NOS2基因DNA甲基化编辑调节NO浓度影响肌肉发育通路基因的表达

旨在探究对一氧化氮合成酶(NOS)2进行DNA甲基化编辑后对肌红蛋白的调控作用机制,并研究其对神经元一氧化氮合酶(nNOS)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平是否有影响。本试验采用DNA甲基化编辑技术在猪肾细胞系PK-15细胞对基因NOS2进行甲基化编辑,在猪肾细胞中检测NOS2基因启动子DNA甲基化水平、NOS2表达水平、细胞内一氧化氮浓度以及肌纤维和肌红蛋白相关基因的表达。结果发现,NOS2基因启动子前500 bp区域平均DNA甲基化水平降低,但差异不显著,而gRNA2结合位点附近的CpG位点甲基化水平增高。此外,对NOS2进行甲基化编辑后,NOS2基因表达量和其iNOS蛋白质表达量显著降低。随着NOS2表达降低,nNOS和eNOS表达显著增加。MYHC-Ⅱb和MYHC-Ⅱx的表达水平显著下降,Myoglobin蛋白表达也显著下降。综上,NOS2基因的异常表达能够影响细胞中的NO生成,同时也会影响NOS1和NOS3的表达,以及和肌肉发育相关基因的表达。

高胰岛素血症及胰岛素抵抗的研究进展

高胰岛素血症及胰岛素抵抗是2型糖尿病和肥胖的主要代谢特征,可由遗传和生活方式等因素导致。二者在部分癌症的发生发展过程中可能起重要促进作用。本文就高胰岛素血症和胰岛素抵抗的关系,和所涉及的部分通路以及两者对其它癌症的影响进行综述,为研发新型缓解药物提供依据。

微小杆菌NOS基因密码子偏好性分析

对微小杆菌NOS基因密码子偏好性进行分析,为后续NOS基因的功能验证及遗传转化等研究提供理论依据。研究表明:微小杆菌NOS基因的密码子偏好性较弱,偏好使用G/C结尾的密码子;比较分析不同细菌NOS基因的密码子偏好性参数,发现不同细菌NOS基因密码子偏好性存在一定差异,整体看,放线菌NOS基因密码子偏好性比蓝藻,厚壁菌门强;与其他细菌NOS基因的CDS序列及RSCU值聚类分析表明,微小杆菌NOS基因与放线菌NOS基因表现出相近的密码子使用偏好性;中性绘图、PR2-plot和ENc-plot分析均表明,自然选择是影响NOS基因密码子偏好性形成的主要因素;与7种模式生物的基因组密码子使用频率比较发现,在异源转化受体选择中,大肠杆菌原核表达系统较酵母菌真核表达系统更适合微小杆菌NOS异源表达,常见5种作物均可作为微小杆菌NOS基因的遗传转化受体,其中水稻更理想。本研究初步揭示了微小杆菌NOS基因密码子使用规律,对后续开展基因功能验证有重要的指导作用,同时也可为生物一氧化氮合成酶进化提供一定科学依据。

丁苯酞对脑梗死后血管性认知功能障碍患者认知功能及血清NO/NOS的影响

探讨丁苯酞对脑梗死后血管性认知功能障碍患者认知功能及血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平的影响。方法 选取2021年2月~2023年2月在广西壮族自治区凭祥市人民医院接受治疗的脑梗死后血管性认知功能障碍患者80例为研究对象,以随机数字法分为对照组(n=40)、观察组(n=40)。运用MMSE评分量表评定脑梗死后血管性认知功能障碍患者认知功能,同时检测血清NO/NOS水平。对照组给予传统性二级预防药物治疗,观察组在传统性二级预防药物治疗基础上给予丁苯酞治疗,两组内服药物连续口服至少90天。比较两组患者治疗前后MMSE分值变化、血清NO/NOS水平以及MMSE分值与血清NO、NOS水平的相关性。结果 丁苯酞观察组治疗后MMSE评分(28.72±1.50)分明显高于对照组的(24.31±2.54)分,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组患者的血清NO和NOS水平分别为(58.46±0.70)μmol/L和(31.09±4.59)μmol/L,明显高于对照组的(44.25±6.27)μmol/L、(24.55±4.08)μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05),并且两者呈正相关性(r=0.511,P<0.05)。结论 丁苯酞可以通过增加血清 NO和 NOS含量水平使脑梗死后血管性认知功能障碍患者的认知水平提升。

一氧化氮合酶在去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤中的调控作用

目的研究一氧化氮合酶(NOS)在去卵巢大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤中的调控作用。方法选取雌性SD大鼠132只,为探究去卵巢对心肌IR损伤的影响,48只大鼠随机分为假手术组、IR组、去卵巢组、联合组,每组12只;为探究内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)在去卵巢加重心肌IR损伤中的作用,84只大鼠IR造模前进行去卵巢、尾静脉注射过表达eNOS或敲低iNOS的腺相关病毒,分为阴性假手术组、阴性IR组、阴性联合组、eNOS+IR组、eNOS联合组、iNOS小干扰RNA(si-iNOS)+IR组、si-iNOS联合组,每组12只。检测每组心肌梗死面积、血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)及心肌eNOS和iNOS的表达。结果与IR组比较,联合组心肌iNOS表达、心肌梗死面积、血清LDH和CK-MB水平增高,心肌eNOS表达、LVEF和LVFS水平降低(P<0.05)。与阴性联合组比较,eNOS联合组和si-iNOS联合组心肌梗死面积、血清LDH和CK-MB水平降低[(23.51±3.22)%、(26.21±2.93)%vs(58.78±5.42)%,(176.31±15.48)U/L、(169.52±17.12)U/Lvs(328.85±37.12)U/L,(35.41±6.41)U/L、(34.77±5.94)U/Lvs(88.73±9.14)U/L,P<0.05],LVEF、LVFS水平增高[(41.31±3.12)%、(42.09±3.41)%vs(30.77±2.15)%,(21.47±1.57)%、(21.32±1.42)%vs(15.92±1.33)%,P<0.05]。结论eNOS表达降低、iNOS表达增高可加重去卵巢大鼠心肌IR损伤。

冠心病与抑郁症关系的研究进展

研究发现,抑郁症与CHD之间存在十分密切的关系,抑郁情绪可以引起甚至加重CHD的发生和发展,反过来,CHD同样会干扰病人的心理情绪,因此,抑郁症与心血管疾病共病率很高。本文将从基因水平上探讨抑郁症和心血管疾病之间的关系,以期为防治抑郁症和CHD带来新思路。1 抑郁症影响一氧化氮合酶(NOS)诱发CHDNOS是一氧化氮(NO)合成过程中的关键酶,也是此过程中唯一的限速酶。一旦NOS发生突变,就会对NO的生成造成严重的影响。

NOS3单核苷酸多态性检测在妊娠高血压患者中的表达及临床指导价值研究

目的研究内皮型一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase 3,NOS3)单核苷酸多态性检测在妊娠高血压患者中的表达及临床指导价值。方法选择2016年3月—2018年1月本院收治的妊娠高血压患者(妊娠高血压组,74例)和正常妊娠孕妇(正常妊娠组,80名)作为研究对象,采集孕妇外周血,提取DNA,PCR-RFLP技术分析NOS3基因Glu298Asp位点的基因型。分析妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点基因型、等位基因与妊娠高血压严重程度关系。分析妊娠高血压患者并发症、妊娠不良结局患者与基因型频率关系。结果正常妊娠组和妊娠高血压组孕妇NOS3基因Glu298Asp位点TT、GT、GG基因型频率比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。正常妊娠组和妊娠高血压组孕妇NOS3基因Glu298Asp位点等位基因G和T频率比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。比较轻度、中度和重度妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点基因型频率,差异无统计学意义(P>0.05)。轻度、中度、重度妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点等位基因T频率逐渐升高。基因型为GT的妊娠高血压患者并发胎盘早剥、左心力衰竭、HELLP综合征、DIC、急性肾功能衰竭总发生率明显高于基因型TT和基因型GG患者(P<0.05)。基因型为GT的妊娠高血压患者新生儿窒息、剖宫产、胎儿宫内窘迫、围生儿死亡妊娠不良结局总发生率明显高于基因型TT和基因型GG患者(P<0.05)。结论NOS3基因Glu298Asp位点基因型、等位基因频率与妊娠高血压有关,等位基因T频率越高,妊娠高血压严重程度增加,基因型为GT的妊娠高血压患者并发症和妊娠不良结局的总发生率增加。

基于AMPK/eNOS信号通路探讨黄芪甲苷改善糖尿病肾病大鼠肾损伤的作用及机制研究

【目的】探讨黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及机制。【方法】将27只大鼠随机分为正常组、模型组、黄芪甲苷组,每组9只。模型组、黄芪甲苷组大鼠给予高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)40 mg/kg腹腔注射构建2型糖尿病肾病模型。造模成功后,黄芪甲苷组给予黄芪甲苷40 mg/kg灌胃治疗,正常组、模型组给予等体积生理盐水,每日1次,持续12周。12周后,测定大鼠空腹血糖(FBG)、尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)水平;苏木素-伊红(HE)染色法观察肾脏病理结构变化;过碘酸雪夫(PAS)染色、马松(Masson)染色法观察肾脏纤维化程度;定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测肾脏组织中腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)mRNA及蛋白表达水平。【结果】与模型组比较,黄芪甲苷组大鼠FBG、UACR显著降低(P<0.05),BUN、SCr含量未见明显改变;与模型组比较,黄芪甲苷组大鼠肾小球体积减小,基底膜增厚、系膜基质增生、肾小囊腔狭窄程度、胶原纤维沉积明显减轻;进一步的实验结果显示,黄芪甲苷组肾脏组织中AMPK、e NOS m RNA表达水平较模型组明显升高(P<0.05),AMPK的磷酸化水平及eNOS蛋白表达水平较模型组明显上调(P<0.05)。【结论】黄芪甲苷可改善大鼠糖尿病肾损害,其机制可能与激活AMPK/eNOS信号通路有关。

一氧化氮对茶树不同组织响应铝胁迫的影响

为探索外源NO在茶树不同组织响应Al^(3+)胁迫生理过程中发挥的作用,以茶树不同组织为试验材料,研究不同处理下(对照、Al^(3+)处理、Al^(3+)+NO释放剂DEA NONOate复合处理、Al^(3+)+NO清除剂cPTIO复合处理)对茶苗Al^(3+)含量、NO含量、NOS活性、丙二醛含量、游离脯氨酸含量、抗氧化酶活性等指标的影响。结果表明,外源添加Al^(3+)促进了茶树体内Al^(3+)的累积;外源NO作为一种正调控因子参与了茶树各组织对Al^(3+)的响应,促进茶树不同组织对Al^(3+)的吸收,增强Al^(3+)给茶苗带来的氧化损伤;而外源添加cPTIO则可以有效缓解茶树的Al^(3+)胁迫;外源添加Al^(3+)能够增加NO含量但不显著,与此同时NOS活性有明显提高;此外,Al^(3+)胁迫造成MDA含量增加,也伴随Pro含量及SOD、POD、CAT等抗氧化酶活性的提高;积极应对茶树遭受的Al^(3+)胁迫,尤其表现在Al^(3+)+NO复合处理中。综上,降低茶树的NO含量可调节茶树体内Al^(3+)水平,缓解茶树的Al^(3+)胁迫,期待本研究结果可为茶树降铝措施的研发提供新参考。

静脉-动脉体外膜肺氧合经皮穿刺与手术切开置管比较的Meta分析

目的综合评价和比较经皮穿刺与手术切开两种置管方式在建立静脉-动脉体外膜肺氧合(V-A ECMO)时的有效性与安全性。方法检索中国知网(CNKI)、万方数据库及维普网、中国生物医学文献数据库(CBMdisc)、美国国立医学图书馆PubMed数据库、荷兰医学文摘Embase数据库和Cochrane临床试验数据库,自建库至2023年1月发表的所有关于比较经皮穿刺置管与手术切开置管对建立V-A ECMO时效果的研究。有效性指标包括:置管成功率、置管时间、成功撤机率、住院病死率;安全性指标包括:下肢缺血发生率、置管部位出血发生率、置管部位感染发生率。对纳入文献进行质量评价后,应用RevMan 5.4软件进行统计学分析,并采用固定效应模型或随机效应模型计算合并后的综合效应,以漏斗图评估发表偏倚。结果共纳入11篇队列研究,共计患者14310例;纳入文献质量均较高,纽卡斯尔-渥太华量表(NOS)得分7~8分。Meta分析结果显示,与手术切开置管比较,经皮穿刺置管可降低置管成功率[优势比(OR)=1.41,95%可信区间(95%CI)0.70~2.87,P<0.0001]、住院病死率(OR=0.81,95%CI 0.75~0.87,P<0.00001)、置管部位出血发生率(OR=0.41,95%CI 0.22~0.75,P=0.004)、置管部位感染发生率(OR=0.47,95%CI 0.32~0.69,P=0.0001),但置管时间增加[均数差(MD)=9.48,95%CI 8.22~10.75,P<0.00001],两组成功撤机率(OR=1.35,95%CI 0.84~2.18,P=0.22)、下肢缺血发生率(OR=0.91,95%CI 0.54~1.56,P=0.75)差异均无统计学意义。结论在V-A ECMO中,与手术切开置管比较,经皮穿刺置管可降低住院病死率、置管部位出血发生率及置管部位感染发生率,但具有较低的置管成功率及增加置管时间;两种置管方式在成功撤机率及下肢缺血发生率差异无统计学意义。

RAS基因多态性与肥胖相关性的研究进展

肥胖为多基因遗传性疾病,其基因多态性与肥胖的关系是目前热门研究。目前国内外均有大量研究分析了肾素血管紧张素系统基因多态性与肥胖的关系。本文就肾素-血管紧张素系统(RAS)主要组成及生物学功能进行论述,并重点讨论ACE基因、MRAS基因和NOS3基因与肥胖的相关性。

熟地提取液对衰老模型小鼠脑组织NOS、NO、SOD和LPO的影响

目的探讨熟地不同溶媒提取液抗衰老的机制。方法观察小鼠脑组织中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）、一氧化氮（ＮＯ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化脂质（ＬＰＯ）的随龄变化，并观察了熟地的氯仿及乙醇提取液对上述指标的影响。结果熟地的氯仿及乙醇提取液均能明显提高Ｄ－半乳糖致衰老模型小鼠脑组织中ＮＯＳ和ＳＯＤ的活性，使ＮＯ含量增加，ＬＰＯ含量无明显降低。结论熟地氯仿提取液具有延缓衰老的作用。

不同负荷运动训练对大鼠脑组织中一氧化氮合酶活性的影响

为了探讨不同负荷的运动训练对大鼠脑组织中一氧化氮合酶ＮＯＳ活性的影响，对大鼠进行为期８周的不同负荷的游泳训练，并测定大鼠脑组织中构建型ＮＯＳｃＮＯＳ和诱导型ＮＯＳｉＮＯＳ活性。研究结果：经过８周的运动训练后，９０ｍｉｎ训练组脑组织中ｃＮＯＳ活性显著高于对照组，而１５０ｍｉｎ训练组脑组织中ｉＮＯＳ活性显著高于对照组。结果表明，中等负荷的运动训练可使脑组织中ｃＮＯＳ活性升高，而大负荷的运动训练可使脑组织中ｉＮＯＳ活性升高。从而表明：适当的运动训练对改善大脑的功能具有一定的作用，而大负荷的运动训练可产生大量的一氧化氮，影响大脑的功能，可能导致运动性疲劳和过度训练的发生。

苦马豆素对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】探索苦马豆素(SW)与小鼠腹腔巨噬细胞功能之间的关系,为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将70只小鼠随机分为7组,其中5组分别按0.05、0.2、0.8、3.2和6.4mg·kg-1每天灌服SW生理盐水,连续21d,另2组为生理盐水和空白对照组。收集小鼠腹腔巨噬细胞,经脂多糖(LPS)诱导活化,用ELISA法检测TNF-α生成,酶法检测一氧化氮合酶(NOS)活性,化学法检测H2O2浓度,MTT比色法检测杀伤肿瘤细胞活性及吞噬中性红能力。【结果】SW剂量在0.2～3.2mg·kg-1之间,能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬和杀伤活性﹑NOS活性,促进TNF-α和H2O2生成,且均呈剂量效应关系;6.4mg·kg-1SW对小鼠巨噬细胞的活性具有抑制作用。【结论】低剂量SW可以通过提高NOS活性介导巨噬细胞信号传递通路,促进TNF-α和H2O2生成,发挥其吞噬和杀伤功能;高剂量SW对小鼠巨噬细胞免疫功能起抑制作用。提示,SW对小鼠腹腔巨噬细胞具有双向调节作用。

雷公滕及铅、镉对小鼠睾丸间质细胞一氧化氮合酶活性的影响

目的 探讨雷公藤及铅、镉等重金属元素对睾丸间质细胞一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响。 方法 用 NADPH- d黄递酶组织化学方法 ,观察给予氯化镉、醋酸铅、雷公藤 1、2、3、4周后 ,小鼠睾丸间质 NOS活性的变化。 结果 正常组间质细胞呈 NOS强阳性反应 ,而曲精小管生精细胞均呈 NOS阴性反应。给予雷公藤 2周内NOS反应无变化 ,第 3和第 4周后 ,NOS阳性的睾丸间质细胞数量无明显变化 ,但 NOS活性稍降低。给予醋酸铅和氯化镉 1周后 ,NOS阳性的睾丸间质细胞数量明显减少 ,并随给药时间延长而加重 ,NOS活性逐渐降低 ,给药 4周后 NOS阳性的睾丸间质细胞几乎不着色。 结论 雷公藤虽然具有明显抗生育作用 ,但对 NOS阳性的睾丸间质细胞数量及 NOS活性无明显影响 ;而铅、镉等对睾丸有毒理作用的重金属元素 ,不但可使 NOS阳性的睾丸间质细胞减少 ,NOS活性也明显降低。

年龄及人参皂甙 Rg1 对大鼠大脑皮层 NO 释放的影响

探讨了ＮＯ与衰老的关系及与Ｒｇ１抗衰老机制的关系。用Ｇｒｉｅｓｓ法，３ＨＬ精氨酸转化法分别研究大鼠大脑皮层细胞ＮＯ含量及ＮＯＳ活性，观察其随龄变化及人参皂甙Ｒｇ１（Ｒｇ１）对老年鼠ＮＯ及ＮＯＳ的影响。实验表明，成年鼠（９月龄）与青年鼠（３月龄）ＮＯ含量及ＮＯＳ活性无显著性差异。老年鼠（２７月龄）脑皮层ＮＯ含量明显高于青年鼠和成年鼠，ＮＯＳ活性也明显增高。老年鼠给予Ｒｇ１后可显著减少大脑皮层ＮＯ含量和降低ＮＯＳ活性。结果提示，ＮＯ与衰老关系密切，Ｒｇ１的抗衰老作用与其对ＮＯＳ活性的抑制有关。

大骨节病患者血清NO、NOS、sFas/APO-1检测分析

目的探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、可溶性Fas(sFas)诱导大骨节病发生发展的作用与特点,为大骨节病防治研究提供新的思路。方法选择陕西省永寿县、榆林市榆阳区大骨节病区与咸阳市渭城区非大骨节病区120例调查对象,分为成人、儿童大骨节病组;成人、儿童病区对照组;成人、儿童非病区对照组,每组20例,平均年龄、性别无差别。用酶还原法检测了血清NO,化学比色法检测了血清NOS、iNOS,ELISA法检测了血清sFas水平。结果①大骨节病成人组血清NO、iNOS显著高于病区和非病区成人对照组(P< 0.05);血清NOS、sFas/APO鄄1水平高于非病区成人对照组(P< 0.005)。②大骨节病儿童组血清NO高于非病区儿童对照组(P< 0.05);血清NOS、iNOS均高于病区和非病区儿童对照组(P< 0.005)。结论儿童大骨节病发生发展中NO诱导途径起一定的作用,而Fas途径作用不明显。当疾病发展到成人大骨节病时,二者均起一定作用。

PCR方法检测食品中的转基因成分35S和NOS的研究

根据转基因农作物中最常用的花椰菜叶病毒启动子(CaMV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针(FDCP),分别建立了常规PCR、应用FDCP的新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法。利用该套方法对冷冻马铃薯条、大豆、冷冻玉米棒、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S启动子、NOS终止子,6份样品结果为阴性。结果表明我们建立的两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段,其中常规PCR方法具有灵敏度高、特异性好的特点;应用FDCP的新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。

当归挥发油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨当归挥发油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用改良线栓法阻断大鼠大脑中动脉建立脑缺血模型,到达再灌注时限后进行神经功能缺损评分;检测脑梗死体积比、脑含水量及脑血管通透性;血清NO、NOS含量;以及SOD和GSH-Px活性。结果:当归挥发油可有效改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损;降低脑梗死体积比、脑血管通透性和脑含水量;降低血清NO、NOS含量;增强SOD和GSH-Px活性。结论:当归挥发油对脑缺血再灌注损伤有显著保护作用,其机制可能与提高脑组织抗氧化能力有关。

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (Nos)的序列特点 ,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分 35S启动子和Nos终止子的方法 .并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等 11份实物样品进行了检测 ,其中有 5份样品结果阳性 .结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测出 35S和Nos双组分 ,较常规PCR技术更为简便、快速、准确 ,有很好的应用前景 .