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狄斯瓦螨VdesNPC2b蛋白的基因克隆、原核表达及其与寄主幼虫信息素结合机制研究
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作者 刘深云 王佳丽 +5 位作者 袁星光 王彩蝶 涂婉钧 周雯润 李红亮 吴帆 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1459-1466,共8页
【目的】研究狄斯瓦螨Varroa destructor尼曼匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein,NPC2)VdesNPC2b与狄斯瓦螨寄主蜜蜂幼虫信息素油酸甲酯和β-罗勒烯的结合特性和机制,阐明VdesNPC2b在狄斯瓦螨寄主识别中的功能,为狄斯瓦螨生物... 【目的】研究狄斯瓦螨Varroa destructor尼曼匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein,NPC2)VdesNPC2b与狄斯瓦螨寄主蜜蜂幼虫信息素油酸甲酯和β-罗勒烯的结合特性和机制,阐明VdesNPC2b在狄斯瓦螨寄主识别中的功能,为狄斯瓦螨生物防治提供理论依据。【方法】扩增狄斯瓦螨VdesNPC2b开放读码框(ORF)并进行生物信息学分析;基于pET-30a质粒构建原核表达载体,通过原核表达和亲和层析获得VdesNPC2b重组蛋白。利用荧光竞争结合实验检测VdesNPC2b与蜜蜂幼虫信息素油酸甲酯和β-罗勒烯的结合力,并通过荧光光谱变温实验测定22和32℃下VdesNPC2b与油酸甲酯和β-罗勒烯结合力变化来分析结合机制。采用SWISS-MODLE软件对VdesNPC2b进行同源建模,采用MVD软件对VdesNPC2b和β-罗勒烯进行分子对接模拟,初步分析VdesNPC2b与β-罗勒烯结合的关键氨基酸位点。【结果】VdesNPC2b(GenBank登录号:OR463903)的ORF全长531 bp,编码176个氨基酸,VdesNPC2b N端有一个16个氨基酸残基的信号肽。荧光竞争结合试验结果显示,VdesNPC2b与油酸甲酯和β-罗勒烯解离常数KD值分别为2.89和3.49μmol/L,结合过程为动态猝灭,维持VdesNPC2b与油酸甲酯和β-罗勒烯的相互作用力为疏水作用力。同源建模显示VdesNPC2b的二级结构主要为β-折叠,内部存在1个潜在的配基结合腔,VdesNPC2b与β-罗勒烯结合的关键氨基酸位点是Leu68,Ile103和Phe107等。【结论】狄斯瓦螨通过VdesNPC2b结合寄主蜜蜂幼虫长链酯类信息素油酸甲酯和挥发性的β-罗勒烯协同进行宿主定位和识别。 展开更多
关键词 狄斯瓦螨 尼曼匹克C2型蛋白(npc2) 幼虫信息素 荧光竞争 分子对接
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中华蜜蜂NPC1蛋白AcNPC1的原核表达、多克隆抗体制备及功能鉴定 被引量:2
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作者 刘永梅 史红霞 +5 位作者 李颜 马振刚 王林玲 许金山 周泽扬 党晓群 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1314-1324,共11页
【目的】人类C型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C,NPC)主要是由NPC1基因突变引起的一类遗传疾病。NPC1蛋白主要负责胞内胆固醇运输,同时也作为病毒侵染宿主细胞的重要受体之一近年来备受关注。本研究旨在探究NPC1蛋白与中华蜜... 【目的】人类C型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C,NPC)主要是由NPC1基因突变引起的一类遗传疾病。NPC1蛋白主要负责胞内胆固醇运输,同时也作为病毒侵染宿主细胞的重要受体之一近年来备受关注。本研究旨在探究NPC1蛋白与中华蜜蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)感染的关系。【方法】通过PCR扩增中华蜜蜂Apis cerana cerana AcNPC1基因;将其克隆至pET-30a原核表达载体,转化至大肠杆菌Escherichia coli Rosetta TM(DE3)进行IPTG诱导表达,采用镍柱纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体。设计并合成AcNPC 1 siRNA,添食中华蜜蜂幼虫;运用RT-qPCR检测和分析中华蜜蜂CSBV添毒幼虫中AcNPC1的表达量,以及RNAi干扰后不同时间AcNPC1基因和CSBV病毒衣壳蛋白VP1基因在感染CSBV的中华蜜蜂幼虫中的表达水平。【结果】成功构建重组表达质粒pET-30a-AcNPC 1,在大肠杆菌中获得高效表达的重组蛋白,目的蛋白大小约为36 kD,经亲和纯化获得了纯度较高的重组蛋白,免疫小鼠成功制备了多克隆抗体,免疫印迹分析发现AcNPC1抗体能杂交到两条带,有可能是在提取膜蛋白过程中该蛋白发生了部分降解。中华蜜蜂CSBV添毒幼虫中AcNPC1表达与正常幼虫中的相比,在12,24和48 h并无显著变化,在72 h出现显著上调。RNAi实验结果表明,中华蜜蜂正常幼虫添食24 h后AcNPC1的3个干涉片段(siRNA1,siRNA2 and siRNA3)均对AcNPC 1具有显著性下调作用,AcNPC1表达分别下调了73.20%,72.81%和54.78%;给CSBV添毒幼虫分别添食3个干涉片段,AcNPC1表达分别下调了43.90%,59.85%和57.67%。CSBV VP1基因在干扰AcNPC1基因72 h后表达下调了67.65%。【结论】利用原核表达系统能有效地在体外表达中华蜜蜂AcNPC1,并制备了其多克隆抗体。利用体外合成的siRNA对中华蜜蜂幼虫中AcNPC1的表达进行干扰,表明在蜜蜂中通过饲喂的方式进行RNAi可以成功下调靶标基因表达水平。不过,RNAi实验结果提示AcNPC1表达下调后可能并不直接影响CSBV的感染。本研究为进一步阐明AcNPC1的潜在功能打下了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 npc1蛋白 原核表达 表达谱 RNA干扰 SIRNA
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以色列急性麻痹病毒(IAPV)的特性及入侵受体的研究进展
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作者 金红梅 袁春颖 +4 位作者 邹德馨 马鸣潇 侯春生 郭利桃 邓炎春 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期830-836,共7页
以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)是一种严重危害蜜蜂健康的病毒,其感染特性主要表现为较强的传染性和致病性。IAPV能感染多种宿主,不仅能感染蜜蜂,还能感染熊蜂、无刺蜂、胡蜂和蚂蚁等昆虫以及狄斯瓦螨Varroa d... 以色列急性麻痹病毒(Israeli acute paralysis virus,IAPV)是一种严重危害蜜蜂健康的病毒,其感染特性主要表现为较强的传染性和致病性。IAPV能感染多种宿主,不仅能感染蜜蜂,还能感染熊蜂、无刺蜂、胡蜂和蚂蚁等昆虫以及狄斯瓦螨Varroa destructor。受体是决定其宿主范围和嗜性组织的重要因素,病毒入侵过程中关键的一步就是与受体蛋白结合,但迄今为止,国内外针对蜜蜂病毒的受体研究较为匮乏,尚无该病毒受体报道。NPC(NPC intracellular cholesterol transporter),一种细胞内转运胆固醇的蛋白,是多种昆虫病毒的胞内受体,在病毒感染中扮演着关键的角色。之前研究表明,该蛋白可能与蜜蜂病毒的感染过程有关。本文综述了IAPV的特性和可能的入侵受体,包括病毒分子结构特征、流行与传播、宿主范围以及感染机制,以期深入认识IAPV的发病机制。 展开更多
关键词 蜜蜂 IAPV 病毒受体 npc蛋白
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靶向胆固醇稳态小分子药物治疗胶质瘤的研究进展
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作者 姜伟 王君萍 +5 位作者 周鹏 黄玲玲 张梅 陈学冉 王宏志 方志友 《安徽医药》 CAS 2024年第1期11-16,共6页
胶质母细胞瘤(GBM)是成人中最具有侵袭性的恶性脑肿瘤。胆固醇是细胞的必要组分,胆固醇的合成、转运和代谢异常在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要作用。胆固醇代谢稳态相关调控因子如尼曼-匹克样C型蛋白(NPC1)、甾醇O-酰基转移酶(SO⁃A... 胶质母细胞瘤(GBM)是成人中最具有侵袭性的恶性脑肿瘤。胆固醇是细胞的必要组分,胆固醇的合成、转运和代谢异常在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要作用。胆固醇代谢稳态相关调控因子如尼曼-匹克样C型蛋白(NPC1)、甾醇O-酰基转移酶(SO⁃AT1)已成为肿瘤治疗中潜在的新药物干预靶点。该研究阐述了部分靶向胆固醇稳态的小分子药物可能对GBM的治疗作用。 展开更多
关键词 抗代谢药 抗肿瘤 胶质母细胞瘤 脂类代谢 尼曼-匹克样C型蛋白(npc1) 甾醇O-酰基转移酶(SOAT1) 胆固醇 合成 转运 小分子药物
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北部湾海洋真菌Aspergillus fumigatus DL-p0m-g2的化学成分及药理活性研究
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作者 冯婷 孙建 +7 位作者 王玉妃 盘伟斌 覃旭灿 覃炳云 周丽曼 王聪 王佩 孔凡栋 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期154-166,共13页
为获得具有生物活性的化合物,对一株分离于北部湾钉螺菌株Aspergillus fumigatus DL-p0m-g2的化学成分及药理活性进行研究。综合应用反相ODS(octadecylsilyl)柱色谱、半制备液相等多种色谱学方法进行分离纯化,根据化合物理化性质、质谱... 为获得具有生物活性的化合物,对一株分离于北部湾钉螺菌株Aspergillus fumigatus DL-p0m-g2的化学成分及药理活性进行研究。综合应用反相ODS(octadecylsilyl)柱色谱、半制备液相等多种色谱学方法进行分离纯化,根据化合物理化性质、质谱和核磁共振波谱学数据进行结构鉴定,并对分离得到的化合物进行细胞毒活性、抑菌活性和胆固醇转运蛋白NPC1L1(NPC1-like intracellular cholesterol transporter 1)蛋白结合等生物活性评价。实验共分离得到21个生物碱类化合物和1个甾体,分别鉴定为6-methoxyspirotryprostatin B(1)、spirotryprostatin A(2)、fumitremorgin C(3)、cyclotryprostatin A(4)、fumitremorgin B(5)、pseurotin A(6)、azaspirofuran A(7)、azaspirofuran B(8)、cephalimysin C(9)、cephalimysin B(10)、fumiquinazoline C(11)、fumiquinazoline B(12)、fumiquinazoline A(13)、fumiquinazoline D(14)、fumiquinazoline F(15)、tryprostatin B(16)、verruculogen(17)、chaetominine(18)、bisdethiobis(methylthio)glitoxin(19)、helvolic acid(20)、7-deacetylpyripyropene A(21)、terezine D(22)。其中化合物6对人肝癌细胞(Hep G2)、人肺癌细胞(A549)、人直肠癌细胞(HCT116)有一定的细胞毒活性;化合物1、3和20对金黄色葡萄球菌表现出抑菌活性;化合物14与NPC1L1蛋白具有较好的结合,显示其在降脂药物开发中的研究潜力。 展开更多
关键词 Aspergillus fumigatus 化学成分 细胞毒活性 抑菌活性 npc1L1蛋白结合
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Rab9与NPC1在小胶质细胞内的定位研究
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作者 郝又国 王家泉 +4 位作者 张旻 徐金枝 卜碧涛 王雪贞 张莉 《神经损伤与功能重建》 2009年第1期14-16,共3页
目的:观察Rab9与NPC1蛋白在小胶质细胞内的定位及其与溶酶体、高尔基体和晚期内体的关系。方法:以小鼠小胶质细胞系BV-2为对象,采用特异性识别Rab9、NPC1的抗体和溶酶体、高尔基体、晚期内体的特异性表面标记进行荧光免疫细胞化学染色,... 目的:观察Rab9与NPC1蛋白在小胶质细胞内的定位及其与溶酶体、高尔基体和晚期内体的关系。方法:以小鼠小胶质细胞系BV-2为对象,采用特异性识别Rab9、NPC1的抗体和溶酶体、高尔基体、晚期内体的特异性表面标记进行荧光免疫细胞化学染色,在激光共聚焦显微镜下观察。结果:Rab9和NPC1共定位于小胶质细胞胞浆内,Rab9表达于溶酶体、高尔基体和晚期内体。结论:Rab9对NPC1蛋白的正常功能可能有重要影响。 展开更多
关键词 Rab9 npc1蛋白 细胞器 免疫荧光 共定位
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中华蜜蜂NPC2基因家族克隆及表达模式分析 被引量:4
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作者 张莉 张楠 +2 位作者 江虎强 吴帆 李红亮 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2461-2471,共11页
【背景】作为我国本土重要的资源昆虫,中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)对我国初冬季低温开花植物的传粉具有重要的生态价值,其传粉习性与嗅觉系统密切相关。前期对中蜂采集蜂高、低温处理后的触角转录组数据分析发现,与昆虫嗅觉... 【背景】作为我国本土重要的资源昆虫,中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)对我国初冬季低温开花植物的传粉具有重要的生态价值,其传粉习性与嗅觉系统密切相关。前期对中蜂采集蜂高、低温处理后的触角转录组数据分析发现,与昆虫嗅觉相关的尼曼匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein,NPC2)基因家族在低温时表达量上升。【目的】以中蜂NPC2家族基因为研究对象,克隆并分析其结构特征和表达谱以及高、低温处理下表达量的差异,为深入研究中蜂NPC2基因家族在中蜂低温适应的嗅觉感受功能提供参考。【方法】基于中蜂高、低温转录组测序结果,利用RT-PCR克隆获得中蜂NPC2基因ORF序列,进行系统进化树分析和三维结构预测,然后通过实时荧光定量PCR分析中蜂NPC2基因在不同发育时期、组织的时空表达谱,以及高、低温时的表达量变化。【结果】获得4个中蜂NPC2基因——AcNPC2a、AcNPC2b、AcNPC2c、AcNPC2d的ORF全长,分别为447、480、459和465 bp,编码148、159、152和154个氨基酸,预测蛋白分子量为16.12—18.53 kD,等电点分别为7.98、7.57、6.56和6.34。进化树分析显示AcNPC2与意大利蜜蜂的NPC2同源序列亲缘关系最近,与其他膜翅目昆虫NPC2也有一定相似性。实时荧光定量PCR结果显示,AcNPC2a在新出房蜂的腹部表达量最高,其次是在哺育蜂的腹部以及幼虫期;AcNPC2b在新出房蜂的胸部表达最高,在采集蜂的头部、胸部和后足也有表达;AcNPC2c在哺育蜂和采集蜂的触角中呈高丰度表达;AcNPC2d在采集蜂的头部表达量最高。经低温处理后,4个AcNPC2基因在采集蜂触角中的表达量均有所上升,但差异不显著。【结论】AcNPC2具有NPC2蛋白的保守结构,其基因家族成员在中蜂的时空表达谱中呈现多样性,其中AcNPC2c在触角中呈高丰度表达,表明其与中蜂嗅觉感受功能关系密切。AcNPC2基因家族在低温时采集蜂触角中表达量均有所上升,表明该基因家族有可能参与中蜂的低温适应性,或与初冬季访花行为有关。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 尼曼匹克C2型蛋白(npc2) 基因克隆 时空表达谱
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The initial results of Epstein-Barr virus (EBV)-encoded latent membrane protein-1 (LMP-1) for screening nasopharyngeal carcinoma (NPC) 被引量:2
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作者 Shaojun Lin Qiaojuan Guo Jin Lin Jingfeng Zong Lu Han Jianji Pan 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2011年第1期51-55,共5页
Objective: Early diagnosis of nasopharyngeal carcinoma (NPC) is an important method to improve the survival rate.However,the sensitivity and specificity of the screening protocols which was widely used in clinic now a... Objective: Early diagnosis of nasopharyngeal carcinoma (NPC) is an important method to improve the survival rate.However,the sensitivity and specificity of the screening protocols which was widely used in clinic now are considered to be unsatisfactory.Epstein-Barr virus (EBV)-encoded latent membrane protein-1 (LMP-1) is one of the proteins that have been suggested to be a classic oncogene with transformation properties.The current study set out to discuss the clinical significance of LMP-1 on the screening of NPC.Methods: Three hundred patients who visited our institution (Department of Radiation Oncology,Fujian Provincial Cancer Hospital,Fuzhou,China) with ENT symptoms between 2007 and 2008 were involved in this study,and all of them were agreed to be involved in this investigation.Not only did they undergo nasopharyngeal swab to obtain cells for the LMP-1 polymerase chain reaction (PCR) analysis,but also nasopharyngeal biopsy were taken to identify the diagnosis.Results: An amount of DNA that was sufficient for PCR was extracted from 243 (81%) swab samples,the positive rate of LMP-1 of those with non-nasopharyngeal carcinoma was 3.85% (4/108),which was much lower than those with nasopharyngeal carcinoma (P < 0.05).By detecting LMP-1 in nasopharyngeal swabs,NPC was diagnosed with a sensitivity of 88.15% (119 of 135 patients),specificity of 96.30% (104 of 108 patients),a positive predictive value of 95.2% (119 of 123 patients),a negative predictive value of 86.67% (104 of 120 patients),accuracy of 91.77%,and Youden index of 84.45%.Conclusion: The nasopharyngeal swab coupled with PCR-based EBV LMP-1 detection have high sensitivity and specificity,and also good repeatability,it could serve as part of the screening program for high-risk populations. 展开更多
关键词 nasopharyngeal carcinoma npc Epstein-Barr virus (EBV) latent membrane protein-1 (LMP-1) early diagnosis
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蛋白质与胆固醇吸收有关
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《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第2期195-195,共1页
关键词 蛋白 胆固醇 免疫组织化学法 npc1L1蛋白
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星豹蛛NPC2基因家族克隆及表达模式分析 被引量:1
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作者 赵萌萌 焦丽亚琳 +3 位作者 牛越 王美 张晓晨 李锐 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1289-1296,共8页
为探究气味载体蛋白——尼曼匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein,NPC2)在星豹蛛Pardosa astrigera体内的功能,从星豹蛛体内筛选鉴定出PaNPC2-1和PaNPC2-2基因并采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chai... 为探究气味载体蛋白——尼曼匹克C2型蛋白(Niemann-Pick type C2 protein,NPC2)在星豹蛛Pardosa astrigera体内的功能,从星豹蛛体内筛选鉴定出PaNPC2-1和PaNPC2-2基因并采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术进行基因克隆,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)技术对星豹蛛不同组织、不同发育期PaNPC2-1和PaNPC2-2基因的表达模式进行分析。结果显示,PaNPC2-1和PaNPC2-2开放阅读框长度分别为441 bp和492 bp,编码146个和163个氨基酸。序列分析显示,2个PaNPC2基因具有NPC2基因家族的典型特征,且具有6个保守的半胱氨酸位点。组织表达谱结果显示,PaNPC2-1在雌成蛛触肢以及雄成蛛螯肢中的表达量最高,PaNPC2-2在雌成蛛躯干的表达量显著高于雌成蛛的其他组织;发育期表达谱结果显示,PaNPC2-1在6龄幼蛛期的表达量最高,PaNPC2-2在成蛛期的表达量最高。推测PaNPC2-1可能参与星豹蛛的化学通信,而PaNPC2-2则行使着不同于化学通信的其他功能。 展开更多
关键词 星豹蛛 npc2蛋白 基因克隆 表达分析 化学通信
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小檗碱靶向Wnt5a/NPC1信号通路调节脂自噬抑制动脉粥样硬化形成 被引量:6
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作者 杨彩云 鲁启文 +4 位作者 罗桑 涂梦婷 赵瞳 郑翠翠 万强 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第18期62-68,共7页
目的:探讨小檗碱(BBR)在防治小鼠动脉粥样硬化(AS)病变中对脂自噬的调节作用及分子机制。方法:采用载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠50只随机分为AS模型组、阿托伐他汀组(5 mg·kg-1)、BBR低、中、高剂量组(2.5、5、10 mg·kg-1)... 目的:探讨小檗碱(BBR)在防治小鼠动脉粥样硬化(AS)病变中对脂自噬的调节作用及分子机制。方法:采用载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠50只随机分为AS模型组、阿托伐他汀组(5 mg·kg-1)、BBR低、中、高剂量组(2.5、5、10 mg·kg-1);另设10只C57BL/6J小鼠为空白组。12周后苏木素-伊红(HE)及油红O染色检测主动脉AS斑块病理学改变;生化检测血清脂质水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、氧化应激标记物活性氧(ROS)含量及血清脂自噬标记物Beclin1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)水平;黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活力;免疫组化(IHC)检测主动脉无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)、C1型尼曼-匹克蛋白(NPC1)分布;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉Wnt5a、NPC1蛋白表达。结果:与空白组比较,AS模型组小鼠可见显著的AS斑块形成,血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均显著升高(P<0.01),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均显著降低(P<0.01);与AS模型组比较,阿托伐他汀组、BBR中剂量组及BBR高剂量小鼠AS斑块面积明显减少(P<0.05,P<0.01),血清TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ROS、主动脉Wnt5a分布及蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C、SOD、Beclin1、LC3Ⅱ、主动脉NPC1分布及蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与阿托伐他汀组比较,BBR中剂量组小鼠以上检测指标差异无统计学意义。结论:BBR可通过竞争性结合Wnt5a激活NPC1表达,上调脂自噬水平降低血脂,抑制炎症介质的释放及氧化应激损伤从而发挥防治AS功效。 展开更多
关键词 小檗碱 脂自噬 载脂蛋白E基因敲除小鼠 无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt5a)/C1型尼曼-匹克蛋白(npc1)信号通路
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中华蜜蜂AcNPC2b的原核表达和鉴定 被引量:2
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作者 党晓群 黄钰彬 +4 位作者 李颜 李小青 王程程 周泽扬 许金山 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1094-1102,共9页
【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂),其胞内胆固醇转运体AcNPC2a能够识别并结合几种微生物的细胞壁,AcNPC2存在于该蜂触角,参与嗅觉通讯,关于AcNPC2b的功能尚未见报道。【方法】通过对中华蜜蜂AcNPC2b基因进行原核表达,以纯... 【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂),其胞内胆固醇转运体AcNPC2a能够识别并结合几种微生物的细胞壁,AcNPC2存在于该蜂触角,参与嗅觉通讯,关于AcNPC2b的功能尚未见报道。【方法】通过对中华蜜蜂AcNPC2b基因进行原核表达,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗血清;利用荧光定量PCR和免疫印迹检测AcNPC2b的转录活性及蛋白水平,通过微生物结合测定对AcNPC2b的功能进行探索。【结果】中蜂AcNPC2b含有信号肽和ML结构域,具有3个二硫键,与果蝇Drosophila melanogaster DmNPC2b聚为一个亚枝。荧光定量qRT-PCR检测发现,感染中蜂囊状幼虫病毒(Chinses sacbrood virus,简称CSBV)的幼虫体内AcNPC2b基因的表达呈现出先微弱下调再持续上调的趋势。获得了约16 ku的重组蛋白AcNPC2b并制备了多克隆抗体,免疫印迹结果表明,中蜂AcNPC2b蛋白在工蜂头、胸与中肠中的表达量最高,触角、马氏管与脂肪体中次之。AcNPC2b蛋白在正常与感染CSBV病毒的中蜂幼虫中均有表达,且在感染CSBV的中蜂幼虫中有微弱上调。重组蛋白AcNPC2b微生物结合测定实验结果显示中蜂AcNPC2b重组蛋白均能与活的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌以及白僵菌结合。【结论】正常与感染CSBV病毒的中蜂幼虫体内Ac NPC2b基因转录水平和AcNPC2b蛋白的表达含量存在差异,重组蛋白AcNPC2b具有识别并结合病原菌的能力,为后续深入研究AcNPC2b蛋白的分子功能奠定了一定理论基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 npc2b蛋白 原核表达 免疫印迹 结合实验
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涠洲岛火山口真菌的分离及次级代谢产物鉴定 被引量:4
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作者 王聪 杜为胜 +3 位作者 杨朝龙 梁铠麟 孔凡栋 周丽曼 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期553-561,共9页
涠洲岛火山口生态环境特殊,蕴藏着丰富且独具特色的微生物资源。关于涠洲岛火山口海洋真菌来源的次级代谢产物鲜有报道。本研究采用两种培养基从涠洲岛火山口海洋植物中分离真菌,对菌株的代谢产物进行分离纯化,并通过波谱等方法鉴定化... 涠洲岛火山口生态环境特殊,蕴藏着丰富且独具特色的微生物资源。关于涠洲岛火山口海洋真菌来源的次级代谢产物鲜有报道。本研究采用两种培养基从涠洲岛火山口海洋植物中分离真菌,对菌株的代谢产物进行分离纯化,并通过波谱等方法鉴定化合物结构。从4种涠洲岛火山口附近的海洋植物样本中分离真菌共31株,从菌株青霉菌Penicillium sp.TX-M1-3和Penicillium sp.LW-2-1的发酵物中纯化获得2个主要次级代谢产物,并鉴定为核丛青霉素和弯孢霉菌素。活性评价表明核丛青霉素对NPC1L1蛋白具有一定的抑制作用,暗示其在治疗心血管疾病方面的潜力。本结果拓展了涠洲岛火山口微生物资源及其次生代谢产物方面的研究,为该地区微生物与其次生代谢产物的研究提供了相关基础。 展开更多
关键词 涠洲岛火山口 真菌 核丛青霉素 npc1L1蛋白
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落花生根内生真菌Fusarium oxysporum LHS-P1-3中恩镰孢菌素类化合物及生物活性研究
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作者 周丽曼 孙建 +5 位作者 潘柳婷 郭梦菲 唐运文 王聪 许海棠 孔凡栋 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第17期5473-5480,共8页
目的研究落花生根内生真菌Fusarium oxysporum LHS-P1-3的次级代谢产物及其生物活性。方法使用硅胶色谱柱、高效液相色谱等对代谢粗提物进行分离纯化,采用质谱、核磁共振等方法测定化合物的结构,采用CCK-8法测试化合物的抗肿瘤细胞活性... 目的研究落花生根内生真菌Fusarium oxysporum LHS-P1-3的次级代谢产物及其生物活性。方法使用硅胶色谱柱、高效液相色谱等对代谢粗提物进行分离纯化,采用质谱、核磁共振等方法测定化合物的结构,采用CCK-8法测试化合物的抗肿瘤细胞活性,使用表面等离子共振实验(surface plasmon resonance,SPR)研究化合物与胆固醇转运蛋白1(niemann-pick c1-like 1,NPC1L1)相互作用关系。结果从落花生根内生真菌Fusarium oxysporum LHS-P1-3分离得到6个化合物,包括1个新化合物(1)与5个已知化合物:白僵菌素(2)、恩镰孢菌素I(3)、恩镰孢菌素MK1688(4)、恩镰孢菌素H(5)及恩镰孢菌素B(6)。化合物1~4对HepG2细胞和HeLa细胞的IC50均小于10µmol/L,化合物2~4则对HCT116细胞的IC50小于10µmol/L,SPR研究表明化合物2、4在20µmol/L浓度下,可与NPC1L1蛋白相互作用。结论化合物1为新的恩镰孢菌素类化合物,命名为恩镰孢菌素W。化合物1~5具有抗肿瘤活性,化合物2、4与NPC1L1蛋白存在相互作用,可能是NPC1L1蛋白的潜在抑制剂。 展开更多
关键词 落花生 尖刀镰孢菌LHS-P1-3 恩镰孢菌素 白僵菌素 细胞毒活性 npc1L1蛋白
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