基于TLR4/MyD88/NF-κB信号轴探讨闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎的影响

目的本研究旨在探讨闹羊花毒素Ⅲ调控TLR4、MyD88和NF-κB的机制,以及闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的影响。方法RA大鼠模型通过Ⅱ型胶原诱导构建。随机将Wistar大鼠分成6组(n=8):假手术组(Sham组)、RA模型组(Model组)、阳性药物雷公藤组[TWG组,50 mg·(kg·d)^(-1)]、闹羊花毒素Ⅲ低剂量组[R-ⅢLo组,0.06 mg·(kg·d)^(-1)]、中剂量[R-ⅢMi组,0.12 mg·(kg·d)^(-1)]和高剂量组[R-ⅢHi组,0.24 mg·(kg·d)^(-1)]。测定各组大鼠的关节炎指数(arthritis index,AI);采用HE染色、ELISA、Western blot和RT-qPCR检测闹羊花毒素Ⅲ对TLR4/MyD88/NF-κB信号轴及RA的影响。结果与Model组比较,闹羊花毒素Ⅲ处理显著降低了RA大鼠的AI评分(P<0.05)。闹羊花毒素Ⅲ对滑膜组织的恶性增生和炎症细胞浸润有明显的抑制作用。与Model组比,闹羊花毒素Ⅲ各剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平降低且呈浓度依赖性(P<0.05)。与TWG组比,R-ⅢLo和R-ⅢMi组的。TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平升高(P<0.05),而R-ⅢHi组无显著差异(P>0.05)。结论闹羊花毒素Ⅲ可以通过下调TLR4、MyD88、NF-κB因子的表达水平来改善RA。本研究为利用闹羊花毒素Ⅲ治疗RA提供了一定的实验基础。

水飞蓟素通过共同抑制TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路减轻糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的研究

目的:探讨水飞蓟素通过共同抑制Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)和肿瘤坏死因子α/活性氧簇/P38丝裂原活化蛋白激酶(TNF-α/ROS/P38MAPK)通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏损伤的机制。方法:选取健康SD大鼠50只,按随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量水飞蓟素组、中剂量水飞蓟素组、高剂量水飞蓟素组,每组10只。建模成功并治疗8周后,生化分析仪测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys-C)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、24 h尿蛋白(UTP)水平;计算肾脏指数;试剂盒检测各组大鼠肾组织丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)水平;RT-PCR检测各组大鼠TLR4,NF-κB,TNF-α和P38MAPK等mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,模型组体质量、T-AOC均降低(P<0.05),肾脏指数和FBG,Scr,BUN,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均升高(P<0.05)。低、中、高剂量水飞蓟素组体质量、T-AOC水平均低于对照组,且均高于模型组(P<0.05);低、中、高剂量水飞蓟素组肾脏指数和FBG,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均高于对照组,且均低于模型组(P<0.05);低、中剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均高于对照组,且低于模型组(P<0.05);高剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均低于模型组(P<0.05),高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:水飞蓟素可调控TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路,可通过抑制其激活减轻氧化应激、减轻DN大鼠的肾脏损伤。

黑逍遥散调控NOX2/ROS/NF-κB信号通路干预AD模型小鼠小胶质细胞极化

基于氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)/活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)/核转录因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)信号通路探究黑逍遥散对APP/PS1双转基因小鼠小胶质细胞(microglia,MG)极化的影响及作用机制。4月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠50只,随机分为模型组、MCC950组(10 mg·kg-1)及黑逍遥散低、中、高剂量组(6.45、12.89、25.78 g·kg-1),同月龄、同系种雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分为空白组、空白灌胃干预组和空白腹腔注射组,各组给药干预90 d。Morris水迷宫检测学习认知能力,尼氏染色和透射电镜观察海马神经元病理形态和超微结构,免疫荧光检测小胶质细胞M1型标志物CD16/32+/Iba-1^(+)、M2型标志物CD206^(+)/Iba-1^(+)的阳性表达及海马ROS表达情况,比色法检测海马丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,酶联免疫吸附法检测海马白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子含量,蛋白免疫印迹检测海马β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、Iba-1、CD16/32、CD206、NOX2、NF-κB、p-NF-κB、核因子κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor alpha,IκBα)和p-IKBα蛋白表达。结果显示,与空白组比较,模型组小鼠目标象限运动距离、逃避潜伏期显著延长(P<0.01),目标象限滞留时间及百分比显著缩短(P<0.01);神经元细胞排列紊乱,出现肿胀、核消失或偏置,细胞数量明显减少,尼氏小体溶解甚至消失,胞质呈透亮区域;细胞膜出现缺损、皱缩,形态异常,胞质中少见细胞器,线粒体明显肿大,数量减少;小胶质细胞M1型标志物CD16/32+/Iba-1^(+)显著升高(P<0.01),M2型标志物CD206^(+)/Iba-1^(+)显著降低(P<0.01),ROS活性和MDA含量显著升高(P<0.01),SOD水平显著降低(P<0.01),炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α含量显著升高(P<0.01);Aβ、CD16/32、Iba-1、NOX2、NF-κB和IKBα蛋白表达及磷酸化显著升高(P<0.01),CD206显著降低(P<0.01)。空白组与空白灌胃干预组、空白腹腔注射组差异无统计学意义。黑逍遥散干预后,各剂量组小鼠目标象限运动距离和逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),目标象限滞留时间及百分比显著延长(P<0.01);细胞数量明显增多,排列较为整齐,肿胀明显缓解,尼氏小体增加;细胞形态较为规则,胞膜较为完整,线粒体肿胀明显缓解,但仍有部分内质网轻度扩张;M1型标志物CD16/32+/Iba-1^(+)显著降低(P<0.05或P<0.01),M2型标志物CD206^(+)/Iba-1^(+)显著升高(P<0.01),ROS活性、MDA含量显著降低(P<0.01),SOD水平显著升高(P<0.01),炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α含量显著降低(P<0.01);Aβ、CD16/32、Iba-1、NOX2、NF-κB、IKBα蛋白及其磷酸化显著降低(P<0.01),CD206显著升高(P<0.01)。综上所述,黑逍遥散能够缓解神经元损伤,提高APP/PS1小鼠学习记忆能力,作用机制可能与抑制NOX2/ROS/NF-κB信号通路,调节MG极化,增加M2型表达,抑制M1型表达,减少炎症因子释放有关。

二陈汤合桃红四物汤对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠主动脉Nox4/NF-κB/HIF-1α信号通路作用研究

目的:观察二陈汤合桃红四物汤对ApoE基因敲除AS小鼠主动脉Nox4/NF-κB/HIF-1α信号通路的干预作用。方法:50只ApoE-/-小鼠随机分成模型组、中药低、中、高剂量组、阳性对照组,10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。模型组和各治疗组给予高脂饲料喂养,空白组给予普通饲料喂养。于第9周开始,中药低、中、高剂量组、阳性对照组分别给予对应药物治疗4周。Western Blot法检测主动脉Nox4、NK-κB p65蛋白表达水平,RT-PCR法检测主动脉VEGF、MMP-9、HIF-1αmRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组小鼠主动脉Nox4、NF-κB p65蛋白表达水平和VEGF、MMP-9、HIF1-αmRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组小鼠主动脉Nox4、NF-κB p65蛋白表达水平和VEGF、MMP-9、HIF1-αmRNA表达水平有不同程度改善,以中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组效果较为明显(P<0.05,P<0.01)。结论:二陈汤合桃红四物汤抗AS的作用机制可能是通过抑制Nox4/NF-κB/HIF-1α信号通路实现的。

补肾活血汤防治骨质疏松症的作用机制

目的 基于TLR4/MyD88/NF-κB信号轴揭示补肾活血汤防治骨质疏松症的作用。方法 40只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血汤组以及阿仑膦酸钠组,每组10只,除假手术组外,其余各组造模后,补肾活血汤组予以补肾活血汤10 mL/(kg·d)灌胃,阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠片7.35 mg/(kg·d)灌胃,假手术组与模型组给予等量生理盐水灌胃,干预12周后取得大鼠骨组织,分析大鼠骨密度(bone mineral density, BMD)、骨矿含量、血清Ca^(2+)、P水平变化;采用ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量;采用qRT-PCR法检测骨组织中的TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表达水平;采用Western blot法检测骨组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平;采用骨组织转录组学检测TLR4、MyD88、NF-κB表达水平。结果 (1)补肾活血汤组中大鼠骨组织骨矿含量以及血清Ca^(2+)、P水平较模型组均升高(P<0.05);(2)补肾活血汤组大鼠股骨和腰椎BMD含量较模型组均明显升高(P<0.01);(3)与模型组比较,补肾活血汤组血清IL-6、IL-1β、TNF-a含量降低(P<0.05);(4)与模型组比较,补肾活血汤组TLR4、MyD88、NF-κBmRNA表达量降低(P<0.05);(5)与模型组比较,补肾活血汤组TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量降低(P<0.05);(6)骨组织转录组学发现补肾活血汤组TLR4、MyD88、NF-κB表达量降低(P<0.05)。结论补肾活血汤能够通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号轴来防治骨质疏松症。

替格瑞洛改善心肌缺血再灌注损伤的机制

目的观察替格瑞洛对心肌缺血再灌注损伤是否有抗氧化应激、抗炎的作用,以探讨替格瑞洛下调炎症因子及氧化应激水平的分子作用机制。方法建立SD大鼠缺血再灌注损伤模型,分为4组(n=15):正常组、缺血再灌注损伤+生理盐水组、缺血再灌注损伤+氯吡格雷组、缺血再灌注损伤+替格瑞洛组,术前7 d分别以生理盐水、替格瑞洛、氯吡格雷灌胃,术后7 d内眦取血检测炎症相关指标:IL-6、IL-1β、TNF-α;术后28 d取心脏组织,并检测相关指标:心肌纤维化Masson染色;Western blot:NOX4、Phospho-IKK、Phospho-p65和IκBα;FRAP法测定血浆中总抗氧化水平。结果SD大鼠在手术前连续7 d服用替格瑞洛后,IL-6、IL-1β、TNF-α、NOX4等表达均有不同程度下降,同时心肌纤维化程度也有不同程度的减轻;NF-κB信号通路相关激活因子Phospho-IKK、Phospho-p65等表达有不同程度的减少,NF-κB信号通路相关抑制因子IκBα的表达有不同程度的增加。结论替格瑞洛可能通过抑制NOX4/ROS/NF-κB信号通路轴下调炎症因子及氧化应激水平,从而改善心肌缺血再灌注损伤。