GLP-1通过NOX4信号通路拮抗AGE诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤

【目的】探讨NOX4信号通路在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)拮抗糖基化终末产物(AGE)诱导的内皮细胞氧化损伤的作用机制。【方法】实验组分为对照组、AGE组、AGE+GLP-1组、AGE+NOX4 si RNA组及AGE+阴性si RNA组,RTPCR检测NOX4 m RNA表达,Western Blotting技术检测NOX4蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率、ROS生成水平。【结果】与对照组相比,AGE可诱导细胞NOX4蛋白表达(P=0.001)及NOX4 m RNA表达(P<0.05)明显增高;加入GLP-1后,增高的NOX4蛋白(P=0.003)及NOX4 m RNA(P<0.05)明显下降。与AGE组相比,NOX4 si RNA可抑制AGE诱导的ROS生成(P=0.011)、细胞凋亡(P<0.05);阴性si RNA对AGE诱导的ROS生成(P=0.958)、细胞凋亡(P=0.169)无明显影响。【结论】GLP-1至少部分通过抑制NOX4蛋白表达拮抗AGE诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤。

香草乙酮静注对大鼠肺缺血再灌注损伤的预防作用观察

目的观察香草乙酮(APO)对大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)的预防作用。方法将24只SD大鼠随机分为APO组、LIRI组、假手术(SO)组各8只,APO组在造模前30 min静注50 mg/kg的APO,APO组和LIRI组采用在体左肺门夹闭60 min后再灌注120 min的方法制备LIRI模型,SO组仅游离左肺门、不夹闭。各组再灌注后120min剖杀取材。切取约1/3新鲜左肺组织,计算湿干比(W/D);另取肺组织的部分石蜡包埋切片,经HE染色后在光学显微镜下观察其病理改变并进行肺病理评分;采用DHE法检测肺组织活性氧自由基(ROS),硫代巴比妥酸法和水溶性四唑盐-1法检测肺组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);免疫荧光法检测肺组织MPO、TNF-α、IL-1β、IL-6。免疫组化法检测肺组织NAPDH氧化酶2(NOX2)、NAPDH氧化酶4(NOX4)蛋白。结果 SO组肺间质及肺泡结构清晰、完整,未见明显充血、水肿及炎性浸润;LIRI组肺间质水肿增宽,炎症细胞浸润,肺泡毛细血管扩张,肺泡内可见较多红细胞渗出,损伤明显;APO组的上述改变减轻。与SO组比较,APO组及LIRI组W/D、病理学评分、ROS平均荧光强度、MDA浓度、MPO阳性细胞数和TNF-α、IL-1β、IL-6平均荧光强度升高,SOD活性降低(P均<0. 05);与LIRI组比较,APO组W/D、病理学评分、ROS平均荧光强度、MDA浓度、MPO阳性细胞数和TNF-α、IL-1β、IL-6平均荧光强度降低,SOD活性升高(P均<0. 05)。与SO组比较,APO组和LIRI组NOX2、NOX4蛋白IOD值升高(P均<0. 05);与LIRI组比较,APO组NOX2、NOX4蛋白IOD值降低(P均<0. 05)。结论 APO能够有效预防大鼠LIRI,其机制可能是抑制肺组织NOX2、NOX4蛋白表达。

血管紧张素Ⅱ在肺纤维化进展中的作用机制研究

目的探究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在肺纤维化进展中的作用机制。方法随机将30只清洁级雄性大鼠分为3组,每组10只,分别为空白对照组、模型组、AngⅡ组。空白对照组经气管滴入0.9%氯化钠溶液200 ml,模型组气管滴入博来霉素5 mg/kg,AngⅡ组气管滴入博来霉素同时皮下埋入AngⅡ微量泵,以25μg·kg-1·h-1的速度持续泵入AngⅡ,用药4周后取肺组织进行NOX4、NALP3免疫荧光染色,采用免疫印迹法检测相关蛋白的表达水平。结果荧光免疫染色可见,与空白对照组相比,模型组大鼠肺组织中NOX4蛋白强度明显增加,AngⅡ组大鼠的肺纤维化程度较模型组进一步加重,NOX4强度明显增加,免疫印迹试验结果显示,NOX4蛋白表达为AngⅡ组(0.76±0.14)>模型组(0.58±0.19)>空白对照组(0.18±0.07),组间差异有统计学意义(P<0.05);荧光免疫染色可见,与空白对照组相比,模型组大鼠肺组织中NALP3染色细胞明显增多,强度增加,AngⅡ组大鼠的肺纤维化程度较模型组进一步加重,NALP3强度明显增加,免疫印迹试验结果显示,NALP3蛋白表达为AngⅡ组(0.50±0.04)>模型组(0.25±0.03)>空白对照组(0.11±0.01),组间差异统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ能够激活NOX4、NALP3信号通路,从而加重大鼠肺纤维化进程。