电针对脑缺血再灌注小鼠脑组织NOX2/gp91phox表达的影响

目的:探讨电针对脑缺血再灌注(I/R)损伤后的神经保护机制,明确电针对脑损伤后氧化应激的抑制作用。方法:采用小鼠大脑中动脉闭塞模型制备脑局灶性缺血1 h再灌注3、24、48 h模型。每组又分为模型组、电针组、药物组、gp91phox基因敲除组(下文简称基因组),另设同时段假手术组。以神经功能缺损评分和局灶脑血流(rCBF)变化为造模成功和效应指标,并RT-PCR检测NOX2/gp91phox基因在小鼠脑组织的表达情况,光泽精增强发光法检测NOX活性。结果:①神经行为学评分:造模各组均有不同程度的缺损表现,再灌注即刻缺损情况较再灌注干预后严重,基因组灌注即刻评分明显低于模型组(P<0.05),与模型组比较,灌注后3、24、48 h基因组、药物组、电针组神经行为学评分均明显降低(P<0.05)。②rCBF:各造模组rCBF明显减少,灌注后3、24、48 h各组rCBF均有增加,药物、电针组比模型组升高明显(P<0.05)。③NOX活性:模型组各时相之间无明显差异,基因组NOX活性无明显表达(P<0.01),药物组、电针组比模型组的同时相均有明显下降(P<0.01),药物和电针组的组间比较无明显差异。④NOX2/gp91phox基因表达:模型组各时相之间无明显差异,基因组无蛋白表达,与各组比较均有显著差异(P<0.01),药物组、电针组比模型组的同时相均有明显下降(P<0.01),药物组和电针组的组间比较无明显差异。结论:通过与敲除gp91phox基因组的小鼠相比较,电针“百会”“大椎”穴位可以通过抑制NOX2/gp91phox表达,达到抑制I/R后小鼠的氧化应激损伤效果,发挥保护脑组织的作用。

NOX2抑制剂gp91 ds-tat缓解瓦斯爆炸引起的大鼠肺损伤

目的研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX2)抑制剂gp91 ds-tat对瓦斯爆炸肺损伤大鼠的影响。方法90只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、瓦斯爆炸肺损伤模型组、gp91 ds-tat治疗组,每组30只。将模型组和治疗组大鼠放置于巷道距离起爆点240 m处。爆炸后立即一次性通过腹腔注射给予治疗组大鼠gp91 ds-tat(1 mg/kg)。3组大鼠分别于治疗后24 h、72 h、7 d(每组每次10只)麻醉后腹主动脉取血并处死,取肺组织包埋用于制作切片样品;冷冻肺组织用于三磷酸腺苷(ATP)、α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)、线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)、磷酸果糖激酶(PFK)检测;采用蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织NOX2、过氧化氢酶(CAT)及线粒体功能相关蛋白基因的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠出现肺脏出血、塌陷,CAT、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、线粒体关键转录分子A(TFAM)表达降低(P<0.05),而NOX2表达升高(P<0.05)。与模型组相比,gp91 ds-tat治疗组大鼠的α-KGDH、ICDHm、PFK的活力及ATP含量升高(P<0.05),CAT、TFAM、mRNA相对表达水平提高(P<0.05),而NOX2的表达降低(P<0.05)。结论gp91 ds-tat可能通过调控肺内的能量代谢紊乱和氧化应激状态减轻瓦斯爆炸所致大鼠肺损伤的程度,其作用可能与抑制NOX2的表达相关。

偏硅酸钠对高脂血症家兔外周血白细胞活性氧生成的影响

目的观察偏硅酸钠(Na2SiO3)对高脂血症家兔外周血白细胞活性氧(ROS)生成的影响,为其抗动脉粥样硬化(AS)作用提供进一步支持。方法 12只健康雄性新西兰大白兔随机分为正常对照组,高脂血症组,喂硅组,每组4只。分离各组家兔外周血白细胞后检测加或不加脂多糖(LPS)和N-甲酰-甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸(f MLP)条件下的ROS。以RT-PCR的方法检测CD36,TLR4,TLR2及gp91phox m RNA的表达。结果高脂血症组和喂硅组血浆胆固醇均显著高于正常对照组,但两组间无显著差异(P>0.05),高脂血症组白细胞ROS的生成量比正常对照组增加(P<0.01),喂硅组比高脂血症组ROS生成量减少(P<0.01),高脂血症组单个核细胞及中性粒细胞CD36、TLR4、TLR2和gp91phox的m RNA均比正常对照组显著增加(P<0.01),喂硅组这四种基因的m RNA均显著下调(P<0.01)。结论 Na2SiO3对LPS和f MLP刺激的高脂血症家兔外周血白细胞产生ROS有抑制作用;饮用Na2SiO3可以下调高脂血症家兔外周血单个核细胞和中性粒细胞CD36、TLR4、TLR2及gp91phox m RNA水平,Na2SiO3的这种作用不通过降低血脂而实现。