TFAP2A对肾小球硬化相关基因ADCK4转录调控机制的研究

目的探索细胞中TFAP2A对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)相关基因含aarF结构域的激酶4(ADCK4)的转录调控机制及TFAP2A与ADCK4是否存在特定的结合区域。方法生物信息学分析肾小球硬化基因火山图,ADCK4及TFAP2A表达水平的关系。JASPAR数据库预测ADCK4基因转录起始位点-464 bp/+206 bp区域包含TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A siRNA浓度分别为5、10、15µmol/L,TFAP2A过表达质粒质量浓度分别为50、100、300µg/L,通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对ADCK4基因启动子水平的调控作用。TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒转染细胞,实时荧光定量PCR检测TFAP2A、ADCK4 mRNA表达,蛋白免疫印迹实验检测TFAP2A、ADCK4蛋白表达。染色质免疫沉淀试验验证TFAP2A与ADCK4启动子的特定区域结合。结果生物信息学分析显示FSGS肾组织中RNA-Seq RNA表达上调的基因273个,表达下调的基因219个;ADCK4与TFAP2A表达水平呈正相关(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验证明TFAP2A siRNA浓度为10、15µmol/L的ADCK4启动子相对萤光素酶活性增强,TFAP2A过表达质粒质量浓度为100、300µg/L的ADCK4启动子萤光素酶活性降低(P<0.05)。与对照组相比,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平升高;过表达实验中,与对照组比较,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。染色质免疫沉淀试验发现TFAP2A能与ADCK4启动子的特定区域结合。结论转录因子TFAP2A负向调控ADCK4基因表达,增加了调控足细胞重要基因的转录因子成员。

载脂蛋白AI基因启动子多态性与2型糖尿病合并冠心病关系的研究

目的 :探讨 Apo AI基因启动子多态性与 2型糖尿病 ( DM-2 )伴同冠心病 ( CHD)的关系。方法 :应用聚合酶链反应技术 ,对 3 0例正常对照者、3 0例 CHD患者和 3 1例 DM-2患者及 3 0例 DM-2合并 CHD患者 (合并组 ) ,进行了载脂蛋白 AI基因启动子 -78bp( G/ A) Msp-I酶切位点限制性片段长度多态性 ( RFL P)研究。结果 :等位基因 A在 DM-2组、CHD组、合并组与对照组比较均显著降低 ( 0 .1 61 ,0 .1 83 ,0 .0 83 ,0 .43 0 ) ,A基因频率 DM-2组比合并组稍高 ,但无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论 :Apo AI基因多态性是 DM-2合并

含bcl-2启动子绿荧光病毒载体的构建及在白血病HL-60和K562细胞中的表达

目的应用pEGFP-1质粒构建含有bcl-2启动子(bcl-2P)的载体,转染高表达bcl-2的HL-60细胞和低表达bcl-2的K562细胞,测定绿荧光蛋白在2种细胞中的表达程度,观察特异性启动子能否引导目的基因在靶细胞表达,达到基因定位的目的。方法克隆bcl-2P,采用pEGFP-1质粒构建含有bcl-2P的载体;应用电击法转染pEGFP-BCL-2PDNA到HL-60和K562细胞并培养;测定EGFP在HL-60细胞和K562细胞中的表达。结果成功构建含bcl-2P绿荧光病毒载体pEGFP-BCL-2P,绿荧光的表达率在HL-60及K562细胞分别为64.29%及0.5%。表达绿荧光阳性的HL-60细胞在培养30d后仍有89.6%的细胞表达阳性。结论绿荧光在HL-60细胞中有较稳定的高表达,而在K562细胞中几乎不表达,说明特异的bcl-2P能引导目的基因在靶细胞表达,可能成为基因定位的一种方法。

抗凋亡基因bcl-2启动子CpG岛的高甲基化状态见于28.3%(13/46例)的膀胱癌患者尿沉淀细胞DNA

目的:检测上海地区膀胱癌患者尿沉淀细胞中3个肿瘤相关基因启动子CpG岛的甲基化谱式异常频率,继而评估其应用前景。方法:采用甲基化特异性PCR方法分析尿沉淀细胞DNA中DAPK1、bcl2和hTERT3个基因的启动子CpG岛甲基化状态,并通过RTPCR方法评估DAPK1基因在膀胱癌细胞系中的表达状态。结果:对膀胱癌细胞系中DAPK1基因的启动子CpG岛甲基化状态及其表达(mRNA水平上)所做的分析,确立了高甲基化状态与表达静息化之间的相关性。对46例临床确诊的膀胱癌患者和84例非膀胱癌对照(包括前46例术后的36例)的尿沉淀细胞中DNA甲基化的分析发现,仅bcl2基因的高甲基化见之于28.3%(13/46例)的膀胱癌患者,而84例的对照中均为去甲基化状态。结论:在美国膀胱癌患者尿沉淀细胞中频发DNA高甲基化的靶点在上海地区膀胱癌患者人群中频率很低,因此寻找在后者中频发DNA高甲基化的新靶点实属必要。

新发2型糖尿病患者KCNJ11启动子区甲基化与胰岛素相关性分析

【目的】探讨2型糖尿病（T2DM）患者KCNJll启动子区甲基化与胰岛素水平的关系。【方法】选取2014年4月至2015年4月本院初治T2DM患者，根据糖化血红蛋白（HbAlc）水平，将HbAlc〉9％者纳入血糖重度升高组（A组，n=5），HbAlc≤9％者纳入血糖轻度升高组（B组，n=10）；选择15例同期健康体检正常者纳入对照组（C组）。用亚硫酸盐法测定KCNJll基因启动子5’端300bp中的46个Cr，G位点DNA甲基化水平。【结果】A组BMI高于B组和C组，其差异有显著性（P〈0．05）。三组间空腹血糖比较均有显著差异（P〈0．05）；HbAlc在三组间的两两对比中均有显著差异（P〈0．05）；三组间Fins比较均有明显差异（P〈0.05）。A组CpG＋62、CpG＋66、CpG＋351、CpG＋62＋CpG＋66甲基化率低于B组和C组，且B组低于c组，均有统计学差异（P〈0.05）。A组和B组3个甲基化位点甲基化率均与FINS呈负相关。【结论】2型糖尿病患者KCNJ11启动子区甲基化与胰岛素水平呈负相关。

Effects of radiation-induced suicide gene therapy under radiation of radionuclide 125I on human hepatocarcinoma cells in vitro

There are few efficient therapeutic approaches to hepatocarcinoma.Chen et al1 developed iodine （131I） metuximab injection （Licartin）,a novel 131I-labeled HAb18G/CD147-specific monoclonal antibody Fab＇2 fragment.HAb18G/CD147 is a hepatocellular carcinoma-associated antigen.But their results have no obvious improvements in survival rate of patients with hepatocarcinoma.Keywords：radiation effects; promoter regions, genetic lentivirus; cytosine deaminase; fluorocytosine; HepG2 cells