30±1.06)分,明显低于单一组的(8.79±1.33)分,BI评分为(78.63±7.01)分,明显高于单一组的(66.34±6.82)分,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞联合依达拉奉治疗ACI可改善患者的脑血管功能、神经功能、神经缺损程度,降低氧化应激水平,其疗效可能与抑制NLRP3炎性小体信号通路有关。

NLRP3抑制剂CY-09对小鼠肾缺血再灌注损伤后远隔器官肝脏的保护作用

目的探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)特异性抑制剂(CY-09)的预处理对小鼠肾缺血再灌注(IR)损伤后远隔器官肝脏功能的保护作用。方法将32只Bal/C小鼠随机平均分成四组,分别为假手术组(Sham组)、Sham+CY-09预处理组(Sham+CY-09组)、肾缺血再灌注组(IR组)、IR+CY-09组,每组8只。Sham+CY-09组和IR+CY-09组于术前30 min腹腔注射CY-0950μg/kg,Sham组和IR组注射等体积生理盐水。所有组均切除小鼠右肾,Sham组和Sham+CY-09组充分暴露左肾但不夹闭,IR组和IR+CY-09组暴露左肾并夹闭45 min,建立左肾IR损伤模型并再灌注24 h。检测血肌酐(sCr)、谷丙转氨酶(ALT)浓度变化,采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝、肾组织病理学改变,采用细胞凋亡(Tunel)染色检测肝脏组织凋亡,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)浓度。结果与Sham组比较,IR组sCr、ALT浓度明显升高(P<0.0001),肝、肾组织病理性损伤明显,肝组织凋亡明显增加(P<0.0001),肝组织中NLRP3(P<0.01)、Caspase-1(P<0.05)、ASC(P<0.05)蛋白表达含量明显升高,炎症因子IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.001)浓度明显升高。与IR组比较,IR+CY-09组sCr、ALT浓度明显下降(P<0.01),肝、肾组织病理性损伤有所减轻,肝组织凋亡减少(P<0.05),肝组织中NLRP3(P<0.01)、Caspase-1(P<0.05)、ASC(P<0.05)蛋白表达明显下降,炎症因子IL-1β浓度明显下降(P<0.05),而炎症因子IL-6浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论肾IR可激活小鼠肝组织中NLRP3炎症小体,进而促进炎症反应,诱发肝损伤,NLRP3抑制剂CY-09的预处理可减轻肾IR所致的肝组织损伤。

DYRK1A调控NLRP3激活在帕金森病模型中的研究

目的 通过在帕金森病模型中分析双特异性酪氨酸调控激酶1A(DYRK1A)与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)激活的关系,探讨帕金森病中神经炎症的治疗靶点。方法 (1)采用MPP^(+)处理BV2细胞(小鼠小胶质细胞)后,使用免疫印迹法(Western blot)检测DYRK1A及NLRP3蛋白的表达水平;加用DYRK1A抑制剂(Harmine)处理帕金森细胞模型,使用CCK8法检测小胶质细胞活性,免疫印迹法检测NLRP3蛋白表达水平。(2)MPTP慢性PD动物模型中,腹腔注射DYRK1A抑制剂(Harmine),免疫组织荧光观察小鼠中脑黑质区小胶质细胞数目,免疫印迹法检测小鼠中脑黑质区NLRP3蛋白表达水平。结果 (1)不同浓度MPP^(+)处理小胶质细胞后,DYRK1A及NLRP3的蛋白水平较对照组均有升高(P<0.05);Harmine(浓度为10、15μmol/L)时可改善MPP^(+)对BV2细胞活性的损伤(P<0.05);相比MPP^(+)组,Harmine+MPP^(+)组NLRP3蛋白水平明显下降(P<0.05)。(2)与对照组相比,模型组小鼠中脑黑质的小胶质细胞数量增多;与模型组相比,模型中浓度抑制剂组小鼠中脑黑质的小胶质细胞数量减少;模型组小鼠中脑黑质区NLRP3的蛋白水平较对照组升高,与模型组比较,模型中浓度及高浓度抑制剂组小鼠中脑黑质中NLRP3蛋白表达下降明显(P<0.05)。结论 抑制DYRK1A可减轻帕金森病模型中NLRP3炎症蛋白的激活,为帕金森病的治疗和研究提供新的思路。

基于“太阴阴火”理论探讨升阳益胃汤对溃疡性结肠炎免疫信号TLR4/NLRP3通路的作用机制

目的:基于“太阴阴火”理论探讨升阳益胃汤对溃疡性结肠炎免疫信号Toll样受体(Toll-like Receptor,TLR)4/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白(NOD-like Receptor Thermal Protein Domain Associated Protein,NLRP)3通路的作用机制。方法:选用8周龄的C57BL/6小鼠随机分成6组,分别为正常组,模型组,西药组,升阳益胃汤低剂量组,升阳益胃汤中剂量组,升阳益胃汤高剂量组,观察小鼠的饮食、活动及身体毛发等状态;记录小鼠的体质量、粪便情况;评估小鼠结肠炎疾病活动指数;收集肛门到盲肠末端组织;采用苏木精-伊红技术检测小鼠结直肠病理变化;检测TLR4、髓性分化原发应答基因(88)[Myeloid Differentiation Primary Response Gene(88),MyD88]、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶(Caspase,CASP)-1、Gasder min域(Gasder min domain,GSDMD)、人裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved CASP-3)蛋白表达水平。结果:①给药组各组小鼠饮食欲、体质量、精神状态、活动度、毛发、反应等情况都有好转,与模型组比较,西药组和各中药组的疾病活动指数评分下降较明显(P<0.05)。②模型组与正常组比较,小鼠的结直肠长度缩短,差异有统计学意义(P<0.05),各给药组与模型组比较小鼠结直肠长度有改善趋势,但差异无统计学意义。③升阳益胃汤中剂量组、升阳益胃汤高剂量组小鼠结肠上皮组织结构基本完整,腺体排列整齐,杯状细胞正常分布,肌层较模型组增厚,升阳益胃汤低剂量组小鼠结肠组织上皮结构基本完整,黏膜缺损减轻,腺体排列依旧紊乱,黏膜下层仍可见充血,炎性细胞浸润减少。④模型组与正常组比较,小鼠结直肠上皮组织TLR4,MyD88,核因子-κBp65,NLRP3,GSDMD、Cleaved CASP-3蛋白相对表达量增高(P<0.05);给药组与模型组比较,西药组、升阳益胃汤低剂量组,升阳益胃汤中剂量组,升阳益胃汤高剂量组小鼠结直肠上皮组织TLR4、MyD88、核因子-κB p65、NLRP3、GSDMD、Cleaved CASP-3蛋白相对表达量降低(P<0.05);与西药组相比,升阳益胃汤高剂量组MyD88、GSDMD、Cleaved CASP-3的蛋白相对表达量差异无统计学意义。结论:升阳益胃汤能够促进溃疡性结肠炎小鼠肠道损伤的修复。可以下调TLR4、MyD88、核因子-κB p65信号通路,抑制溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜上皮的炎症及细胞焦亡反应。

祛风明目丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠NLRP3、ASC、IL-1β表达的影响

目的探讨祛风明目丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠房水及视网膜组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、接头蛋白凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis related spot like protein,ASC)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)表达的影响。方法将70只SPF级雄性Lewis大鼠按随机数字表法取19只为空白组,其余为造模组,进行主动免疫,建立EAU大鼠模型,连续造模7 d后分别从造模组及空白组随机抽取3只大鼠取眼球行HE染色,进行组织病理学检查;将造模成功的EAU大鼠随机分为模型组、祛风明目丸低剂量组(简称低剂量组)和祛风明目丸正常剂量组(简称正常剂量组),每组16只。空白组、模型组予以蒸馏水灌胃,低剂量组和正常剂量组予以不同剂量的祛风明目丸药液灌胃,均干预14 d。自造模开始,每天于裂隙灯下观察眼前节变化,并采用Caspi临床分级标准评分;自灌胃起14 d后,ELISA检测房水中NLRP3、IL-1β水平,Western blot检测视网膜组织中ASC、NLRP3蛋白水平。结果Caspi临床分级评分结果示,自造模第3天起造模组评分均明显高于空白组(P<0.01),说明EAU模型制备成功。ELISA结果显示,与空白组相比,模型组房水中NLRP3、IL-1β水平升高(P<0.05);与模型组相比,正常剂量组及低剂量组两者含量均降低(P<0.05);正常剂量组与低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,与空白组相比,模型组视网膜组织中ASC、NLRP3蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,正常剂量组及低剂量组视网膜组织中ASC、NLRP3蛋白表达含量均下降(P<0.05);与正常剂量组相比,低剂量组视网膜组织ASC、NLRP3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论祛风明目丸可能通过降低NLRP3炎症小体及下游炎症因子的表达对EAU大鼠发挥一定的治疗作用。

急性心肌梗死患者NLRP3、IL-18及IL-1β水平与血栓积分、肌钙蛋白的关系分析

目的探讨急性心肌梗死患者核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素18(IL-18)及白细胞介素1β(IL-1β)水平与血栓积分、肌钙蛋白的关系。方法选择2020年1月至2021年5月于河北中石油中心医院收治的急性心肌梗死患者106例作为病例组,另选取同期我院健康体检者95例作为对照组。分析两组在血清NLRP3、IL-18及IL-1β水平变化情况,并分析其与血栓积分、肌钙蛋白之间的关系。结果病例组血清NLRP3、IL-18及IL-1β水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);按照病变狭窄累积左冠状动脉(冠脉)的支数分为单支组26例,双支组45例,三支组35例。其中单支组血清NLRP3、IL-18及IL-1β水平显著低于双支组和三支组,双支组血清NLRP3、IL-18及IL-1β水平显著低于三支组,差异有显著统计学意义(P<0.01);病例组血栓积分、肌钙蛋白水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);单支组血栓积分、肌钙蛋白水平显著低于双支组和三支组(P<0.01);双支组血栓积分、肌钙蛋白水平显著低于三支组(P<0.01);相关性分析结果显示,急性心肌梗死患者血清NLRP3、IL-18及IL-1β均和血栓积分、肌钙蛋白之间呈正相关(P<0.05)。结论急性心肌梗死患者NLRP3、IL-18及IL-1β水平表达异常,且与血栓积分、肌钙蛋白之间存在相关性,可能协同参与急性心肌梗死的发生及发展。

葛兰心宁软胶囊对PCI术后冠状动脉微血管疾病患者NLRP3炎症反应的影响

目的探讨葛兰心宁软胶囊是否可通过抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症反应对PCI术后冠状动脉微血管疾病(CMVD)损伤起到保护作用。方法对2021年7月至2022年9月期间因冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)成功行PCI,术后仍反复发作心绞痛等心肌缺血相关症状就诊于陕西省人民医院心血管内科,复查冠状动脉(冠脉)造影正常,通过SPECT测定冠脉血流储备(CFR)评价其冠脉微血管功能,将CFR<2.0诊断为冠脉微血管疾病的78例患者纳入研究,随机分为试验组(n=38)和对照组(n=40)。试验组给予葛兰心宁软胶囊联合常规西药治疗,对照组给予常规西药治疗。比较两组患者治疗前和治疗2个月后血浆NLRP3,白细胞介素-18(IL-18)水平和西雅图心绞痛问卷(SAQ)评分的变化。结果治疗2个月后,2组患者NLRP3水平均低于治疗前,且试验组NLRP3水平显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。2组患者治疗后白细胞介素-1β(IL-1β)水平组间比较虽无统计学差异(P>0.05),但试验组IL-18水平较对照组下降更明显。治疗2个月后,两组患者SAQ评分均高于治疗前,且试验组高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论常规西药治疗与联合葛兰心宁软胶囊治疗均能降低NLRP3水平,并增加SAQ评分,但联合葛兰心宁治疗对NLRP3水平和SAQ评分的改善更大,推测葛兰心宁可能通过抑制NLRP3炎症反应改善CMVD。

姜黄素通过p38 MAPK/NLRP3抑制肠道病毒71型诱导的细胞焦亡

肠道病毒-A71型(EV-A71)重症感染患儿多表现为过激的炎症反应,病毒感染引起的细胞焦亡可能是机体炎症发生的重要原因之一。本文旨在探究姜黄素对EV-A71病毒感染引起的细胞焦亡与细胞损伤的保护作用及可能的机制。首先,观察了姜黄素对EV-A71引起的细胞毒性的影响。CCK8检测结果显示,EV-A71感染降低细胞的增殖活力;LDH测定表明,病毒增加细胞培养上清中LDH的释放,造成了细胞的损伤;DAPI核染色及Dil细胞膜染色后观察到,EV-A71感染引起了细胞的形态变化和数量减少。姜黄素可以逆转病毒引起的上述变化,提示姜黄素对病毒感染的细胞毒性具有保护作用。细胞焦亡发生时,可促进炎症因子IL-1β的成熟、产生和释放。我们观察了EV-A71及姜黄素干预对细胞IL-1β产生的影响。Western印迹结果显示,病毒感染细胞内IL-1β的活化增加。ELISA检测结果显示,EV-A71病毒感染引起细胞上清中IL-1β的分泌水平增加;qPCR测定结果显示,EV-A71病毒感染细胞中IL-1β的转录水平上调;而姜黄素干预可抑制染毒细胞IL-1β的活化和分泌。Western印迹检测细胞内焦亡相关分子的变化。结果显示,EV-A71感染可诱导细胞发生焦亡,并呈时间和剂量依赖性,分子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、GSDMD、胱天蛋白酶1(caspase-1)参与EV-A71诱导细胞发生的焦亡;姜黄素干预可以有效抑制EV-A71诱导的细胞细胞焦亡。另外,Western印迹检测显示,姜黄素可以减少细胞内EV-A71结构蛋白VP1的水平,通过检测细胞上清中病毒的CCID50发现,姜黄素可以降低细胞上清中病毒的滴度。最后,对姜黄素抗焦亡机制进行了探索,发现EV-A71感染诱导了细胞自噬并激活了p38/NLRP3通路,姜黄素能抑制自噬标志蛋白LC3及自噬底物p62的降解,并抑制p38/NLRP3的激活。总之,本研究明确了姜黄素通过对自噬溶酶体阶段及p38/NLRP3通路的抑制,有效减轻了EV-A71诱导的细胞焦亡,为姜黄素在抗EV-A71感染的临床应用提供参考。

NLRP3炎症小体在不孕不育相关生殖疾病中的作用研究进展

NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体是一种多聚蛋白质复合体,可被多种信号激活,其激活与体内诸多的免疫和代谢紊乱疾病密切相关。目前已知多囊卵巢综合征(PCOS)、子宫内膜异位症(EMs)以及卵巢早衰(POF)等多种不孕不育相关的生殖疾病均与NLRP3炎症小体的激活有着密切的联系。本文对近年来NLRP3炎症小体在PCOS、EMs、POF中的作用进行综述,并对NLRP3炎症小体在各种生殖疾病中的活化及作用机理进行探讨,以期为不孕不育相关生殖疾病的发病机制研究及临床诊疗提供理论依据。

射血分数保留性心力衰竭患者外周血单个核细胞NLRP3表达水平及临床意义

目的 研究外周血单个核细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)炎性小体在射血分数保留性心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)患者中的表达及临床意义。方法 选取2018年1月至2021年1月在陆军军医大学大坪医院心血管内科就诊并确诊为HFpEF的患者120例为研究对象,同时选取同期50例无心力衰竭的患者为对照组。检测两组患者外周血单个核细胞NLRP3 mRNA、炎性细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、心功能指标如左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic dimension,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end diastolic dimension,LVESD)及氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)浓度;记录H2FPEF评分。分别比较两组患者上述指标的差异,评价外周血单个核细胞NLRP3 mRNA对HFpEF患者早期诊断的评估价值。结果 与对照组比较,HFpEF组患者外周血单个核细胞NLRP3 mRNA和炎性指标(IL-1β、TNF-α)浓度显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,HFpEF组患者的H2FPEF评分、NT-proBNP浓度显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LVEF、LVEDD及LVESD比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HFpEF组外周血单个核细胞NLRP3 mRNA浓度与IL-1β浓度、TNF-α浓度、H2FPEF评分及NT-proBNP浓度呈显著正相关(IL-1β:r=0.620,P=0.004;TNF-α:r=0.541,P=0.011;H2FPEF评分:r=0.653,P=0.002;NT-proBNP:r=0.596,P=0.007)。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析表明,NLRP3 mRNA对HFpEF患者早期诊断的曲线下面积为0.779(95%CI:0.682~0.875),敏感度和特异度分别为75.00%和79.59%。结论 NLRP3炎性小体的激活可能与HFpEF的发生相关,通过检测外周血单个核细胞NLRP3 mRNA浓度,对HFpEF患者的早期诊断具有一定的临床价值。

血清NT-proBNP、NLRP3水平与急性缺血性卒中患者恶性脑水肿的关系

目的探讨血清N端脑利钠肽前体(NT-proBNP)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平与急性缺血性卒中(AIS)患者恶性脑水肿(MBE)的关系。方法选取302例AIS患者,根据是否发生MBE分为MBE组和非MBE组。收集患者基线资料,采用酶联免疫吸附法检测血清NT-proBNP、NLRP3。多因素Logistic回归分析AIS患者MBE的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NT-proBNP、NLRP3水平对AIS患者MBE的预测价值。结果302例AIS患者共发生MBE 47例(15.56%)。与非MBE组比较,MBE组血清NT-proBNP、NLRP3水平更高(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,美国国立卫生研究院卒中量表评分(OR=1.175,95%CI:1.089~1.267)、NT-proBNP(OR=1.002,95%CI:1.001~1.003)、NLRP3(OR=2.527,95%CI:1.745~3.661)为AIS患者MBE的独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清NT-proBNP、NLRP3水平联合预测AIS患者MBE的曲线下面积大于二者单独预测(P均<0.05)。结论血清NT-proBNP、NLRP3水平升高是AIS患者MBE独立危险因素,二者可作为AIS后MBE的辅助预测指标。

IgA肾病患者血清外泌体中NLRP3的表达及与疾病严重程度的相关性

目的 :观察免疫球蛋白A(immunoglobulin A, IgA)肾病患者血清外泌体中炎症小体NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3)的表达变化,分析其与疾病严重程度的相关性。方法:选取2018年1月—2019年12月在南通大学附属医院肾活检为原发性IgA肾病患者60例,根据肾脏病理Katafuchi积分分为4组:0~3分17例、4~6分19例、7~9分15例、10~12分9例;另选择因肾良性肿瘤行手术切除患者15例为对照组。收集IgA肾病患者血清外泌体,免疫组化试剂盒检测外泌体中NLRP3的表达,Pearson相关分析法分析血清外泌体NLRP3的表达与Katafuchi积分、24 h尿蛋白定量、内生肌酐清除率的相关性,并分析血清外泌体NLRP3的表达与肾组织内NLRP3表达的相关性。结果 :IgA肾病患者血清外泌体中NLRP3的表达明显高于对照组(P<0.05),其表达水平与蛋白尿、Katafuchi积分呈正相关(P<0.05),与内生肌酐清除率呈负相关(P<0.05)。IgA肾病患者肾脏组织内NLRP3的表达较对照组明显升高(P<0.05),且与血清外泌体中NLRP3的表达呈正相关(P<0.05)。结论:IgA肾病患者血清外泌体中NLRP3的表达与疾病的严重程度呈正相关,可能参与疾病的发生及发展。

外周血清NLRP3、HMGB1水平与急性ST段抬高型心肌梗死患者PCI术后缺血再灌注损伤的关系

目的分析外周血清核苷酸寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平与急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的关系。方法选取2020年1月—2021年7月武汉亚洲心脏病医院ICU收治接受PCI的STEMI患者165例,根据PCI术后是否发生MIRI分为MIRI组103例和非MIRI组62例。比较2组临床资料及外周血清NLRP3、HMGB1水平,多因素逐步Logistic回归分析STEMI患者PCI术后MIRI影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析外周血清NLRP3、HMGB1水平对STEMI患者PCI术后MIRI的预测价值。结果MIRI组患者年龄、罪犯血管为右冠状动脉比例、Killip分级、血尿素氮、血肌酐、B型脑钠肽、住院天数、心血管不良事件发生率均高于非MIRI组,收缩压、舒张压、eGFR、ACEI/ARB/ARNI使用比例低于非MIRI组(P<0.05)。外周血清NLRP3、HMGB1水平MIRI组术前高于非MIRI组;术后即刻2组均降低,但MIRI组高于非MIRI组;术后24 h 2组均再次升高,且MIRI组高于非MIRI组(P均<0.05)。多因素Logistic逐步回归分析显示,年龄大、罪犯血管为右冠状动脉、B型脑钠肽高、血清NLRP3高、血清HMGB1高为STEMI患者PCI术后发生MIRI的独立危险因素[OR(95%CI)=1.052(1.010~1.096)、1.037(1.007~1.068)、1.003(1.001~1.004)、1.440(1.232~1.684)、1.728(1.312~2.276)],而收缩压、舒张压高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.684(0.579~0.808)、0.551(0.406~0.746)]。ROC曲线显示,血清NLRP3、HMGB1及二者联合预测STEMI患者PCI术后MIRI的曲线下面积(AUC)分别为0.769、0.740、0.835,二者联合预测的AUC大于单项预测(Z=2.297、3.149,P=0.022、0.002)。结论PCI术后发生MIRI的STEMI患者外周血清NLRP3、HMGB1水平升高,为MIRI发生的独立危险因素,可作为PCI术后MIRI预测指标。