慢病毒介导RNA干扰HES1鼻咽癌稳定细胞株的建立与鉴定

目的建立稳定干扰Split多毛增强子1(HES1)的鼻咽癌(NPC)细胞株,为进一步探讨HES1对NPC的影响奠定基础。方法将293T细胞接种6孔板后随机分为A、B、C、D、E组,分别瞬时转染慢病毒质粒shHES1-a、shHES1-b、shHES1-c、shHES1-d及空载质粒shSCR,分别用qRT-PCR和Western blot法检测HES1 mRNA及蛋白,筛选出最有效干扰质粒;将最有效干扰质粒或空载质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,获得含最有效干扰质粒或空载质粒的病毒上清(LV-shHES1/LV-shSCR)。将NPC细胞CNE2和S18随机分为观察组和对照组,分别将LVshHES1、LV-shSCR以浓度梯度方式感染细胞,分别采用qRT-PCR和Western blot法检测HES1 mRNA及蛋白。结果C组293T细胞中HES1 mRNA及蛋白相对表达量均低于其余各组(P均<0.05)。与对照组比较,观察组CNE2和S18细胞中HES1 mRNA及蛋白相对表达量均降低(P均<0.05)。结论成功建立稳定干扰HES1的NPC细胞株。