大鼠Nogo基因片段的克隆及与GST融合蛋白的表达和纯化

目的 :获取大鼠Nogo基因片段并高效表达纯化 .方法 :用RT PCR技术 ,从成年SD大鼠脊髓的总RNA中 ,获得编码Nogo基因功能片段的DNA .测序后 ,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX 4T 1,构建重组表达载体 ,并导入E .coliDH5α中 ,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白 .对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化 .结果 :获得成年SD大鼠Nogo(5 70～ 6 91和 10 2 8～ 10 89氨基酸残基 )的基因 ,测序结果与已发表的基因序列相一致 .重组GST融合蛋白经SDS PAGE分析 ,在相对分子质量 (Mr) 390 0 0和 32 0 0 0处 ,有特异的蛋白条带 .重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后 ,得到了高纯度的融合蛋白 .结论 :成功克隆成年大鼠No go基因片段 ,并在E .coliDH5α中高效表达 。

Nogo基因和雌激素受体基因多态性与多发性硬化发病易感性的关系

目的分析Nogo基因和雌激素受体基因单核苷酸多态性与多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)遗传易感的相关性。方法以60例临床及实验室确诊的MS患者和120例与入组患者种族、年龄、性别相匹配健康志愿者为研究对象,利用聚合酶链(PCR)电泳分析Nogo基因多态性,并用聚合酶链限制性长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测雌激素受体基因多态性。结果多发性硬化患者PvuⅡ基因和Nogo基因多态性分布与对照组相比具有显著差异。结论 PvuⅡ基因和Nogo基因多态性可能是多发性硬化发生的一个遗传学危险因素。

广西壮族人群Nogo基因rs12464595和rs17046518与鼻咽癌的关系

目的:探讨Nogo基因多态性与广西壮族人群鼻咽癌的关系。方法:采用单碱基延伸PCR技术和DNA测序法,检测200例广西壮族鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和200例壮族健康对照者(对照组)的Nogo基因rs12464595和rs17046518位点单核苷酸多态性,进而比较其相互间基因型和等位基因分布频率的差异,用SHEsis软件分析Nogo基因两位点的单倍型。结果:Nogo基因rs17046518位点的基因型和等位基因型频率在鼻咽癌组与对照组间分布差异无统计学意义(P>0.05)。但是rs12464595位点的T等位基因频率分布在两组间比较,差异有统计学意义(P=0.003)。单倍型分析的结果显示两者的CG和CA单倍型差异有统计学意义(P=0.045,P=0.002)。结论:在广西壮族人群中,携带Nogo基因位点rs12464595的T等位基因和CG单倍型以及CA单倍型可增加个体鼻咽癌的风险。

广西人群Nogo基因rs2919126C/T和rs7575107G/T遗传多态性研究

目的研究广西正常人群中轴索生长抑制因子(Neurite growth inhibitor,Nogo)基因rs2919126C/T位点和rs7575107G/T位点多态性分布特点,并分析其在不同人群中的分布差异。方法采取多重单碱基延伸法(SNa Pshot)与DNA测序法对323例广西人群的Nogo基因rs2919126C/T位点和rs7575107G/T位点进行基因分型检测,并用统计学方法比较其基因型和等位基因频率在不同性别及组间分布差异。结果 rs2919126C/T存在CC、CT、TT 3种基因型,分布频率为6.5%、33.4%、60.1%,此位点基因型及等位基因频率在广西人群的男女之间差异无统计学意义(P>0.05)。其基因型和等位基因与国际人类基因组单体型图计划(HapMap)公布的欧洲和非洲人群的比较差异有统计学意义(P<0.01);rs7575107G/T存在GG、GT、TT 3种基因型,分布频率为2.5%、24.8%、72.7%,此位点基因型及等位基因频率在广西人群的男女之间无统计学意义(P>0.05)。基因型和等位基因频率与非洲人群之间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Nogo基因rs2919126C/T位点和rs7575107G/T位点基因多态性在不同种族和地区间存在着不同程度差异。这种差异可能对研究在不同人群间Nogo基因多态性和疾病的相关性起到指导作用。

抑郁症与Nogo基因3端未编码区CAA插入/缺失突变的关联研究

目的探讨抑郁症与Nogo基因的3端未编码区CAA Ins/Del(插入/缺失)突变的相关性。方法应用聚合酶链反应(PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法,检测321例抑郁症患者和250名健康对照Nogo基因的CAA Ins/Del基因突变分布,采用SHEsis软件分析该基因多态性与抑郁症的关系。结果Nogo基因的3端未编码区CAA Ins/Del突变的基因型和等位基因频率在患者组和对照组间的差异无统计学意义(2=2.01,P>0.05;2=0.31,P>0.05)。结论未发现Nogo基因的3端未编码区CAA Ins/Del与抑郁症相关。

中国成都汉族与泰国人群Nogo蛋白基因遗传多态性研究

轴索生长抑制因子(Neurite growth inhibitor,Nogo)在中枢神经系统中主要发挥抑制轴突再生的作用,其基因TATA和CAA插入缺失多态性与慢性精神分裂症发病风险有关,在不同种族间RTN4基因型及等位基因频率分布的存在差异.该研究将采用聚合酶链反应和聚丙烯酰胺凝胶电泳方法检测205名中国成都汉族人和101名泰国人RTN4基因多态性,比较两组人群RTN4基因TATC和CAA插入缺失多态性分布情况,并与不同种族人群研究结果进行比较.研究发现在中国成都地区汉族人群中,RTN4基因(TATC)2(TATC)2基因型频率为10.2%,明显低于泰国人群(21.8%),差异具有统计学意义(P=0.006);(TATC)2等位基因在成都汉族人群中占34.9%,明显低于泰国人群(45.0%),差异具有统计学意义(P=0.015).CAA插入缺失基因型和等位基因频率在成都汉族人群和泰国人群中差异均无统计学意义(P>0.05).此外,中国成都地区汉族人群等位基因(TATC)2频率(34.9%)明显低于法国加拿大人(45.0%)和突尼斯人(49.0%),差异具有统计学意义(P<0.05);等位基因(CAA)2频率(66.8%)明显高于法国加拿大人(53.0%)和巴西人(37.8%),差异具有统计学意义(P<0.05);结果表明RTN4基因TATA和CAA插入缺失多态性在不同种族间的分布存在明显差异.

Nogo及雌激素受体基因多态性与多发性硬化的研究

目的分析Nogo基因和雌激素受体多态性在多发性硬化的分布特点,探讨上述基因多态性与云南多发性硬化患者发病的相关性.方法分别采用聚合酶链式反应(PCR)分析方法和限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(PCR-RFLP)分析方法,分析47例MS患者及47例健康对照者的Nogo基因3'端未编码区CAA插入/缺失突变的基因型和等位基因频率及雌激素受体(estrogen receptor,ER)α基因PvuⅡ、XbaⅠ酶切多态性的分布,采用SPSS软件分析上述基因多态性与MS的关系.结果 MS组的NogoDel型等位基因频率和ER PvuⅡ大P等位基因频率明显高于对照组,经χ2检验2组间分布差异有统计学意义(P<0.05).对Nogo及ER等位基因进行Logistics回归分析,ER PvuⅡ小P等位基因,与MS发生成负相关,相关系数为-1.670(P=0.013),发生MS相对危险度的95%可信区间为0.050～0.704,NogoIns型等位基因,与MS发生成负相关,相关系数为-1.248(P=0.013),发生MS相对危险度的95%可信区间0.087～0.948.结论 Nogo基因3'端未编码区CAA缺失突变可能是云南汉族人群患MS后不易缓解的危险因素之一,而Nogo基因3'端未编码区CAA插入突变可能是云南汉族人群患MS后易修复的因素之一;ER PvuⅡ大P可能是云南汉族人群易感MS的的危险因素之一.

Nogo基因3′端未编码区CAA插入/缺失突变与多发性硬化发病关系

目的分析Nogo基因3′端未编码区CAA插入/缺失(Ins/Del)突变以及等位基因频率在多发性硬化(MS)患者中的分布特点,探讨MS发病与Nogo基因3′端未编码区CAAIns/Del突变的相关性。方法应用聚合酶链反应(PCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法,检测42例MS患者和47例健康对照者Nogo基因3′端未编码区CAAIns/Del突变基因型及等位基因频率分布,采用SPSS16.0软件分析该基因多态性与MS的关系。结果 MS组Del等位基因频率高于对照组,且两组间Nogo基因3′端未编码区CAAIns/Del突变Del型等位基因频率分布差异有统计学意义(χ2=4.077,P=0.043<0.05)。结论 Nogo基因3′端未编码区CAA片段Del等位基因频率的增高,可能增加MS发病风险,值得今后进一步研究考证。

中国广西人群Nogo-A基因3'-非翻译区遗传多态性的研究

目的研究Nogo-A基因3'-非翻译区单核苷酸多态性(SNP)各等位基因及基因型在中国广西地区人群中的分布频率,比较其在不同种族间分布的差异。方法采用单碱基延伸的PCR技术和DNA测序法检测199例中国广西人的Nogo-A基因3'-非翻译区rs2588510C/T、rs887G/A多态性,并结合人类基因组计划(Hapmap)公布的四个人群(欧洲人、非洲人、日本人和中国北京人)的SNP分型数据,比较分析这五个人群的基因型及等位基因的分布频率。结果在中国广西人群中存在Nogo-A基因3'-非翻译区rs2588510C/T、rs887G/A多态性。与欧洲及非洲人群相比,Nogo-A基因多态性的分布频率均存在显著性差异(P<0.05);而与日本人及北京人相比,差异无显著性(P>0.05)。结论在中国广西人群中存在Nogo-A基因多态性,但与其他种族人群比较存在显著性差异,这种差异可能是导致一些疾病在不同种族间的发病率和临床表现存在显著不同的因素之一。

RNA干涉技术对星形胶质细胞Nogo表达调控的实验研究

目的采用RNA干涉技术使Nogo基因沉默,阻断抑制因子的传导通路,通过RNA干涉小发夹抑制内源性Nogo基因在星形胶质细胞的表达,促进中枢神经轴突再生。方法采用星形胶质细胞体外诱导培养技术,制备得到条件培养的细胞;利用斑点杂交、免疫印迹和RT-PCR方法对RNA干涉小发夹有效地沉默了Nogo基因进行分析。结果制备的星形胶质细胞采用抗GFAP抗体进行免疫细胞化学染色法进行鉴定,纯度在95%以上;条件培养星形胶质细胞的免疫印迹和RT-PCR分析结果表明,特异性Nogo干涉小发夹抑制了Nogo在脊髓中的表达。结论人工合成寡核苷酸对星形胶质细胞Nogo基因表达有明显的抑制作用,从而有利于损伤神经核突起的再生。

局灶性脑缺血再灌注大鼠Nogo-A mRNA及BDNF的表达

Nogo基因编码对中枢神经系统(CNS)轴突生长具有抑制作用的髓鞘相关蛋白，其基因产物有三个不同的异构体，分别为NogoA，B，C。其中，NogoA位于CNS磷脂中，可明显抑制神经轴突再生。对Nogo-A mRNA在正常脑组织及脊髓损伤中的研究已有报道，但在脑损伤中其表达的时程变化尚未见报道。本工作运用原位杂交，

NOGO与中枢神经再生

NOGO基因编码一个抑制CNS轴突再生的蛋白 ,该蛋白有三种异构体 ,分别为NOGOA ,B ,C。由于掌握了这种完整蛋白及其基因 ,预计将准确地鉴定NOGO抑制轴突生长的部位、分子机制等。这为寻找更好的方法来阻止这种蛋白的作用创造了有利条件。

腺病毒介导的RNAi对VaD大鼠脑内NgR/RhoA/ROCK2信号通路的影响

目的探讨基于腺相关病毒为载体构建的Nogo受体(NgR)抑制剂通过NgR/Ras基因家族成员(Rho)A/Rho相关激酶(ROCK)2信号通路改善血管性痴呆(VaD)大鼠学习记忆能力及轴突再生分子机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NgR干扰剂组(腺相关病毒)、阴性对照组(NgR空载体病毒),每组10只。采用双侧颈总动脉永久结扎术法制作VaD大鼠模型,模型成功后,将AAV9-NgR-shRNA通过脑立体定位术注射至大鼠海马组织,阴性对照组注入等量空载体腺相关病毒。4 w后,采用Morris水迷宫测定学习、记忆能力,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)、Western印迹检测各组NgR/RhoA/ROCK2通路NgR、RhoA、ROCK2 mRNA及蛋白表达水平,电镜观察大鼠海马突触超微结构变化。结果术后1 w,模型组、阴性对照组潜伏期时间与跨越平台次数与NgR干扰组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与假手术组比较有显著性差异(均P<0.05)。术后4 w,与模型组及阴性对照组比较,NgR干扰组潜伏期显著缩短,跨越平台次数显著增加,海马中NgR、RhoA、ROCK2 mRNA及其蛋白表达显著减少(均P<0.05),且海马组织内突触前后囊泡正常、细胞器更加完整;阴性对照组上述指标与模型组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论NgR抑制剂可能通过抑制NgR/RhoA/ROCK2信号通路起到促进神经轴突再生,改善海马突触结构,减轻VaD大鼠认知功能障碍的作用。