酶标记抗独特型抗体NP30的Dot-ELISA检测血吸虫抗体

本文报道用辣根过氧化物酶标记抗独特型抗体NP_(30)进行Dot-ELISA直接法,检测人血清中的日本血吸虫抗体。急性血吸虫病人粪检阳性符合率88.9％:慢性病人74.1％;正常人的假阳性率为3％。与常规ELISA方法相比,均无显著的差别。提示用酶标记NP30的Dot-ELISA同样可以用于检测日本血吸虫抗体,且方法简便易行,便于现场应用。

日本血吸虫NP30抗体检测方法的优化

目的为了提高单克隆抗独特型抗体NP30抗体检测系统在大山区日本血吸虫病疫区的诊断效能,在原有的双抗体夹心ELISA方法的基础上对其进行优化、改良,建立间接ELISA血清学诊断方法。方法通过正交设计,选用L27(313)正交表,对NP30腹水包被酶标板的浓度、血清浓度、血清孵育时间和辣根过氧化物酶标记抗人IgG的二抗孵育时间共4个因素的3个水平进行不同组合的实验,确定该间接法的最佳实验条件。并用建立的方法对50份云南大山区日本血吸虫粪孵阳性病人血清样本和50份非疫区正常人血清样本进行检测,评价其敏感性和特异性。结果确定的该间接法最佳检测条件为:NP30腹水4μg/ml包被酶标板,血清浓度为1∶100,37℃孵育60min,二抗为37℃孵育30min。该方法的敏感性和特异性分别为88%和96%。结论该方法具有较高的诊断价值,可用于大山区日本血吸虫病疫区的诊断检测。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导抗卵免疫的研究

目的观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对日本血吸虫雌虫生殖产卵及卵胚发育的影响。方法腹腔注射ＮＰ３０主动免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，连续３次，对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水。结果尾蚴攻击感染后第２７天，ＮＰ３０免疫组肝组织内虫卵数下降了３０．９１％，雌虫子宫内虫卵数减少了３８．５５％。尾蚴攻击感染后第３９天，ＮＰ３０免疫组肝组织内的成熟虫卵下降了６６．６３％，死亡虫卵增加了６０．６６％。结论ＮＰ３０主动免疫小鼠具有抗雌虫生殖产卵和抗卵胚发育的双重功效。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体基因的构建和表达

目的 构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30单链抗体 (scFv)基因。 方法 通过PCR方法体外扩增并经测序验证的重链、轻链可变区 (VH、VL)基因先后重组入原核表达质粒 pTHA90相应的位点上 ,中间通过一连接肽 (Gly4 Ser) 3基因连接构建成单链抗体基因 (scFv) ,连接产物转化相应受体菌Top1 0 ,提取质粒 ,酶切鉴定重组克隆。表达产物经ELISA方法测定活性。 结果 重组克隆经酶切鉴定可见预期大小的片段 ,表明重组成功。表达产物经ELISA检测 ,OD4 92 值为 1 .0 6 ,高于阴性对照 3倍以上 ,证实具有与相应抗原结合的能力。 结论 成功地构建了scFv基因 。

间接血凝试验NP30筛检血吸虫病效果

目的评价间接血凝试验(IHA)、NP30在血吸虫病大规模现场调查中的筛检作用。方法选择疫区村1338人,采用双盲法,同时采用尼龙绢集卵孵化法和IHA、NP30血清学检查,计算其血检阳性率、粪检阳性率、人群感染率;尼龙绢集卵孵化法分别与IHA、NP30、IHA+NP30配对,计算IHA、NP30、IHA+NP30血检过筛的粪检漏检率。结果1338人的粪检阳性率为9.72%。IHA、NP30、IHA+NP30血检阳性率分别为23.09%、21.90%、37.67%,人群感染率分别为6.35%、7.17%、9.34%,漏检率分别为34.62%、26.15%、3.85%。IHA+NP30双项检查,血检阳性率高于任一单项血检组(P均<0.01),其人群感染率与粪检阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用IHA+NP30双项筛检病人,漏检率低,更能准确反映实际病情。

NP30/抗体检测试剂盒在云南大山区型血吸虫病流行区的现场应用

目的用NP30/抗体检测试剂盒在大山区型血吸虫病流行区筛查病人,评价其应用价值。方法在云南省大山区型血吸虫病流行区,选择3个自然村作为现场,随机抽取10～70岁的村民作为调查对象,进行血吸虫病病史个案调查;收集粪便,作毛蚴孵化检查;静脉采血,分离血清,分别采用NP30/抗体检测试剂盒和酶联免疫吸附试验试剂盒(SEA/ELISA法)检测特异性IgE和总IgE抗体。结果3个村共筛查村民506人,粪便毛蚴孵化阳性164例,阳性率为32.41%;NP30和SEA/ELISA的阳性率分别为58.30%和75.10%。在164例粪检阳性血清样本中,NP30和SEA/ELISA的阳性符合率分别为87.80%和84.76%。在342例粪孵阴性血清样本中,NP30和SEA/ELISA的阳性率分别为44.15%和70.47%。结论NP30/抗体检测试剂盒具有较高的敏感性和特异性,可用于大山区型血吸虫病流行区病人筛查。

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区基因的体外扩增克隆及序列分析

目的 分离日本血吸虫单克隆抗独特型抗体 NP30重链可变区 (VH)基因并测定其序列。方法 根据鼠免疫球蛋白重链可变区基因 FR1和 FR4序列的保守性 ,化学合成体外扩增 Ig重链可变区基因的数对引物。以日本血吸虫单克隆抗独特型抗体 NP30的杂交瘤细胞株基因组 DNA为模板 ,扩增 VH 基因 ,将其克隆入 p U C19载体 ,重组子用 Sanger's双脱氧链终止法测定序列 ,将序列与Gene Bank中已发表的抗体序列比较。结果 VH 基因全长 35 7bp,属鼠免疫球蛋白重链第 亚类 ,由种系基因 V、Dsp2 .8与 JH4重排而来。该 VH 基因序列已被 Gene Bank收录 (accession NoAF2 82 6 2 2 )。结论 该 VH 基因为日本血吸虫单克隆抗独特型抗体

抗独特型抗体NP30快速ELISA法检测血吸虫抗体

目前，我国血吸虫病诊断主要采用病原学方法及免疫学方法，前者对轻感染的漏检率很高，且费时费力，不适于大规模普查用。免疫学诊断方法以常规的ＥＬＩＳＡ为主，管晓虹等［１］已建立了一株单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０，并证实ＮＰ３０是日本血吸虫的相关抗原（ＧＡＡ）...

NP30抗/体检测试剂盒在云南大山区型血吸虫病流行区的现场应用

目的现场评价NP30抗/体检测试剂盒在大山区型血吸虫病流行区筛查病人中的应用价值。方法在云南省大山区型血吸虫病流行区,选择3个自然村作为调查现场,随机抽取10-70岁的村民作为调查对象,进行血吸虫病病史个案调查;收集粪便标本作病原学检查;静脉采血,分离血清,分别采用NP30抗/体检测试剂盒和酶联免疫吸附试验试剂盒(SEA/ELUSA法)进行血吸虫病免疫学诊断。结果3个村共筛查村民506人,粪便孵化法检测阳性164例,阳性率为32.41%;NP30和SEA/ELISA的阳性符合率分别为58.3%和75.0%;在164例粪检阳性血清样本中,NP30和SEA/ELISA的阳性符合率分别为87.88%和84.71%。在342例粪孵阴性血清样本中,NP30和SEA/ELISA的检出率分别为44.15%和70.47%。结论NP30/抗体检测试剂盒在大山区型血吸虫病流行区现场大规模筛查病人中具有较高的敏感性和特异性。

抗独特型单抗NP30抗山羊血吸虫病的免疫研究

观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30主动免疫对山羊血吸虫病的抗病免疫作用。山羊随机分为 2组。实验组 12只 ,NP30免疫剂量为 10 0 0 μg/只 /次 ,后腿肌肉注射 ,连续免疫 3次 ,最后一次免疫后 8周进行尾蚴攻击。对照组 10只 ,肌肉注射SP2 / 0腹水。 2组山羊于尾蚴攻击感染后第 12周处死。应用NYD 10 0 0型图像分析系统测量肝脏虫卵肉芽肿大小和纤维化程度。实验结果表明 ,实验组山羊肝脏虫卵肉芽肿的面积、体积减小 ,数量明显减少 ,肝纤维化程度减轻 ,山羊体重增加。本文提示NP30主动免疫对山羊血吸虫病可产生较好的抗病免疫作用 ,NP30可作为血吸虫病疫苗候选分子。

日本血吸虫多价DNA疫苗的构建及鉴定

目的构建含日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(TPI)基因和日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30H链CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6的多价DNA疫苗,并观察该融合基因在真核细胞中表达。方法设计合成连接肽(Gly4Ser)3基因的两条互补单链,退火成双链后克隆到真核表达载体pcDNA3.1,改建为pcDNA3.1-linker。分别将SjCTPIDNA片段及NP30的(CDR3)6DNA片段克隆到连接肽的上游或下游,构建pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6和pcD-NA3.1-(CDR3)6-linker-TPI2种多价疫苗。设计引物分别扩增TPI-linker-(CDR3)6和(CDR3)6-linker-TPI,再分别插入真核表达载体pEGFP-N1多克隆位点,绿色荧光蛋白基因的上游,重组质粒用脂质体导入真核细胞COS-7,观察插入基因在真核细胞的表达。结果经双酶切及测序鉴定证实多价疫苗pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6和pcDNA3.1-(CDR3)6-linker-TPI构建成功;构建的pEGFP-N1-TPI-linker-(CDR3)6和pEGFP-N1-(CDR3)6-linker-TPI在导入COS-7细胞后能成功表达。结论日本血吸虫TPI和NP30-(CDR3)6的多价DNA疫苗构建成功,且该融合基因能在真核细胞中表达。

抗洪抢险后部队血吸虫感染的快速检测与预防

1998年度发生在长江中下游地区的特大洪水过后,为了防止出现急性血吸虫感染的爆发和及时掌握水灾这一特定条件下的血吸虫感染现状和特点,为部队防疫提供科学的依据,我们从9月至10月分三批次对2000余名干部战士进行了血吸虫免疫短程抗体的快速检测与服药预防,现报告如下:

两种血吸虫病诊断试剂盒在云南大山区应用效果的比较

目的对NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法试剂盒在云南大山区应用的效果进行比较。方法用NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法分别检测取自云南大山区血吸虫病流行社区的506份血清,并对两者结果进行比较。结果NP30诊断试剂盒和SEA/ELISA法的阳性符合率分别为87.88%(144/164)、84.71%(139/164),两者无显著性差异;在粪孵阴性血清样本中,两者的检出率分别为44.15%(151/342)、70.47%(241/342),存在显著性差异。结论NP30诊断试剂盒在云南大山区血吸虫病流行社区应用效果要好于SEA/ELISA法。