脂多糖刺激对仔猪肠道、肝脏和肌肉组织NODs信号通路关键基因及其负调控因子mRNA表达的影响

本试验旨在研究脂多糖(LPS)刺激对仔猪核苷酸结合寡聚化结构域蛋白(NODs)信号通路关键基因及其负调控因子m RNA表达的影响。选取12头杜×长×大断奶仔猪,分成2个处理组,每个处理组6个重复。试验组注射100μg/kg体重的LPS,对照组注射等量的生理盐水。注射LPS或生理盐水4 h后,屠宰仔猪,取空肠、回肠、肝脏、背最长肌和腓肠肌,应用实时荧光定量PCR技术测定NODs信号通路关键基因及其负调控因子m RNA表达水平,包括NOD1、NOD2、受体相互作用蛋白激酶2(RIPK2)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、矢车菊苷β1(ACAP1)和Erbb2相互作用蛋白(ERBB2IP)m RNA表达水平。结果表明:与对照组相比,LPS刺激显著提高了肝脏NOD1、NOD2、RIPK2、NF-κB和TNF-α,背最长肌NOD2、RIPK2和TNF-α,腓肠肌NOD2、RIPK2、NF-κB和TNF-α,空肠RIPK2和TNF-α的m RNA表达量(P<0.05),LPS刺激有提高回肠RIPK2和NF-κB m RNA表达量的趋势(P<0.10);同时,LPS刺激显著降低了空肠ACAP1和ERBB2IP,回肠和肝脏ACAP1的m RNA的表达量(P<0.05)。这表明,LPS激活仔猪肠道、肝脏和肌肉组织中NODs信号通路关键基因的表达,而抑制其负调控因子ACAP1和ERBB2IP的表达。

吴茱萸碱调节Nod样受体蛋白3信号通路对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织损伤的影响

目的探讨吴茱萸碱调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)信号通路影响非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织损伤情况。方法2022年5—11月选取大鼠喂食高脂饲料8周后,通过随机数字表法将大鼠分为模型组、吴茱萸碱低剂量组(吴茱萸碱4 mg/kg)、吴茱萸碱中剂量组(吴茱萸碱8 mg/kg)、吴茱萸碱高剂量组(吴茱萸碱16 mg/kg)、阳性药组(多烯磷脂酰胆碱200 mg/kg)和NLRP3组(吴茱萸碱16 mg/kg+1 mg/kg NLRP3信号通路激活剂尼日利亚菌素),每组各10只,另有10只大鼠喂食普通饲料作为对照组,所有大鼠均给予相对应药物干预,给药4周;生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、胆固醇、三酰甘油(TG);HE染色观察肝组织病理;油红O染色观察肝组织脂肪沉积;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测大鼠肝脏组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(caspase-1)表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠肝组织肝小叶结构紊乱,肝细胞增大,可见明显颗粒状脂滴以及脂质积累,并伴有炎症细胞浸润,肝组织脂肪变性明显,大鼠体质量[(582.65±16.25)g比(476.29±10.62)g]、肝指数[(3.79±0.25)%比(2.48±0.18)%]、血清GPT[(79.62±3.59)U/L比(36.22±2.15)U/L]、GOT[(185.25±5.18)U/L比(71.69±3.56)U/L]、胆固醇[(2.93±0.19)mmol/L比(1.72±0.12)mmol/L]、TG[(1.19±0.11)mmol/L比(0.56±0.07)mmol/L]、TNF-α[(162.48±4.25)ng/L比(41.76±2.49)ng/L]、IL-18[(135.75±3.37)ng/L比(23.52±2.02)ng/L]、IL-1β[(201.88±4.67)ng/L比(92.64±2.99)ng/L]水平,肝组织NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达以及NLRP3、ASC、活化胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组相比,吴茱萸碱低、中、高剂量组和阳性药组大鼠肝组织损伤、肝脏脂肪变性、炎症细胞浸润和脂滴积累明显减轻,大鼠体质量[(551.37±15.72)g、(530.52±15.49)g、(509.48±15.18)g、(517.71±12.73)g比(582.65±16.25)g]、肝指数[(3.41±0.20)%、(3.13±0.16)%、(2.81±0.17)%、(3.02±0.213)%比(3.79±0.25)%]、血清GPT[(68.16±3.41)U/L、(55.94±3.05)U/L、(46.45±2.72)U/L、(48.71±2.34)U/L比(79.62±3.59)U/L]、GOT[(161.32±4.73)U/L、(138.64±4.50)U/L、(113.57±4.05)U/L、(121.48±4.11)U/L比(185.25±5.18)U/L]、胆固醇[(2.58±0.17)mmol/L、(2.25±0.16)mmol/L、(1.91±0.13)mmol/L、(1.99±0.15)mmol/L比(2.93±0.19)mmol/L]、TG[(1.01±0.10)mmol/L、(0.83±0.08)mmol/L、(0.62±0.07)mmol/L、(0.70±0.09)mmol/L比(1.19±0.11)mmol/L]、TNF-α[(137.15±3.69)ng/L、(113.53±3.34)ng/L、(79.37±2.92)ng/L、(85.61±3.07)ng/L比(162.48±4.25)ng/L]、IL-18[(111.34±3.05)ng/L、(72.98±2.66)ng/L、(47.61±2.438)ng/L、(51.59±2.55)ng/L比(135.75±3.37)ng/L]、IL-1β[(171.52±4.34)ng/L、(152.23±4.02)ng/L、(129.95±3.51)ng/L、(517.71±12.73)ng/L比(136.76±3.73)ng/L]水平,肝组织NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达以及NLRP3、ASC、cleaved caspase-1蛋白表达均明显降低(P<0.05);NLRP3信号通路激活剂尼日利亚菌素的加入明显减弱了吴茱萸碱对NAFLD大鼠肝组织的保护作用。结论吴茱萸碱可通过抑制NLRP3信号通路明显改善NAFLD大鼠肝组织损伤、脂肪病变和炎症反应。

膈下逐瘀汤抑制NOD1/RIP2/NF-κB通路调控EMT大鼠卵巢功能影响病灶修复的机制

目的:分析膈下逐瘀汤抑制NOD1(含核苷酸结合寡聚化域蛋白1)/RIP2(受体相互作用蛋白2)/NF-κB(核因子κB)信号通路继而调控气滞血瘀型子宫内膜异位症(EMT)模型大鼠卵巢功能,并最终影响病灶修复的可能机制。方法:将6只正常大鼠和30只成功造模的气滞血瘀型EMT大鼠进行分组:空白组、模型组、西药干预组,以及中药低、中、高剂量组,连续干预14 d,比较各组大鼠干预后信号通路指标、卵巢功能指标的差异。结果:与空白组相比,气滞血瘀型EMT造模大鼠的NOD1、RIP2、NF-κB均有增加,雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)对应增加、卵泡刺激素(FSH)降低(p<0.05)。与模型组相比,无论西药还是中药干预,NOD1、RIP2、NF-κB均下降,E2和LH对应下降、FSH增加(p<0.05)。中药组随着使用剂量的增加,NOD1、RIP2、NF-κB均有下降,E2和LH对应下降、FSH增加(p<0.05)。结论:膈下逐瘀汤能通过抑制NOD1/RIP2/NF-κB信号通路而导致E2和LH激素下降、FSH激素升高,且随着用药剂量增加,疗效相应增强。

川陈皮素调节AMPK/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞炎性损伤的影响

目的探讨川陈皮素(Nobiletin)调节AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞HBZY-1炎性损伤的影响。方法将HBZY-1细胞分为5组:正常组、LPS组(100 ng·m L^(-1)LPS)、川陈皮素组(100 ng·m L^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)川陈皮素)、AMPK/NLRP3信号通路抑制剂雷帕霉素组(100 ng·m L^(-1)LPS+0.5μmol·L^(-1)雷帕霉素)、川陈皮素+雷帕霉素组(100 ng·m L^(-1)LPS+40μmol·L^(-1)川陈皮素+0.5μmol·L^(-1)雷帕霉素)。MTT法检测HBZY-1细胞毒性和增殖;ELISA法检测HBZY-1细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot法检测AMPK/NLRP3信号通路蛋白水平。结果与正常组比较,LPS组CAT、SOD、GSH水平、细胞OD值以及AMPK蛋白水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及NLRP3蛋白水平明显升高(P<0.05)。与LPS组比较,川陈皮素组CAT、SOD、GSH水平、OD值以及AMPK蛋白水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及NLRP3蛋白水平明显下降(P<0.05);而雷帕霉素组以上指标均呈现与川陈皮素组相反的趋势(P<0.05)。与川陈皮素组比较,川陈皮素+雷帕霉素组以上指标均呈现与川陈皮素组相反的趋势(P<0.05)。结论川陈皮素可能通过上调AMPK/NLRP3信号通路减轻LPS诱导的肾小球系膜细胞细胞炎性损伤。下调AMPK/NLRP3信号通路可消除川陈皮素对LPS诱导的肾小球系膜细胞细胞炎性损伤的改善作用。

桔梗皂苷D对大鼠溃疡性结肠炎的改善作用及对TLR4/NOD信号通路蛋白表达的影响

【目的】探讨桔梗皂苷D对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只大鼠随机分为5组,包括正常组,模型组,桔梗皂苷D低、中、高剂量组,每组10只。除正常组大鼠给予蒸馏水饮用外,其他组大鼠通过在饮用水中施加5%硫酸葡萄糖钠(DSS)连续7 d诱导构建溃疡性结肠炎模型。实验第2~8周,桔梗皂苷D低、中、高剂量组大鼠分别灌胃10、25、50 mg·kg^(-1)·d^(-1)桔梗皂苷D混悬液,正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水。给药期间,观察大鼠一般情况。给药结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理形态并进行组织学评分,Western Blot法检测结肠组织Toll样受体4(TLR4)/核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)通路相关蛋白TLR4、髓样分化因子88(MyD88)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达水平。【结果】(1)与正常组比较,模型组大鼠体质量、生存率、结肠长度和结肠质量均显著降低,疾病活动指数(DAI)评分显著升高(均P<0.01);与模型组比较,桔梗皂苷D低、中、高剂量组大鼠体质量、生存率、结肠长度和结肠质量均显著升高,DAI评分显著降低,其中,桔梗皂苷D中剂量组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(2)与正常组比较,模型组结肠组织病理学评分升高(P<0.001);与模型组比较,桔梗皂苷D低、中、高剂量组结肠组织病理学评分均显著降低(P<0.05或P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组中TLR4、MyD88和NLRP3的蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,桔梗皂苷D中剂量组的TLR4、MyD88和NLRP3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。【结论】桔梗皂苷D可改善大鼠溃疡性结肠炎,其机制与通过TLR4/NOD信号通路缓解肠道炎症有关。

隐丹参酮调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响

目的:探讨隐丹参酮调节Toll样受体4/核转录因子κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响。方法:将H9c2细胞分为对照组(正常葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖33 mmol/L)、2.5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+2.5μmol/L隐丹参酮)、5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮)和脂多糖(LPS)组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮+1μg/mL TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS),各组细胞培养在相应的培养基中48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)水平;半胱氨酸天冬氨酸酶-1抑制剂(FLICA)-半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞GSDMD蛋白N端片段(GSDMD-N)、TLR4、NLRP3、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65、Cleaved Caspase-1、Caspase-1蛋白表达。结果:与对照组比较,高糖组H9c2细胞存活率下降(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与高糖组比较,2.5μmol/L隐丹参酮组、5μmol/L隐丹参酮组H9c2细胞存活率升高(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05)。TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS可逆转隐丹参酮对高糖诱导细胞增殖和焦亡的抑制作用。结论:隐丹参酮可抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡。

高原低氧通过NOD样受体信号通路诱导小鼠脾脏组织炎症反应

目的旨在基于代谢组学和转录组学联合分析,探究高原低氧通过NOD样受体信号通路诱导小鼠脾脏组织中炎症反应的潜在分子机制。方法分别在海拔400 m和4200 m饲养C57BL/6小鼠,5只/组,30 d后取脾脏组织,通过代谢组和转录组分析筛选差异代谢物和差异表达基因,关联KEGG富集分析,对关键通路中的差异代谢物和差异表达基因构建相关性网络互作图并进行RT-qPCR验证。结果代谢组学分析发现,在平原常氧组(PSC组)和高原低氧组(HST组)中共筛选出133个差异代谢物,其中上调95个,下调38个,KEGG富集分析,发现主要涉及到NOD样受体信号通路、HIF-1信号通路、胆固醇代谢等多个代谢途径;转录组结果表明,在PSC组和HST组共鉴定4213个差异表达基因,其中上调基因1947个,下调基因2266个,KEGG共富集到173个信号通路,包括NOD样受体信号通路、MAPK信号通路、NF-κB信号通路等多条途径;联合分析表明,差异代谢物与差异表达基因显著富集在NOD样受体信号通路中;因此,对NOD样受体信号通路中的差异代谢物ATP和差异表达基因构建相关性网络互作图。RT-qPCR实验结果表明,与PSC组比较,HST组NOD样受体信号通路中NOD1和NOD2途径相关的DEGs(CHUK、TAB3、MAPK8)以及NLRP1炎症体-CASP1途径相关的DEGs(NLRP1b、CASP1)表达水平显著增强,且下游炎症因子IL-6、IL-1β、IL-18、INF-γ和TNF-α的mRNA表达量均出现上调差异表达。结论基于代谢组学和转录组学联合分析发现,高原低氧刺激可能通过影响机体内NOD样受体信号通路,其通路中差异代谢物ATP与差异关键基因呈正相关,ATP通过激活NOD1、NOD2途径和NLRP1炎症体-CASP1两条途径介导下游炎症因子释放,致使小鼠脾脏组织炎症反应发生。

基于NLRP3信号通路探讨肠道菌群代谢产物TMAO对脑梗死小鼠神经炎症和血管单元损伤的影响

目的基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路探讨肠道菌群代谢产物氧化三甲胺(TMAO)对脑梗死小鼠神经炎症和血管单元损伤的影响。方法选择雄性C57小鼠120只,所有小鼠予含1%胆碱的高脂饲料适应性饲养6周,随机分为假手术(Sham)组、缺血/再灌注(I/R)组和TMAO+I/R组,每组40只。Sham组和I/R组予正常饲料+纯净水饲养,TMAO+I/R组予高脂饲料+0.12%TMAO饮用水饲养。饲养6周,I/R组和TMAO+I/R组制作左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,Sham组予假手术处理。I/R组和TMAO+I/R组复灌24 h,Sham组同期,采用Longa评分法评估神经功能缺损程度;取出完整脑组织,采用Western blotting法检测炎症蛋白NLRP3、Cleaved-Caspase-1、Cleaved-IL-1β和紧密连接蛋白ZO-1表达,采用TTC染色法分析脑梗死体积百分比,测算脑组织含水量以及监测脑血流量。结果与Sham组比较,I/R组和TMAO+I/R组Longa评分和脑组织NLRP3、Cleaved-Caspase-1、Cleaved-IL-1β蛋白相对表达量升高,脑组织ZO-1蛋白相对表达量降低(P均<0.05);I/R组和TMAO+I/R组左右两侧脑血流量及左侧与右侧脑血流量比值均降低(P均<0.05);I/R组和TMAO+I/R组脑梗死体积百分比和脑组织含水量均升高(P均<0.05)。与I/R组比较,TMAO+I/R组Longa评分和脑组织NLRP3、Cleaved-Caspase-1、Cleaved-IL-1β蛋白相对表达量升高,ZO-1蛋白相对表达量降低(P均<0.05);TMAO+I/R组左右两侧脑血流量及左侧与右侧脑血流量比值均降低(P均<0.05);TMAO+I/R组脑梗死体积百分比和脑组织含水量均升高(P均<0.05)。结论肠道菌群代谢产物TMAO可通过上调NLRP3信号通路介导的炎症反应,促进脑梗死小鼠神经炎症和血管单元损伤,从而对神经功能造成不可逆性损害。

加味椒艾丸贴敷神阙穴对轮状病毒腹泻小鼠NOD1/NF-κB信号通路的影响

目的观察加味椒艾丸贴敷神阙穴对轮状病毒腹泻小鼠NOD1/NF-κB信号通路的影响,探讨其干预轮状病毒感染性腹泻的机制。方法将40只SPF级ICR乳鼠中的10只分为正常对照组,其余30只采用猴轮状病毒SA11株悬液灌胃造模2 d,造模成功后随机分为模型组、丁桂贴组、加味椒艾丸组,每组10只。药物干预敷贴连续5 d,末次给药并禁食12 h后取材。收集各组小鼠粪便进行粪便评分;ELISA检测各组血清TNF-α、IL-1β、Caspase-1含量;Western blot检测各组小鼠小肠组织p65、NF-κB蛋白表达;HE染色观察各组小鼠肠组织病理形态。结果(1)与正常对照组比较,模型组小鼠粪便评分明显升高(P<0.01);与模型组比较,丁桂贴组和加味椒艾丸组粪便评分明显降低(P<0.05)。(2)与正常对照组比较,模型组血清中TNF-α、Caspase-1含量明显升高(P<0.01);与模型组比较,丁桂贴组及加味椒艾丸组TNF-α、Caspase-1含量明显下降(P<0.05,P<0.01);与加味椒艾丸组比较,丁桂贴组Caspase-1含量明显降低(P<0.01)。(3)与正常对照组比较,模型组p65、NF-κB蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,丁桂贴组、加味椒艾丸组p65、NF-κB蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。(4)正常对照组小鼠回肠和结肠黏膜上皮未见异常;模型组小鼠回肠和结肠黏膜上皮变性坏死,部分黏膜上皮缺失,且伴有不同程度的黏膜层血管扩张;丁桂贴组和加味椒艾丸组小鼠回肠和结肠黏膜上皮部分缺失,黏膜层血管少量扩张。结论加味椒艾丸贴敷神阙穴能改善轮状病毒腹泻症状,可能通过降低血清中TNF-α、Caspase-1含量及小肠组织中p65、NF-κB蛋白表达来调控NOD1/NF-κB信号通路。

鹰嘴豆芽素A通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻卵清蛋白诱导哮喘大鼠的气道炎症

[目的]探讨鹰嘴豆芽素A(BCA)通过调节Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘大鼠气道炎症的影响。[方法]将SD大鼠分为对照(CK)组、模型(Model)组、低剂量BCA组(BCA-L组,25 mg/kg)、高剂量BCA组(BCA-H组,100 mg/kg)、地塞米松阳性对照组(Dex组,1 mg/kg)、BCA-H+LPS(TLR4激活剂)组(100 mg/kg+0.1 mg/kg),每组12只。除CK组,其他组均通过OVA诱导构建哮喘大鼠模型。建模成功24 h后,进行给药处理,给药每日1次,持续10 d。利用动物肺功能测定仪检测大鼠吸气阻力、呼气阻力、肺通气顺应性的变化;吉姆萨(Giemsa)染色检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)水平;苏木精-伊红染色法(HE)染色检测大鼠肺组织病理变化;免疫组化检测大鼠肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测大鼠肺组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达。[结果]与CK组比较,Model组大鼠吸气阻力、呼气阻力、BALF中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平升高,肺组织中的支气管及血管周围炎性细胞浸润明显,肺组织中Eotaxin阳性染色面积百分数、TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达升高,肺通气顺应性降低(P<0.05);与Model组比较,BCA-L组、BCA-H组、Dex组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);LPS减弱了高剂量BCA对哮喘大鼠气道炎症的改善作用。[结论] BCA可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻OVA诱导哮喘大鼠的气道炎症。

红花黄色素调节NF-κB/NLRP3信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响

目的:探究红花黄色素(CY)调节核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对心肌梗死(MI)大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响。方法:通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MI模型。并将72只SPF级雄性大鼠分为:对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、低剂量CY组(CY-L组,20mg/kg)、高剂量CY组(CY-H组,40mg/kg)和高剂量CY+NF-κB激活剂组(CY-H+LPS组,CY 40mg/kg+LPS 10mg/kg),每组12只。造模后腹腔注射给药,1次/d,共28d。给药结束后对各组大鼠进行超声心电图检查,检测心功能变化情况。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)-伊文斯蓝(EB)法和免疫荧光法检测各组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞焦亡比例。苏木素伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理学变化。试剂盒检测大鼠心肌中白细胞介素(IL)-1β、IL-18和乳酸脱氢酶(LDH)水平。Western Blot检测心肌组织中NF-κB、NLRP3、cleaved-caspase1、胃泌素D-N(GSDMD-N)蛋白表达。结果:与Sham组相比,Model组大鼠心肌组织病理损伤严重,心功能降低,心肌梗死面积、心肌细胞焦亡比例、心肌组织中IL-1β、IL-18、LDH水平和NF-κB、NLRP3、GSDMD-N、cleaved-caspase1蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。与Model组相比,CY-L组、CY-H组大鼠心功能显著提高,心肌组织损伤减轻,细胞焦亡减少,炎症因子IL-1β、IL-18、LDH水平显著下降,NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达显著降低(P<0.05)。LPS减弱了高剂量CY对MI大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论:CY可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路,减少MI大鼠心肌细胞的焦亡和炎性损伤。

川陈皮素调节Notch/NF-κB/NLRP3信号通路对类风湿关节炎大鼠炎性损伤的影响

目的探究川陈皮素(NOB)调节神经源性基因同源蛋白(Notch)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对类风湿关节炎(RA)大鼠炎性损伤的影响。方法将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、NOB低剂量组(NOB-L组,50 mg/kg)、NOB高剂量组(NOB-H组,100 mg/kg)、NOB高剂量+Notch激活剂Jagged1组(NOB-H+Jagged1组,100 mg/kg NOB+50 mg/kg Jagged1)。于给药第0天与末次给药后对各组大鼠进行关节炎指数评价。自给药第0天开始,每7天测定1次大鼠足趾肿胀度。计算各组大鼠胸腺和脾脏指数;HE染色观察每组大鼠踝关节滑膜足趾病理学变化;ELISA法检测各组大鼠血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平;RT-qPCR法测定各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA表达;Western blot检测各组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NLRP3蛋白表达。结果1)RA的病情进展:与Control组相比,Model组大鼠关节炎指数和足趾肿胀度显著上升(P<0.05),滑膜组织病理学损伤严重。2)大鼠脏器指数及炎性因子变化:与Control组相比,Model组大鼠胸腺和脾脏指数显著上升(P<0.05),血清和滑膜组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升(P<0.05)。3)Notch/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达变化:与Control组相比,Model组大鼠滑膜组织中Notch、NF-κB、NLRP3 mRNA和蛋白、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与Model组相比,NOB-L、NOB-H组相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05),滑膜组织病理学损伤有所减轻。Jagged1减弱了NOB对RA大鼠炎性损伤的抑制作用(P<0.05)。结论NOB可能通过下调Notch/NF-κB/NLRP3信号通路,减轻RA大鼠的炎性损伤。

达原饮对Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响

目的:观察达原饮对幽门螺杆菌(Hp)感染模型大鼠胃组织和口周皮肤Toll样受体4/核因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子的影响,探讨达原饮治疗Hp感染的机制。方法:选取44只雄性SD大鼠,随机分为空白组8只及造模组36只,造模组予以Hp菌液灌胃造模,造模成功后,将造模组随机分为模型组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组、西药组,每组各8只,分别予以相应药物灌胃,空白组、模型组予以等量生理盐水灌胃,灌胃2周。观察大鼠造模前后一般情况改变,苏木精-伊红(HE)染色观察口周皮肤和胃组织病理学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠口周皮肤和胃组织TLR4、NF-κB、NLRP3表达以及血清中TNF-α、IL-1β表达水平。结果:给药干预后,与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠皮毛柔顺光泽,饮食水量增加,大便逐渐成型,胃黏膜上皮细胞层次基本分明,排列较整齐,炎症细胞浸润减少,口周皮肤角化过度、棘层增厚、毛囊周围轻度炎症细胞浸润等情况均有不同程度改善。与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠胃组织和口周皮肤TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平均有不同程度的下调(P<0.05或P<0.01),血清炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显下降(P<0.01)。结论:达原饮可能通过干预TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制TLR4、NF-κB、NLRP3及下游炎症因子的表达,减轻Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤炎症损伤。

雏鸡烟曲霉感染NOD1信号通路关键分子mRNA水平的变化

为明确烟曲霉菌感染雏鸡后肺组织内核苷酸结合寡聚化结构域1(nucleotide-binding oligomerisation domain1,NOD1)信号通路中关键分子mRNA水平的变化情况,取10日龄雏鸡40只,随机分为2组。感染组(Aspergillus fuigatus,Af)雏鸡滴鼻烟曲霉菌孢子悬液,50μL/只;对照组雏鸡滴鼻等量生理盐水。分别于感染后12、24、48 h处死雏鸡。无菌取肺组织,菌落计数法测定肺组织中烟曲霉菌的负荷;实时定量PCR方法检测肺组织中NOD1、Rip2、NF-kBp65 mRNA的表达情况。结果表明,Af组0 h未见烟曲霉菌生长,其他各时间点均有霉菌生长,且霉菌负荷量逐渐增加。对照组未见烟曲霉菌生长。在烟曲霉菌感染后24、48 h肺组织中NOD1和NFkBp65 mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。感染后12、24 h肺组织中Rip25 mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.05)。由此说明,NOD1信号通路在烟曲霉菌感染后被激活,其在抗烟曲霉菌感染免疫中必定扮演重要作用,详细机制有待进一步研究。

TXNIP/NLRP3信号通路在PCOS-IR大鼠卵巢慢性炎症中的作用机制研究

目的:研究硫氧还蛋白相互作用蛋白∕NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TXNIP∕NLRP3)信号通路对多囊卵巢综合征(PCOS)-胰岛素抵抗(IR)大鼠卵巢慢性炎症的影响。方法:颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)溶液0.2 ml(6 mg/100 g)建立PCOS-IR大鼠模型,建立成功的模型大鼠随机分为模型组、siRNA NC组、TXNIP siRNA组、RES干预组,每组8只,正常组8只。siRNA NC组、TXNIP siRNA组分别颈背部皮下注射5 nmol siRNA NC、TXNIP siRNA,5 d/次;RES干预组颈背部皮下注射50 mg/kg RES,正常组和模型组颈背部皮下注射等体积生理盐水,1次/d,10 d。放射免疫试剂盒检测血清中睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平,血糖仪检测血清中空腹血糖(FBG)水平,ELISA检测血清中空腹胰岛素(FINS)、IL-6、IL-1β、TNF-α水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)。HE染色观察卵巢卵泡发育情况;qRT-PCR和Western blot检测卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、pro-caspase-1蛋白水平。结果:模型组和siRNA NC组卵泡腔变大、出现囊肿现象,颗粒细胞层减少;TXNIP siRNA组和RES干预组出现黄体,卵泡腔变小,颗粒层增厚。与正常组相比,模型组、siRNA NC组T、LH、E_(2)、IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR,IL-6、IL-1β、TNF-α水平,卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平,pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平升高,FSH水平降低(P<0.05);分别与模型组、siRNA NC组相比,TXNIP siRNA组、RES干预组T、LH、E_(2)、IGF-1、FBG、FINS、HOMA-IR,IL-6、IL-1β、TNF-α水平,卵巢组织中TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平,pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平降低,FSH水平升高(P<0.05)。结论:抑制TXNIP/NLRP3信号通路可实现对PCOS-IR大鼠卵巢慢性炎症的缓解。

清肺保元胶囊对COPD模型大鼠气道炎症的抑制作用及对NLRP3信号通路的影响

目的:探讨清肺保元胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道炎症的抑制作用,以及对NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。方法:将60只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组(阳性对照,0.2 mg/kg)和清肺保元胶囊高、中、低剂量组(1232.0、616.0、308.0 mg/kg),每组10只。除空白对照组外,其余各组大鼠经烟熏28 d和气管内滴注脂多糖2次以复制COPD模型。自实验第29天起,空白对照组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,各给药组大鼠灌胃相应药物;给药体积均为10 mL/kg,每日1次,连续28 d。末次给药后,检测各组大鼠肺功能;采用苏木精-伊红染色法观察其肺组织病理学变化,采用酶联免疫吸附测定法检测其支气管肺泡灌洗液中白细胞介素1β(IL-1β)的含量并进行白细胞计数;采用Western blotting法检测其肺组织中NLRP3、剪切的胱天蛋白酶1(Cleaved caspase-1)蛋白的相对表达量。结果:模型组、地塞米松组和清肺保元胶囊高、中、低剂量组分别有3、2、1、1、2只大鼠死亡。与空白对照组比较,模型组大鼠第0.3秒用力呼气容积/用力肺活量比值(FEV0.3/FVC)显著降低(P<0.01);其肺组织可见大量炎性细胞浸润,病变明显;其支气管肺泡灌洗液中IL-1β含量和白细胞计数以及肺组织中NLRP3、Cleaved caspase-1蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠FEV0.3/FVC均显著升高(P<0.05或P<0.01);其肺组织病变不同程度地改善;其肺泡灌洗液中IL-1β含量和白细胞计数,肺组织中NLRP3蛋白(清肺保元胶囊低剂量组除外)和Cleaved caspase-1蛋白(清肺保元胶囊中、低剂量组除外)的相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:清肺保元胶囊可减轻COPD模型大鼠的肺组织病理损伤、改善其肺功能,这种作用可能与抑制NLRP3信号通路进而抑制炎症反应有关。

基于NLRP3炎症小体信号通路探讨盐酸小檗碱对三叉神经痛大鼠的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)大鼠模型中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的影响以及对TN模型大鼠的保护作用。方法:采用眶下神经缩窄术制备TN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组和盐酸小檗碱低、中及高剂量组(25 mg/kg、50 mg/kg及100 mg/kg),每组15只。另取15只大鼠(仅分离眶下神经,不结扎)作为假手术组,假手术组和模型组大鼠予以等量0.9%氯化钠溶液灌胃,其他各组大鼠灌胃予以相应剂量的盐酸小檗碱,灌胃体积10 ml/kg,1日1次,共14 d。采用电子测痛仪测定各组大鼠在不同时间的神经颜面部支配区机械痛阈值;采用酶联免疫吸附试验检测大鼠术侧三叉神经节组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组大鼠术侧三叉神经节组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及胱天蛋白酶1(caspase-1)的mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹法检测大鼠术侧三叉神经节组织中CGRP、NLRP3、ASC及caspase-1的蛋白表达水平。结果:建模前3、1 d,各组大鼠机械痛阈值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);建模后1、3 d,与假手术组比较,模型组大鼠机械痛阈值明显降低,差异有统计学意义(P <0.05),而模型组和盐酸小檗碱低、中及高剂量组大鼠机械痛阈值两两比较的差异均无统计学意义(P> 0.05)。建模后5~14 d,与假手术组比较,模型组大鼠机械痛阈值明显降低,差异有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱低、中及高剂量组大鼠机械痛阈值依次升高,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P <0.05)。术后第15日,与假手术组比较,模型组大鼠三叉神经节组织中IL-1β、TNF-α含量,CGRP、NLRP3、ASC及caspase-1的mRNA、蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱低、中及高剂量组大鼠三叉神经节组织中IL-1β、TNF-α含量,CGRP、NLRP3、ASC及caspase-1的mRNA、蛋白表达水平依次降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论:盐酸小檗碱可能通过下调NLRP3炎症小体信号通路减少炎症因子释放,降低术侧三叉神经节组织中CGRP表达水平,提高神经面部感觉区域的机械痛阈值,从而减轻TN对大鼠的损伤作用。

基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨益气通脉方干预ApoE-∕-小鼠肝脏炎症及脂质沉积的影响

目的:探究益气通脉方(YQTM)通过调控核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对载脂蛋白E-∕-敲除(Apo E-∕-)小鼠肝脏炎症的影响。方法:将40只Apo E-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(阳性药组)、YQTM低、中、高剂量组(0.39、0.78、1.56 g·kg^(-1))。各给药组在高脂饲料喂养基础上分别给予相应剂量药物灌胃,连续12周。8只C57BL/6J小鼠为空白组,普通饲料喂养。12周后,采用油红O(oil red O)染色、马松(Masson)染色法观察小鼠主动脉病变情况并判断是否造模成功;oil red O染色观察小鼠肝脏中脂肪沉积;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织病变情况;Masson染色观察小鼠肝脏胶原蛋白纤维分布;酶标仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的表达水平;肝脏中TC、TG水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的表达水平;免疫组化法(IHC)观察小鼠肝脏NF-κB、NLRP3的表达区域;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏中NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)、IκB激酶β(IKKβ)、磷酸化(p)-NF-κB、pIκB、p-IKKβ、NLRP3和胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠主动脉脂质沉积严重,肝脏细胞内脂肪滴积大量聚集且细胞质内充满脂肪空泡(P<0.01),小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均显著升高(P<0.01),肝脏中TG、TC水平升高(P<0.01);肝组织IL-1β和IL-18含量,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,YQTM各剂量组小鼠主动脉斑块减轻,肝脏内脂肪聚集减少,炎症细胞浸润得到缓解(P<0.05,P<0.01)。小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);肝脏中TG、TC水平有所减少;肝组织 L^(-1)β、IL-18水平,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:YQTM对Apo E-∕-小鼠肝脏炎症的干预机制可能是与下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。

脂多糖对仔猪下丘脑-垂体-肾上腺轴内应激基因和NOD信号通路关键基因表达的影响

本试验旨在研究免疫应激对仔猪下丘脑垂体肾上腺(HPA)轴应激基因和核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)信号通路关键基因表达的影响。选取12头杜×长×大仔猪,分成2个处理,每个处理6个重复。试验组注射100μg/kg体重的脂多糖(LPS)建立免疫应激模型,对照组注射等量的生理盐水。于注射LPS或生理盐水4 h后屠宰,取下丘脑、垂体和肾上腺。应用实时荧光定量PCR技术测定HPA轴应激基因和NOD信号通路关键基因在HPA轴中的mRNA 表达水平。结果表明:LPS导致下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素、垂体黑素皮质激素肽和肾上腺类固醇合成急性调节蛋白mRNA 表达量显著升高(P<0.05);LPS导致HPA轴中NOD信号通路关键基因NOD1、NOD2、受体互作蛋白2和肿瘤坏死因子-α mRNA 表达量显著升高(P<0.05)。综上所述,LPS促进了HPA轴应激基因和NOD信号通路关键基因的表达。

加味少腹逐瘀汤抑制NOD1/RIP2/NF-κB信号通路改善子宫内膜异位症痛经大鼠异位内膜及炎性微环境

目的通过检测子宫内膜异位症(EMT)痛经大鼠异位内膜NOD1/RIP2/NF-κB信号通路相关基因蛋白表达水平,探讨加味少腹逐瘀汤对EMT痛经大鼠异位内膜及炎性微环境的影响。方法将60只SPF级SD雌性大鼠按随机数表法分为假手术组(n=10)和造模组(n=50)。造模组采用自体移植法制备EMT痛经大鼠模型,将成模大鼠按照随机数表法分为模型组、孕三烯酮组(0.24g/kg)和加味少腹逐瘀汤低、中、高剂量组(3.5,7,14g/kg),每组10只。加味少腹逐瘀汤各剂量组每日灌胃1次,孕三烯酮组每周灌胃2次,假手术组、模型组每日蒸馏水2mL灌胃1次,持续给药12d。处死前各组大鼠均给予缩宫素,观察大鼠疼痛状态,随后麻醉处死剖取大鼠异位内膜组织;采用HE染色法观察大鼠异位内膜组织病理形态学改变;采用实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法分别检测各组大鼠异位内膜组织NOD1、RIP2、NF-κB蛋白表达水平;采用ELISA法检测各组大鼠异位内膜组织IL-8、IL-18、TNF-α、COX-2表达量。结果模型组疼痛潜伏期缩短,疼痛扭体次频繁且剧烈;各治疗组疼痛潜伏期延长,疼痛扭体反应次数减少,程度明显减轻,病理提示异位内膜组织炎症细胞浸润显著减轻,血液供应、组织增生及腺体均不同程度减少;分子生物学检测示大鼠异位内膜组织,孕三烯酮组与加味少腹逐瘀汤高、中剂量组NOD1、RIP2、NF-κB基因蛋白表达及炎性因子IL-8、IL-18、TNF-α、COX-2表达量均显著降低(P<0.05)。结论加味少腹逐瘀汤显著改善EMT痛经大鼠疼痛状态,其机制可能与该方有效抑制NOD1/RIP2/NF-κB信号通路进而影响炎性因子的释放及异位内膜的生长有关。