猪博卡病毒NP1基因的克隆与原核表达

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒。本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为46 kDa的融合蛋白,蛋白表达量较高,而且蛋白以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western Blot结果显示,表达的NP1蛋白能与His抗体发生特异性的免疫反应,表明原核表达的NP1蛋白具有良好的反应原性。

NP1和GAFP双价抗病基因植物表达载体的构建

防御素对病毒、细菌和真菌都具有一定的抗性。天麻抗真菌蛋白可抑制多种真菌的生长。笔者利用DNA重组技术,将这两个抗病机制不同、抗菌谱均较广的抗病基因(天麻抗真菌蛋白GAFP和防御素NP1基因)构建在一个植物表达载体pBinGAFP-NP1上,为一次性地获得含双价抗病基因的植株奠定了基础。

猪博卡病毒非结构蛋白NP1基因的克隆及基因分型研究

为明确猪博卡病毒福建株非结构蛋白NP1的特征,本研究根据GenBank中登录的非结构蛋白NP1的基因特征,设计特异性引物从一份患有断奶仔猪多系统衰竭综合征的仔猪肺脏和淋巴结基因组DNA中扩增到猪博卡病毒非结构蛋白NP1的全长基因序列。测序结果显示,本试验克隆的猪博卡病毒非结构蛋白NP1的基因全长为675bp,编码有224个氨基酸,其与美国株猪博卡病毒(OH110株)核苷酸同源性最高,达97.3%,但与美国株猪博卡病毒(IN109-1株)核苷酸同源性仅为81.8%;与英国北爱尔兰野猪博卡病毒(F41株和64-1株)同源性均不高,分别为82.5%和80.9%;与猪博卡病毒(H18株)核苷酸同源性最低,仅为43.8%。通过对猪博卡病毒代表株进行核苷酸同源性比对分析发现,猪博卡病毒存在3个主要的基因群,不同基因群非结构蛋白NP1的核苷酸同源性均低于50.0%。结果提示需对猪博卡病毒进行明确的划分,不同来源的猪博卡病毒可细分为3个明显的代表种。

犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价。采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性。结果:成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1∶400 000。Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性。结论:本研究利用原核表达的MVC GST-NP1融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础。

猪博卡病毒NP1基因特异性的PCR方法建立及应用

该研究根据Genbank公布的猪博卡病毒Porcine bocavirus,PBoV的核苷酸序列,在其NP1保守区域设计一对特异性引物,建立一种能扩增多种猪博卡病毒亚型的PCR检测方法,并进行特异性试验,敏感性试验,重复性试验及可靠性检测.结果显示:所建立的PCR检测方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型无交叉反应;敏感度可以检测到58pg/μL;经3次重复检测,结果一致,重复性好;对阳性产物测序,与Genbank公布的猪博卡病毒NP1序列同源性在97.3%以上,可靠性强.用建立的PCR方法对2011年重庆部分地区猪场的266份育肥猪血清样本进行检测,结果45份为猪博卡病毒阳性,证明了在重庆地区育肥猪中存在PBoV感染的情况.

猪博卡病毒(重庆株)NP1部分基因的克隆测序及生物信息学分析

通过设计特异性引物建立基于猪博卡病毒（Porcine Bocavivus,PBoV）NP1基因的特异性PCR方法,从重庆地区猪血液中扩增出PBoV-NP1的部分基因片段,进行基因测序,并与GenBank公布的PBoV、HBoV及PPV基因序列进行生物信息学分析.结果显示：本次试验克隆得到的PBoV重庆株NP1部分基因片段大小为257 bp,与已公布的PBoV-NP1基因的同源性为97.3％～100％;重庆株与PBoV瑞典株、PBoV中国株属同一进化分支,且PBoV重庆株NP1基因与PBoV瑞典株NP1基因亲缘性非常接近;PBoV重庆株NP1基因与GenBank公布的猪PBoV-NP1和1个人HBoV st1聚在博卡病毒一大分支,与PPV分属两大分支,而HBoVst1株又单独形成另一簇.这表明,PBoV重庆毒株与国外毒株的亲缘性非常接近,推测重庆地区猪群中感染的PBoV可能是通过引进或者进口国外动物性产品而传播感染猪群.

从认知图景看“NP1+(的)+NP2”的语义理解

关于“NP1+(的)+NP2”的语义理解问题,学界从不同的理论视角进行过很多研究,但尚有进一步探讨的余地。本文从认知图景视角审视相关问题,主要观点是,对该结构的理解涉及相关认知图景要素的激活,特别是中心认知图景;不同认知图景激活的要素之间的相容性以及要素自身在认知上的凸显性决定了我们对“NP1+(的)+NP2”结构的语义理解。同时指出,当充当修饰语的直接语义成分不止一个时,不同修饰语与中心语之间的排列顺序依据它们与中心语语义关系的亲疏而定。

领属性“NP1的NP2”结构的组合理据——附论领事话题句及其谓语动词的语义类型

领属性“NP1的NP2”结构的组合理据可以分为固有、配置、呈现、制作、拣选、经历和称呼等7种类型，其中各种类型还可以根据NP1和NP2的不同特征离析出不同的语义关系类型。“NP1的NP2”常常以整体充当“领属宾语”。受语用驱使，“领属宾语”的领事可以置于句首构成“领事话题句”，而领事话题和属事宾语之间不同的理据类型一定程度上规定了领事话题句中谓语动词的语义类型。

NP1+Vi+NP2句式的经验意义分析

通过运用系统功能语言学的概念功能理论对NP1+Vi+NP2句式进行分析,发现该句式主要出现在物质过程、行为过程、心理过程和存在过程中。该句式也是概念隐喻的一种表达形式,主要体现在名词化和动词化的隐喻上,有时会把物质过程隐喻为心理过程。

颞叶癫痫大鼠海马CA_1区Sema 3C、Np1的表达变化研究

目的探讨颞叶癫痫的发病机制。方法取健康雄性SD大鼠制成颞叶癫痫模型,用免疫组织化学和原位杂交技术对匹罗卡品致痫后不同时间点CA_1区的Sema3C mRNA、Np1 mRNA和蛋白表达进行分析。结果在匹罗卡品致痫后7d,实验组CA_1区Sema3C、Np1的表达明显低于对照组(P＜0．01)。结论CA_1区Sema3C、Np1的表达下调可能参与了海马CA_1区内的轴突出芽机制。

人博卡病毒1型主要抗原NS1、NP1及VP1/2的抗体制备及应用

人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)是全球流行的重要呼吸道病毒,其研究尚处于初期阶段。通过原核表达的方式对HBoV1主要抗原NS1、NP1、VP1/2进行蛋白表达,通过纯化、免疫小鼠成功获得3种蛋白的抗体血清,通过ELISA评价了抗体对相应蛋白抗原及临床HBoV1阳性样品的效价,并将所制备的抗体成功用于HBoV1广州株GU338055反向遗传系统的NS1、NP1、VP1/2的免疫荧光研究。结果表明,所制备抗体在1∶50稀释度时A_(450)值对阴性对照约有4倍提升,为HBoV1后续深入研究提供了重要工具,具有重要意义。

“NP1像VP\AP一样(VP\AP)”句式的辞格规约性考察

"NP1像……一样"句式,是比喻句的常用格式,根据其成句的结构类型,大体可分为三类:NP1像NP2一样(VP|AP)、NP1(VP)像NP2一样(AP)、NP1像VP\AP一样(VP\AP),前两类是典型的比喻句,而第三类情况复杂。根据比喻辞格成活必备三元素的特征,对NP1像VP\AP一样(VP\AP)的本体、喻体进行探寻并在此基础上,从表层形式、中层语义、深层理论三个角度考察了该句式比喻辞格的规约性,为判定比喻辞格提出了一个开放性的理论。

“给”字结构NP1+V+给+NP2+NP3象征关系研究

在认知语法的理论框架下研究"给"字结构"NP1+V+给+NP2+NP3"的象征关系发现,"给"字结构"NP1+V+给+NP2+NP3"和其语义结构"施事+动作+与事+受事"之间的象征关系是通过"自主/依存联结"实现的。运用"新自主/依存联结"分析模型分析了"NP1+V+给+NP2+NP3"的语义合成过程,以期对其语义建构机制做出合理的解释。

猪博卡病毒NP1基因的克隆及其生物信息学分析

根据Gen Bank发表的猪博卡病毒主要抗原基因NP1基因设计1对引物,采用降落PCR方法进行扩增,克隆后测序,并对该基因进行生物信息学分析。结果表明:成功克隆到猪博卡病毒NP1基因;NP1蛋白的二级结构中自由卷曲含量最高(51.77%),无跨膜蛋白,含有1个糖基化位点、30个磷酸化位点,有6个线性B细胞优势抗原表位,分别位于NP1蛋白的7—14位、27—50位、59—73位、85—94位、102—108位、151—155位。

数量综指“NP1（和）NP2”时名词情况考察

从语义指向看，“数量＋NP1（和）NP2”结构存在数量单指NP1、复指NP，和NP2、综指“NP1（和）NP2”三种情况。本文讨论数量综指“NP1（和）NP2”时对并列名词短语“NP1（和）NP2”的要求。通过考察我们发现，数量结构综指时，首先要求NP1和NP2满足“同量化组合”与“共量化表达”；此外，对其结构形式与语义也有一定要求。

基于网络处理器NP1-c的防火墙模型设计

简要介绍了防火墙的基本原理和EZchip公司的网络处理器NP1-c,在此基础上对以NP1-c为核心设计硬件防火墙的可行性进行分析,并构建了防火墙安全策略以及软硬件模型。

兔防御素NP1在大肠杆菌中的表达

通过选用大肠杆菌偏好密码子对兔防御素基因进行改造,人工合成兔防御素基因并构建编码GST-NP1融合基因,从而在大肠杆菌中进行表达。研究表明:表达的蛋白质经过亲和层析洗脱纯化,SDS-PAGE电泳分析,在目的分子量处出现预期条带。灰度扫描分析表明,表达量最高可达细菌总蛋白的34.7%。经切割、复性后的防御素具有溶血活性。

GST-NP1融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

通过选用大肠杆菌偏好密码子对兔抗御素基因进行改造 ,人工合成兔防御素基因构建大肠杆菌GST -NP1融合基因在大肠杆菌中表达。研究表明 :蛋白质经过亲和层析洗脱纯化 ,SDS -PAGE电泳分析 ,只在目的分子量处出现单一条带。灰度扫描分析表明 ,表达量最高可达总蛋白的 2 7 7%。

试析“Np1+V1+给+Np2+V2”

"给"字句由于其多论元和句式多变化而显得非常复杂,"S1:Np1+V+给+Np2+NP2"的变体"Np1+V1+给+Np2+V2"有时会产生歧义现象。如"我铡草给你看"就有两种理解方式。本文就试图从这个句子入手着重分析"Np1+V1+给+Np2+V2"这一句式。

构式语法视角下汉语NP1+Vi了+NP2句式研究

该文在构式语法视角下研究汉语NP1+Vi了+NP2句式,在这一句式中,"了"并不凸显体标记功能。这一句式体现了同形异构现象,有隐现构式、历事构式和计量宾语构式,在整合过程中,隐现构式是单一构式,而历事构式和计量宾语构式则是两个构式整合而成的复合构式,词汇与构式之间体现了不同的互动关系。