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中华蜜蜂AcNPC2b的原核表达和鉴定
被引量:
1
1
作者
党晓群
黄钰彬
+4 位作者
李颜
李小青
王程程
周泽扬
许金山
《应用昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期1094-1102,共9页
【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂),其胞内胆固醇转运体AcNPC2a能够识别并结合几种微生物的细胞壁,AcNPC2存在于该蜂触角,参与嗅觉通讯,关于AcNPC2b的功能尚未见报道。【方法】通过对中华蜜蜂AcNPC2b基因进行原核表达,以纯...
【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂),其胞内胆固醇转运体AcNPC2a能够识别并结合几种微生物的细胞壁,AcNPC2存在于该蜂触角,参与嗅觉通讯,关于AcNPC2b的功能尚未见报道。【方法】通过对中华蜜蜂AcNPC2b基因进行原核表达,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗血清;利用荧光定量PCR和免疫印迹检测AcNPC2b的转录活性及蛋白水平,通过微生物结合测定对AcNPC2b的功能进行探索。【结果】中蜂AcNPC2b含有信号肽和ML结构域,具有3个二硫键,与果蝇Drosophila melanogaster DmNPC2b聚为一个亚枝。荧光定量qRT-PCR检测发现,感染中蜂囊状幼虫病毒(Chinses sacbrood virus,简称CSBV)的幼虫体内AcNPC2b基因的表达呈现出先微弱下调再持续上调的趋势。获得了约16 ku的重组蛋白AcNPC2b并制备了多克隆抗体,免疫印迹结果表明,中蜂AcNPC2b蛋白在工蜂头、胸与中肠中的表达量最高,触角、马氏管与脂肪体中次之。AcNPC2b蛋白在正常与感染CSBV病毒的中蜂幼虫中均有表达,且在感染CSBV的中蜂幼虫中有微弱上调。重组蛋白AcNPC2b微生物结合测定实验结果显示中蜂AcNPC2b重组蛋白均能与活的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌以及白僵菌结合。【结论】正常与感染CSBV病毒的中蜂幼虫体内Ac NPC2b基因转录水平和AcNPC2b蛋白的表达含量存在差异,重组蛋白AcNPC2b具有识别并结合病原菌的能力,为后续深入研究AcNPC2b蛋白的分子功能奠定了一定理论基础。
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关键词
中华蜜蜂
npc2b
蛋白
原核表达
免疫印迹
结合实验
原文传递
题名
中华蜜蜂AcNPC2b的原核表达和鉴定
被引量:
1
1
作者
党晓群
黄钰彬
李颜
李小青
王程程
周泽扬
许金山
机构
重庆师范大学生命科学学院
重庆市媒介昆虫重点实验室
微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室
出处
《应用昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期1094-1102,共9页
基金
重庆市自然科学基金面上项目(cstc2019jcyj-msxmX0564)
现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS-44)
+2 种基金
国家自然科学基金项目(31770160)
重庆市教委科学技术研究项目(KJQN202000521)
重庆市留学人员回国创业创新支持计划项目(cx2019137)。
文摘
【目的】中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂),其胞内胆固醇转运体AcNPC2a能够识别并结合几种微生物的细胞壁,AcNPC2存在于该蜂触角,参与嗅觉通讯,关于AcNPC2b的功能尚未见报道。【方法】通过对中华蜜蜂AcNPC2b基因进行原核表达,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗血清;利用荧光定量PCR和免疫印迹检测AcNPC2b的转录活性及蛋白水平,通过微生物结合测定对AcNPC2b的功能进行探索。【结果】中蜂AcNPC2b含有信号肽和ML结构域,具有3个二硫键,与果蝇Drosophila melanogaster DmNPC2b聚为一个亚枝。荧光定量qRT-PCR检测发现,感染中蜂囊状幼虫病毒(Chinses sacbrood virus,简称CSBV)的幼虫体内AcNPC2b基因的表达呈现出先微弱下调再持续上调的趋势。获得了约16 ku的重组蛋白AcNPC2b并制备了多克隆抗体,免疫印迹结果表明,中蜂AcNPC2b蛋白在工蜂头、胸与中肠中的表达量最高,触角、马氏管与脂肪体中次之。AcNPC2b蛋白在正常与感染CSBV病毒的中蜂幼虫中均有表达,且在感染CSBV的中蜂幼虫中有微弱上调。重组蛋白AcNPC2b微生物结合测定实验结果显示中蜂AcNPC2b重组蛋白均能与活的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌以及白僵菌结合。【结论】正常与感染CSBV病毒的中蜂幼虫体内Ac NPC2b基因转录水平和AcNPC2b蛋白的表达含量存在差异,重组蛋白AcNPC2b具有识别并结合病原菌的能力,为后续深入研究AcNPC2b蛋白的分子功能奠定了一定理论基础。
关键词
中华蜜蜂
npc2b
蛋白
原核表达
免疫印迹
结合实验
Keywords
Apis cerana cerana
npc2b
prokaryotic expression
western blotting
binding assay
分类号
S891 [农业科学—特种经济动物饲养]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中华蜜蜂AcNPC2b的原核表达和鉴定
党晓群
黄钰彬
李颜
李小青
王程程
周泽扬
许金山
《应用昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
原文传递
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
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