NOS2基因DNA甲基化编辑调节NO浓度影响肌肉发育通路基因的表达

旨在探究对一氧化氮合成酶(NOS)2进行DNA甲基化编辑后对肌红蛋白的调控作用机制,并研究其对神经元一氧化氮合酶(nNOS)和内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平是否有影响。本试验采用DNA甲基化编辑技术在猪肾细胞系PK-15细胞对基因NOS2进行甲基化编辑,在猪肾细胞中检测NOS2基因启动子DNA甲基化水平、NOS2表达水平、细胞内一氧化氮浓度以及肌纤维和肌红蛋白相关基因的表达。结果发现,NOS2基因启动子前500 bp区域平均DNA甲基化水平降低,但差异不显著,而gRNA2结合位点附近的CpG位点甲基化水平增高。此外,对NOS2进行甲基化编辑后,NOS2基因表达量和其iNOS蛋白质表达量显著降低。随着NOS2表达降低,nNOS和eNOS表达显著增加。MYHC-Ⅱb和MYHC-Ⅱx的表达水平显著下降,Myoglobin蛋白表达也显著下降。综上,NOS2基因的异常表达能够影响细胞中的NO生成,同时也会影响NOS1和NOS3的表达,以及和肌肉发育相关基因的表达。

NOS3单核苷酸多态性检测在妊娠高血压患者中的表达及临床指导价值研究

目的研究内皮型一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase 3,NOS3)单核苷酸多态性检测在妊娠高血压患者中的表达及临床指导价值。方法选择2016年3月—2018年1月本院收治的妊娠高血压患者(妊娠高血压组,74例)和正常妊娠孕妇(正常妊娠组,80名)作为研究对象,采集孕妇外周血,提取DNA,PCR-RFLP技术分析NOS3基因Glu298Asp位点的基因型。分析妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点基因型、等位基因与妊娠高血压严重程度关系。分析妊娠高血压患者并发症、妊娠不良结局患者与基因型频率关系。结果正常妊娠组和妊娠高血压组孕妇NOS3基因Glu298Asp位点TT、GT、GG基因型频率比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。正常妊娠组和妊娠高血压组孕妇NOS3基因Glu298Asp位点等位基因G和T频率比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。比较轻度、中度和重度妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点基因型频率,差异无统计学意义(P>0.05)。轻度、中度、重度妊娠高血压患者NOS3基因Glu298Asp位点等位基因T频率逐渐升高。基因型为GT的妊娠高血压患者并发胎盘早剥、左心力衰竭、HELLP综合征、DIC、急性肾功能衰竭总发生率明显高于基因型TT和基因型GG患者(P<0.05)。基因型为GT的妊娠高血压患者新生儿窒息、剖宫产、胎儿宫内窘迫、围生儿死亡妊娠不良结局总发生率明显高于基因型TT和基因型GG患者(P<0.05)。结论NOS3基因Glu298Asp位点基因型、等位基因频率与妊娠高血压有关,等位基因T频率越高,妊娠高血压严重程度增加,基因型为GT的妊娠高血压患者并发症和妊娠不良结局的总发生率增加。

基于AMPK/eNOS信号通路探讨黄芪甲苷改善糖尿病肾病大鼠肾损伤的作用及机制研究

【目的】探讨黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及机制。【方法】将27只大鼠随机分为正常组、模型组、黄芪甲苷组,每组9只。模型组、黄芪甲苷组大鼠给予高脂饲料喂养联合链脲佐菌素(STZ)40 mg/kg腹腔注射构建2型糖尿病肾病模型。造模成功后,黄芪甲苷组给予黄芪甲苷40 mg/kg灌胃治疗,正常组、模型组给予等体积生理盐水,每日1次,持续12周。12周后,测定大鼠空腹血糖(FBG)、尿白蛋白/尿肌酐比值(UACR)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)水平;苏木素-伊红(HE)染色法观察肾脏病理结构变化;过碘酸雪夫(PAS)染色、马松(Masson)染色法观察肾脏纤维化程度;定量聚合酶链反应(qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测肾脏组织中腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)mRNA及蛋白表达水平。【结果】与模型组比较,黄芪甲苷组大鼠FBG、UACR显著降低(P<0.05),BUN、SCr含量未见明显改变;与模型组比较,黄芪甲苷组大鼠肾小球体积减小,基底膜增厚、系膜基质增生、肾小囊腔狭窄程度、胶原纤维沉积明显减轻;进一步的实验结果显示,黄芪甲苷组肾脏组织中AMPK、e NOS m RNA表达水平较模型组明显升高(P<0.05),AMPK的磷酸化水平及eNOS蛋白表达水平较模型组明显上调(P<0.05)。【结论】黄芪甲苷可改善大鼠糖尿病肾损害,其机制可能与激活AMPK/eNOS信号通路有关。

熟地提取液对衰老模型小鼠脑组织NOS、NO、SOD和LPO的影响

目的探讨熟地不同溶媒提取液抗衰老的机制。方法观察小鼠脑组织中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）、一氧化氮（ＮＯ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化脂质（ＬＰＯ）的随龄变化，并观察了熟地的氯仿及乙醇提取液对上述指标的影响。结果熟地的氯仿及乙醇提取液均能明显提高Ｄ－半乳糖致衰老模型小鼠脑组织中ＮＯＳ和ＳＯＤ的活性，使ＮＯ含量增加，ＬＰＯ含量无明显降低。结论熟地氯仿提取液具有延缓衰老的作用。

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (Nos)的序列特点 ,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分 35S启动子和Nos终止子的方法 .并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等 11份实物样品进行了检测 ,其中有 5份样品结果阳性 .结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测出 35S和Nos双组分 ,较常规PCR技术更为简便、快速、准确 ,有很好的应用前景 .

大骨节病患者血清NO、NOS、sFas/APO-1检测分析

目的探讨一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、可溶性Fas(sFas)诱导大骨节病发生发展的作用与特点,为大骨节病防治研究提供新的思路。方法选择陕西省永寿县、榆林市榆阳区大骨节病区与咸阳市渭城区非大骨节病区120例调查对象,分为成人、儿童大骨节病组;成人、儿童病区对照组;成人、儿童非病区对照组,每组20例,平均年龄、性别无差别。用酶还原法检测了血清NO,化学比色法检测了血清NOS、iNOS,ELISA法检测了血清sFas水平。结果①大骨节病成人组血清NO、iNOS显著高于病区和非病区成人对照组(P< 0.05);血清NOS、sFas/APO鄄1水平高于非病区成人对照组(P< 0.005)。②大骨节病儿童组血清NO高于非病区儿童对照组(P< 0.05);血清NOS、iNOS均高于病区和非病区儿童对照组(P< 0.005)。结论儿童大骨节病发生发展中NO诱导途径起一定的作用,而Fas途径作用不明显。当疾病发展到成人大骨节病时,二者均起一定作用。

藏鸡高海拔适应与肺组织NOS活力的研究

为研究藏鸡高海拔适应机制，本试验测定了藏鸡和低地鸡种在高海拔环境饲养时的右心指数，分析了海拔和品种对鸡肺组织一氧化氮合酶（NOS）活力的影响。结果表明在高海拔环境中。藏鸡的右心指数平均为22．91％，在正常范围内；而对照的矮小隐性白（D）和寿光鸡（S）右心指数分别为28．8096和29．89％，表现不同程度的右心增大；藏鸡肺组织NOS活力明显高于低地鸡，特别是在高海拔环境中差异更加显著，比低地鸡高35％～118%。藏鸡NOS活力较高可能是藏鸡在高海拔环境右心指数保持正常的原因．是高海拔适应生理特征之一。

PCR方法检测食品中的转基因成分35S和NOS的研究

根据转基因农作物中最常用的花椰菜叶病毒启动子(CaMV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针(FDCP),分别建立了常规PCR、应用FDCP的新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法。利用该套方法对冷冻马铃薯条、大豆、冷冻玉米棒、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S启动子、NOS终止子,6份样品结果为阴性。结果表明我们建立的两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段,其中常规PCR方法具有灵敏度高、特异性好的特点;应用FDCP的新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。

异丙酚抑制炎性痛大鼠脊髓NOS神经元的c-fos表达

用福尔马林致痛模型、c fos基因免疫组织化学法和NADPH d组织化学技术 ,研究大鼠脊髓结构对福尔马林痛刺激的反应及异丙酚在其调节过程中的影响。结果表明 ,福尔马林痛刺激后 ,刺激侧脊髓背角出现大量Fos免疫样阳性神经元 ,其中部分为FLI/NOS双标记神经元 ;痛刺激之前或之后给予异丙酚 ,背角各层FLI神经元和FLI/NOS双标记神经元的数量均显著减少 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;单纯腹腔注射异丙酚或生理盐水 ,脊髓未见或偶见FLI神经元。上述结果提示

淫羊藿苷通过PI3K/AKT-eNOS信号途径促进大鼠骨髓基质细胞的成骨性分化

目的研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)促进体外培养大鼠骨髓基质细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的信号传导机制。方法贴壁分离法培养rBMSCs,传至第2代后用流式法鉴定细胞纯度并用于机制研究。细胞铺满皿底后分为ICA组(1×10-5mol.L-1)、LY294002组(5×10-5 mol.L-1)、ICA+LY294002组和空白对照组。不同处理24 h后分别用Real-time PCR法检测ALP、eNOS和iNOS的基因表达水平,用Western blot法检测p-AKT、eNOS和iNOS蛋白表达量,同时测定TNOS、iNOS活性和NO生成量。结果基因表达和蛋白质检测结果均显示,10-5mol.L-1ICA明显提高rBMSCs的ALP表达水平(P<0.01),PI3K的特异性阻断剂LY294002可抑制ICA对ALP的提高作用,亦明显降低p-AKT的表达水平。ICA可提高rBMSCs的eNOS和iNOS表达水平,但LY294002只能抑制eNOS的增加,对iNOS无影响。TNOS和NO与eNOS和ALP的变化趋势一致,iNOS活性不受LY294002的影响。结论 ICA通过PI3K/AKT-eNOS途径促进rBMSCs的成骨性分化。

从NO、NOS变化探讨瓜蒌薤白白酒汤对心肌缺血再灌注损伤的防治作用

目的:研究瓜蒌薤白白酒汤(LGXD)对家兔心肌缺血再灌注损伤模型血清中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,并探讨其对再灌注损伤的可能性保护机制。方法:采用结扎左冠状动脉前降支法复制心肌缺血再灌注损伤模型,分离血清检测血清中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性,摘取左室心肌做常规病理切片。结果:与假手术组比较,模型组NO含量和NOS活性均显著增高,与模型组比较,高、低剂量药物组NO含量和NOS活性均降低,低剂量组比高剂量组低,病理结果显示低剂量组优于高剂量组。结论:瓜蒌薤白白酒汤对家兔心肌缺血再灌注损伤的心肌有保护作用,其机制可能与抑制NOS的活性,减少NO的过量产生有关,且低剂量药物组疗效优于高剂量组。

消瘀片对粥样硬化兔血管壁组织ET-1mRNA和NOSmRNA表达的影响

采用原位杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法，观察消瘀片治疗１６周动脉粥样硬化免后对血管壁组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ和ＮＯＳｍＲＮＡ表达的影响。结果显示，粥样硬化组的ＥＴ－１ｍＲＮＡ和ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达较多，而 ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较少。使用消瘀片后，动脉壁组织中的 ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达明显减少，提示血浆和血管壁组织中的 ＥＴ－１减少是由于 ＥＴ－１ｍＲＮＡ转录水平降低所致。消瘀片对血管壁组织中ｉＮＯＳｍＲＮＡ和ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达影响是不同的，它可降低ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达，增加ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达。表明消瘀片可通过调节 ＮＯＳ不同亚型基因的表达而消减动脉粥样硬化病变的程度。

硒中毒雏鸭血清和组织中NO含量及NOS活性的研究

为了探讨硒中毒的毒理机制 ,选择健康雏鸭作实验动物 ,通过饲料中添加 8mg·kg-1的硒 ,复制雏鸭硒中毒模型 ,应用硝酸还原酶法测定血清和组织中NO含量及NOS活性的动态变化。试验结果表明 ,与对照组相比 ,中毒组雏鸭血清和组织中NO含量及NOS活性均显著升高 (P <0 .0 5 ) ,且有时间—效应关系。从而提示硒中毒可诱导NOS活性增强 ,致使机体内NO含量升高 ,机体内源性NO水平过高 ,则产生细胞毒性作用 ,进而对机体的物质和能量代谢及组织细胞的结构和功能产生一系列的损伤。这可能是硒中毒的毒理机制之一。

VEGF、b-FGF、NOS_2和NOS_3在非小细胞肺癌的表达及其临床意义

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b -FGF)、一氧化氮合酶 2 (诱生型 ,NOS2 )、一氧化氮合酶 3(内皮型 ,NOS3)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及其与肿瘤血管形成和淋巴结转移的关系。方法 :用免疫组化 (S -P法 )染色技术对 95例NSCLC石腊组织标本的VEGF、b -FGF、NOS2 和NOS3及肿瘤内微血管密度 (IMVD)进行检测和分析。结果 :VEGF、b FGF表达与TNM分期、IMVD及淋巴结转移有关 (P<0 .0 5) ,两者共表达与IMVD有关 (P <0 .0 1 )。NOS3与组织学分型、IMVD和淋巴结转移有关 (P <0 .0 5) ;NOS2与IMVD有关 (P <0 .0 5)。相关分析显示促血管形成因子 (VEGF、b FGF)与一氧化氮合酶 (NOS2 、NOS3)的表达呈正相关 (r=0 .30 1 8,P <0 .0 5)。结论 :VEGF和b FGF在促进血管形成和促进肿瘤转移方面可能起到协同作用 ,并且有NO的参与 ;VEGF、b FGF、NOS2

四种复方中药和黄芪多糖对鲫鱼生长、组织中NO含量与NOS活性的影响

将四种复方中药(分别编号为AB、AH、CD、IV)和黄芪多糖(APS)作为添加剂添加入基础料饲料中,连续饲喂1龄鲫鱼45d,于第45d及第60d分别采样,测定鱼体重和肝脏、脾脏、肾脏中一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性,研究中药复方对鲫鱼生长及免疫功能的影响。结果显示:45d时称量体重,复方AH、复方AB两组增重率显著高于对照组及其他三种中药复方组,饲喂60d对照组及所有中药组增重率均无显著差距。投喂45d,方剂AB显著降低鲫鱼肝脏、肾脏中NO的含量,五种中药方剂均能提高鲫鱼脾脏中NO含量。AH、AB、IV、APS四种方剂饲喂的鲫鱼肝脏中NOS含量明显高于对照组。投喂60天,五种中药方剂饲喂的鲫鱼脾脏中NO含量均高于对照组,除IV外,均差异显著。肝脏中NOS含量各组无显著差异,脾脏中IV组TNOS含量最高,APS组iNOS含量最高。肾脏中APS方剂组的iNOS含量显著高于对照组。

针灸内关预处理对心肌缺血再灌注损伤兔血清NO、NOS及腺苷含量的影响

目的观察针灸内关预处理对心肌缺血再灌注损伤兔血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及腺苷含量的影响。方法将32只新西兰大耳白兔随机分为假手术组、缺血再灌注组、电针组和艾灸组。采用结扎左冠状动脉前降支40 min再灌注60 min的方法,建立心肌缺血再灌注损伤模型。假手术组于末次捆绑结束48 h后开胸,穿线静置40 min,拔线,继续静置60 min后取材;缺血再灌注组于末次捆绑结束后48 min行缺血再灌注后取材,电针组和艾灸组分别在针刺、艾灸内关穴之后48 h再行缺血再灌注。高效液相色谱法测定血清腺苷含量,采用硝酸还原酶化学比色法检测血清NO、NOS的含量。结果缺血再灌注组血清NO、NOS及腺苷的含量较假手术组相比明显下降(P<0.05);电针组与艾灸组血清NO、NOS及腺苷的含量较缺血再灌注模型组相比均明显升高(P<0.01),而电针组与艾灸组两组间无明显差异(P>0.05)。结论电针、艾灸内关穴预处理可以提高兔血清中NO、NOS及腺苷的含量,即可以增强延迟性保护机制的细胞信号转导通路中触发物质NO、NOS、腺苷的活性和含量,表明了针灸预处理内关穴可以在48 h这一延迟时相产生针对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。

NO含量和NOS活性在兔软骨终板退变过程中的变化

目的研究一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶( NOS)在软骨终板退变中的作用。方法将24只新西兰白兔分为实验组(n=12)和对照组(n=12),实验组通过切除兔腰椎棘上、棘间韧带,咬除部分关节突关节,分离椎旁肌造成腰椎软骨终板退变模型,分别于术后12、24、36周对腰椎摄X线片,并检测不同时间段的软骨终板中NO含量和NOS活性。结果X线片示软骨终板随时间的延长而逐渐钙化,且实验组较对照组钙化明显;实验组各组的NO含量及NOS活性较对照组增多(P<0.05),而24周与36周实验组间NO含量及NOS活性差异不明显(P>0.05)。结论NO和NOS在软骨终板退变过程中,其含量相应增加,提示NO可能在软骨终板退变的形成和发展中起重要作用。

肾阳虚大鼠下丘脑神经元型NOS mRNA表达及补肾药的调整作用

目的 :研究补肾中药对肾阳虚大鼠下丘脑组织中NO cAMP信号传导系统的影响 ,以探讨肾阳虚的发病机制。方法 :用醋酸可的松肌肉注射法建立大鼠肾阳虚模型 ,采用放射免疫分析法测定cGMP含量 ,用反转录PCR半定量法测定nNOSmRNA水平 ,观察补肾药复方对肾阳虚大鼠血清NO水平及下丘脑组织中NO、NOS活性 ,nNOSmRNA水平和cGMP水平的影响。结果 :肾阳虚大鼠血清和下丘脑组织NO水平较对照组分别增加 175%和 2 2 3% ,下丘脑组织NOS活性升高 ,nNOS表达增强 ,血清和下丘脑组织cGMP水平升高。补肾药对上述指标有不同程度的下调。肾阳虚证时下丘脑NOS cGMP信号传导系统作用增强 ,补肾药对其具有调整作用。结论 :实验结果揭示NO cAMP系统在肾阳虚证发病机制中起一定作用 。

补充NO前体L-Arg对耐力训练大鼠骨骼肌NOS基因表达的影响

目的 :(1)观察耐力运动和补充外源性NO前体左旋精氨酸 (L -Arg)对骨骼肌不同亚型NOS基因表达的影响 ;(2 )观察耐力运动和补充外源性NO前体L -Arg对骨骼肌NO生成能力的影响。方法 :将 30只SD大鼠随机分成安静组、运动对照组和运动用药组 ,进行 4周跑台耐力训练和一次力竭运动 ,其中运动用药组每天给予 4 0mg每千克体重L -Arg灌胃 ,测定力竭运动后即刻大鼠股外肌两种亚型NOS基因表达水平、NOS活性和NO浓度的变化。结果 :(1)运动大鼠股外肌cNOS与iNOS基因表达均显著升高 ,但运动用药组与运动对照组无显著差异 ;(2 )运动大鼠股外肌NOS活性与安静组相比均有升高 ,但无显著性意义。以上结果表明 :(1)耐力性运动能够使大鼠骨骼肌中的cNOS与iNOS基因表达上调 ,小剂量的外源性NO前体L -精氨酸对其表达的调节无明显影响 ;(2 )小剂量外源性L

施万细胞和MK801对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响

目的 观察单独或联合应用施万细胞和MK80 1对大鼠脊髓半横切后受损伤的背核神经元存活及其表达NOS的影响。 方法 应用细胞培养、免疫组织化学、核荧光标记、荧光逆行追踪和酶组织化学等技术。 结果 T11脊髓半横切后 15d ,生理盐水对照组的L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数量比未损伤侧减少 ,其中胞体面积 >4 0 0 μm2 的神经元明显减少 ,而且部分存活的神经元NOS活性增高 ,背核面积及神经元胞体面积缩小。施万细胞组、MK80 1组、施万细胞与MK80 1联合组的L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数量则比术后同期对照大鼠增多 ,胞体面积 >4 0 0 μm2 神经元的存活数量显著增多。施万细胞与MK80 1联合组作用明显。MK80 1组存活的神经元中NOS活性明显减弱 ,且能阻止背核及其神经元胞体的面积的缩小。 结论 施万细胞与MK80 1均可促进轴突被切断的背核神经元的存活 ,两者有协同作用 ,且MK80