术前血清中NPM1和PRDX6的表达对结肠癌根治术后预后的评估价值

目的探讨术前血清中NPM1和PRDX6的表达对结肠癌根治术后预后的评估价值。方法选取2017年9月至2018年10月入上海市静安区闸北中心医院行结肠癌根治术患者162例,为结肠癌组,同时选取同一段时间在本院体检健康的体检者100例为健康组,qRT-PCR检测NPM1和PRDX6 mRNA表达水平,Pearson相关性分析血清中NPM1和PRDX6表达的相关性,绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用Log-Rank检验比较NPM1和PRDX6高低表达者的生存时间。结果结肠癌组患者血清中NPM1和PRDX6 mRNA的相对表达均明显高于健康组(P<0.05);不同的TNM分期、是否淋巴结转移、不同的分化程度、不同肿瘤浸润深度的结肠癌患者血清中NPM1和PRDX6 mRNA表达水平对比差异均有统计学意义(P均<0.05);NPM1与PRDX6表达呈正相关(r=0.534,P<0.001);NPM1高表达患者的生存率明显低于NPM1低表达患者的生存率(P<0.05),PRDX6高表达患者的生存率明显低于PRDX6低表达患者的生存率(P<0.05),Cox单因素分析显示,TNM分期、淋巴结转移、分化程度、肿瘤浸润深度、NPM1和PRDX6是影响结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05);Cox多因素分析结果显示,TNM分期、淋巴结转移、分化程度、NPM1和PRDX6是影响结肠癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论NPM1和PRDX6在结肠癌患者血清中高表达,两者的表达与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、肿瘤浸润深度及预后有关,可能成为结肠癌预后判断的分子标志物。

NPM1促进骨肉瘤细胞迁移、增殖、侵袭的体外研究

目的 探讨核仁磷酸蛋白1 (NPM1)对骨肉瘤细胞(143B及U2细胞)恶性表型迁移、增殖和侵袭能力的影响。方法 采用Oncomine数据库查询NPM1在骨肉瘤中的表达水平;构建重组慢病毒载体,制成过表达NPM1慢病毒(Lv/ShNPM1)、阴性对照慢病毒(Lv/negative)和沉默NPM1慢病毒(Lv/ShNPM1)。分别转染人源骨肉瘤细胞系(143B及U2细胞),分为Lv/NPM1组、Lv/ShNPM1组、NC (Lv/negative)组。运用Western blot法检测各组别中NPM1蛋白的表达水平。分别运用CCK8法、Wound healing法、Transwell invasion法检测各组细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。结果 Oncomine数据库查询结果显示,NPM1在骨肉瘤中呈高表达水平;检测各组中NPM1蛋白表达的结果显示:与NC组比较,Lv/ShNPM1组中NPM1蛋白表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);U2-OS细胞中NC组、Lv/NPM1组和Lv/ShNPM1组细胞迁移率分别为(49.7±3.3)%、(64.1±7.4)%、(24.3±6.6)%,143B细胞分别为(63.5±4.3)%、(75±3.7)%、(30.1±5.9)%,两种细胞Lv/ShNPM1组迁移率明显低于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);U2-OS细胞中NC、Lv/NPM1组、Lv/ShNPM1组侵袭细胞数分别为98±26.3、164±41、38±14.6,143B细胞分别为104±19.1、191±32.4、41±27.6,两种细胞Lv/ShNPM1组侵袭细胞数明显少于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);CCK8实验结果显示143B和U2-OS细胞Lv/ShNPM1组增殖能力明显低于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NPM1能够体外增强骨肉瘤细胞迁移、增殖和侵袭能力。

血液肿瘤中NPM1突变基因的载体构建及表达分析

目的:NPM1基因突变导致多种类型的血液肿瘤,其中最常见的是NPM1突变导致急性髓系白血病(AML)及间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。构建这两种最常见的NPM1突变基因真核表达载体并分析其表达情况,对于研究NPM1突变与血液肿瘤发生的关系具有重要意义。方法:设计NPM1突变基因引物,通过重叠PCR扩增基因片段,并插入到pEGFP-N1载体,构建GFP-NPMc+及GFP-NPM-ALK真核表达载体;转染GFP-NPM1突变载体到HEK293T细胞,荧光显微镜观察突变蛋白细胞定位情况;免疫印迹检测NPM1突变蛋白过表达对相关细胞信号通路的影响。结果:双酶切实验显示GFP-NPMc+和GFP-NPM-ALK真核表达载体构建成功;荧光显微镜观察显示NPMc+和NPM-ALK突变蛋白均主要定位于细胞质;免疫印迹结果显示NPM1突变能够激活PKC和ERK等信号通路。结论:成功构建了血液肿瘤中最常见的NPM1突变基因表达载体,并通过NPM1蛋白细胞定位的分析,我们认为NPM1突变蛋白共有的组成结构域NPM-N端可能在各种血液肿瘤发生中发挥重要作用。

NPM1突变对IDH2突变急性髓系白血病患者的预后分析

目的探讨核仁磷酸蛋白(NPM1)突变对异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)突变急性髓系白血病(AML)患者的预后影响。方法选取蚌埠医学院第一附属医院血液内科2018年01月—2020年06月收治AML患者105例为研究对象。将AML患者分为IDH2突变阳性组(28例)和IDH2突变阴性组(77例)。比较两组患者化疗完全缓解率(CR)和2年生存率差异。结果AML患者IDH2突变阳性组CR率与IDH2突变阴性组患者比较,差异无统计学意义(P=0.113)。IDH2突变阳性组患者2年生存率、总体生存时间(OS)中位数与IDH2突变阴性组患者比较,差异无统计学意义(P=0.110)。105例患者中49例患者伴随NPM1突变,56例患者不伴随NPM1突变。伴随NPM1突变中IDH2突变阳性患者(13例)CR率、2年生存率、OS中位数与IDH2突变阴性患者(36例)比较,差异均无统计学意义(P>0.05);不伴随NPM1突变中IDH2突变阳性(15例)患者CR率、2年生存率、OS中位数与IDH2突变阴性患者(41例)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在AML不伴随NPM1突变的背景下,IDH2突变阳性患者的化疗疗效和2年生存率差于IDH2突变阴性患者。

Aurora-B介导NPM1蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞恶性表型的体外研究

目的探讨Aurora-B介导NPM1(nucleophosmin1)蛋白磷酸化水平改变对骨肉瘤细胞恶性表型的影响。方法运用生物信息学数据库预测NPM1在肉瘤中的表达情况以及Aurora-B与NPM1的相互关系。构建重组慢病毒载体,获得沉默Aurora-B慢病毒(LV/ShAurora-B)、过表达NPM1慢病毒(LV/NPM1)和阴性对照慢病毒(LV/negative)。转染人源骨肉瘤细胞系143B及U2-OS细胞,分为Lv/ShAurora-B组、NC(LV/negative)组和LV/ShAurora-B+LV/NPM1共转染组。Western blot分别检测LV/ShAurora-B组和NC组中Aurora-B、磷酸化NPM1^(ser125)蛋白表达。采用CCK-8法检测3组细胞增殖情况,Wound healing法检测细胞迁移能力,Transwell invasion法检测细胞侵袭能力。结果生物信息学结果显示,NPM1在肉瘤中高表达以及NPM1高表达患者的预后较差,且NPM1存在丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点,Aurora-B与NPM1之间可能存在磷酸化作用。Western blot结果显示,与NC组相比,LV/ShAurora-B组中Aurora-B和磷酸化NPM1^(ser125)蛋白的表达均降低(P<0.05),而NPM1蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。体外表型实验显示,LV/ShAurora-B组细胞的增殖、迁徙和侵袭能力均低于NC组(P<0.05),且LV/ShAurora-B+LV/NPM1共转染组能部分恢复下调Aurora-B对骨肉瘤细胞恶性表型的抑制(P<0.05)。结论 Aurora-B通过介导NPM1蛋白磷酸化促进骨肉瘤细胞恶性表型。

双重PCR检测急性髓系白血病FLT3-ITD和NPM1基因突变

本研究旨在建立一种同时筛查FLT3-ITD突变和NPM1突变的检测方法。设计2对引物,分别扩增NPM1基因的外显子12和FLT3基因的外显子14、内含子14、外显子15,以覆盖几乎所有已知突变位点。对双重PCR体系的反应程序和引物浓度比例进行优化,将双重PCR产物通过毛细管电泳分离,根据野生型产物和突变型产物的大小差异来判断突变存在与否并利用产物的峰面积对突变比例进行定量,并对突变阳性标本进行测序验证。结果表明,在93例标本中NPM1突变者17例(18.5%),FLT3-ITD突变者15例(16.3%),NPM1突变和FLT3-ITD突变双阳性6例。17例NPM1突变中7例M2、4例M4、5例M5、1例M6,其中10例男性、7例女性;有15例为A型,1例为B型,1例为Nm型;有1例CML急变为AML的标本中带有NPM1基因A型突变。15例FLT3-ITD阳性中1例M1、8例M2、2例M3、1例M4、3例M5,其中5例男性、10例女性。扩增产物测序结果进一步证明了该检测体系的准确性和可靠性。结论 :建立了同时筛查FLT3-ITD突变和NPM1突变的检测体系,该体系以基因组DNA为模板,具有方便、快捷、准确、可定量的优点。

正常核型急性髓系白血病NPM1、FLT3-ITD突变与外周血白细胞数及骨髓原始细胞百分比相关性研究

本研究旨在分析NPM1和FLT3-ITD突变与急性髓系白血病患者外周血白细胞数及骨髓原始细胞百分比的相关性。回顾分析我中心2009年1月至2011年12月份初治正常核型急性髓系白血病患者51例,其中男性22例,女性29例,中位年龄47岁(14-83岁)。采用聚合酶链式反应检测NPM1及FLT3-ITD突变状态。结果表明,与无NPM1突变患者相比,突变者初诊时外周血白细胞数较多(30.7×109/L vs 8.6×109/L,P=0.002);FLT3-ITD突变患者较无突变患者具有更多的外周血白细胞数(42.38×109/L vs 11.45×109/L,P=0.033)及更高的骨髓原始细胞百分比(74.0%vs 60.25%,P=0.036)。外周血白细胞数及骨髓原始细胞百分比在NPM1、FLT3-ITD无突变组、单独NPM1突变组、单独FLT3-ITD突变组到NPM1、FLT3-ITD双突变组逐步升高(均P<0.05)。白细胞数大于12.55×109/L的患者NPM1突变率明显升高(P=0.002),大于37.85×109/L者FLT3-ITD突变率明显升高(P=0.033);原始细胞比例大于72.25%的FLT3-ITD突变率明显升高(P=0.008)。NPM1突变患者首疗程完全缓解率(CR)明显高于无突变者(78.13%vs 40.0%,χ2=4.651,P=0.031)。结论:NPM1及FLT3-ITD突变患者白细胞计数及原始细胞比例大,提示NPM1与FLT3-ITD突变均可能促进白血病细胞增殖,且二者可能具有协同效应。

急性髓系白血病NPM1基因突变的研究

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者NPM1基因突变情况及临床特征。采用PCR扩增产物直接测序法检测33例AML患者NPM1基因第12外显子的突变情况,了解NPM1基因突变阳性患者的临床特征。结果显示:33例AML患者中共检出8例(24.2%)具有NPM1基因突变,其中M11例、M23例、M41例、M53例。19例正常核型AML患者中7例(36.8%)发生NPM1基因突变,明显高于异常核型组(14例中1例,7.1%)(p<0.05)。NPM1基因突变型患者骨髓原始细胞比例及外周血白细胞计数均高于野生型组(p值均<0.05)。结论:NPM1基因第12外显子的突变多见于正常核型AML患者,突变患者骨髓原始细胞比例及外周血白细胞数量增多。

急性髓系白血病NPM1基因突变检测方法的研究

本研究旨在建立检测急性髓系细胞白血病(AML)患者NPM1基因突变的方法。针对NPM1基因突变集中区域设计引物/探针,建立高分辨熔解曲线方法(HRM)和等位基因特异PCR方法(AS-PCR),通过89份AML标本进行了临床评估,并采用毛细管电泳法(CE)和测序法作为对照进行了验证。结果表明,通过上述4种方法共检出阳性标本17例(19.1%),其中A型突变15例,B型和Nm型突变各1例。上述方法中HRM法检测全面,灵敏度为5%,而AS-PCR法有一定的漏检,但灵敏度高达0.01%。结论:考虑到操作的难易程度,同时也结合临床样品的检测情况,HRM在临床上可法用于NPM1突变筛查,而AS-PCR法可用于后续的微小残留病定量检测。

正常核型急性髓系白血病NPM1基因突变的临床研究

目的探讨正常核型急性髓系白血病(AML)患者核仁磷酸蛋白1(NPM1)基因突变发生情况,并了解其临床特征及预后。方法采用基因组DNA-PCR方法检测123例初发AML患者NPM1基因及正常核型AML患者FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)基因,直接测序法检测AML患者NPM1基因第12外显子的突变情况,琼脂糖电泳分析正常核型AML患者FLT3基因内部串联重复(ITD)突变。结果 123例AML患者中检出NPM1突变24例(19.5%),其中A型突变22例、B型突变1例、D型突变1例。57例正常核型中FLT3-ITD阳性10例,其中5例同时发生NPM1和FLT3-ITD两种突变。NPM1突变在正常核型中的发生率为40.3%(23/57),显著高于异常核型的2.1%(1/47)(P<0.01)。正常核型中NPM1基因突变者发病年龄高、缓解率高,但合并FLT3-ITD突变者缓解率低。结论 NPM1基因突变是AML尤其是正常核型AML患者常见的分子学异常,NPM1基因突变检测对指导AML患者治疗及评估预后有重要意义。

FLT3,NPM1,WT1,c-KIT基因突变在儿童急性髓细胞白血病的分布及临床意义

目的探讨儿童急性髓细胞白血病(AML)中FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)、核仁磷酸蛋白(NPM1)、Wilms瘤基因(WT1)及c-KIT基因突变发生的频次,并分析其临床意义。方法利用PCR方法检测2005年1月-2011年11月首都医科大学附属北京儿童医院收治的儿童A ML患者的FLT3、NPM1、WT1及c-KIT基因突变情况,分析这些突变与临床特征、细胞遗传学改变之间的关系及对预后的影响。结果 256例患儿中FLT3、NPM1、WT1及c-KIT基因突变检出率分别为12.5%、30.1%、4.7%及12.1%。FLT3及WT1阳性的非M3型AML患儿第一疗程完全缓解率(CR)降低(P=0.027,P=0.014)。单纯FLT3-ITD阳性的非M3型AML患儿无复发生存时间(RFS)及无事件生存时间(EFS)最低,单纯NPM1阳性或无基因突变的患儿RFS及EFS最高(P<0.001)。结论 FLT3、NPM1、WT1及c-KIT基因突变在儿童AML患者中的分布及临床意义有其独特性,加强对这四种基因突变的研究与认识利于儿童AML准确分层治疗,从而提高长期生存率。

猪新基因NPM1的克隆、序列分析与染色体定位

克隆了猪NPM1基因的cDNA和第4内含子序列,并利用生物信息学方法进行验证。所得cDNA序列全长1 195 bp且包含一个完整的开放阅读框,编码294个氨基酸。内含子序列长300 bp,遵循GT/AG剪接法则。序列分析表明,该基因与已报道的人、大鼠和小鼠等物种的NPM1基因高度同源,氨基酸序列同源性分别为95%、91%和91%。该基因编码的蛋白具有Nucleoplasmin保守功能域。用体细胞杂种板将该基因定位在猪16号染色体q21区段,辐射杂种板定位结果表明该基因与猪16号染色体上SW977标记紧密连锁。

一种检测多种NPM1突变体的ARMS-PCR方法的建立

本研究旨在建立一种简单、灵敏的,能检测多种NPM1突变体的方法,以降低NPM1突变的漏检率。通过构建NPM1基因野生型和最常见的突变型A、B、C、D重组质粒作为检测对象,根据NPM1不同突变体碱基排列方式不同,设计1对特异性引物,使得上游引物3'末端的碱基与突变体A、B、C、D匹配,而与野生型NPM1不匹配;通过条件优化,建立检测多种NPM1突变的ARMS-PCR的方法。通过对该方法的检测范围、灵敏度的评估及与直接测序法的比较,判断该方法的可行性。结果表明,成功构建NPM1基因野生型和突变型A、B、C、D 5种重组质粒,经测序鉴定和目的片段一致。ARMS-PCR方法可以检测到ABCD 4种突变体,检测范围在103copies/ml-109copies/ml,其灵敏度为0.01%,而当突变体含量低于10%时采用直接测序则检测不出突变。结论:本研究建立了一种可以检测NPM1 4种高频突变的ARMS-PCR方法。该方法灵敏度高,可以检出95%以上的突变,为临床检测NPM1基因突变提供一种新型的检测方法。

肺腺癌c-Src及核仁磷蛋白/B23(NPM1)蛋白的高表达与化疗疗效负相关

目的观察c-Src蛋白及核仁磷蛋白/B23(NPM1)在肺腺癌组织中的表达并探讨与化疗疗效的关系。方法选择2012-10-10/2015-06-30期间怀化市第一人民医院确诊的肺腺癌患者的肿瘤标本共107例,采用免疫组织化学染色方法检测c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达情况,分析c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达与肺腺癌发生、发展的关系,其中Ⅲ-Ⅳ期患者55例予以吉西他滨联合顺铂方案规则化疗4疗程,探讨c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达与化疗疗效的关系。结果 c-Src蛋白和NPM1蛋白在肺腺癌组织中皆为阳性表达,临床分期越高,c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达越高,同时c-Src蛋白和NPM1蛋白在肿瘤细胞的表达随分化程度的升高而降低,化疗疗效随c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达升高而降低。结论高表达c-Src、NPM1的肺腺癌化疗敏感性较差,高表达c-Src和NPM1可能与肺腺癌低分化有关。

核型正常的NPM1突变阳性的急性髓系白血病的免疫表型与临床特征分析

本研究在形态学亚型构成比例相似情况下比较具有正常核型的NPM1基因突变阳性的AML(NPM1m+AML)与突变阴性的AML(NPM1m-AML)非特指型(NOS)间的免疫表型、临床、细胞遗传学和基因表达特征。利用多参数流式细胞术进行免疫分型检测;定量PCR方法检测NPM1基因A、B、D型突变及多种基因;正常核型的NPM1m+AML并进行免疫分型患者共77例,AML NOS患者55例。结果表明:NPM1m+AML患者以女性为主,WBC和血小板计数、WT1表达水平、FLT3-ITD突变阳性率和第一疗程诱导缓解率明显高于NPM1m-AML(P<0.05)。在免疫表型方面共有10个抗原显著不同,主要为早期分化标志CD34、HLA-DR、CD117、CD38和淋系标志CD4、CD7、CD19、CD2的低表达及CD123、CD33的高表达。进一步分析NPM1m+AML中M1/2和M4/5患者的结果显示,M1/2患者保留了女性为主及WBC数和WT1表达较高的特点(P<0.05),免疫表型共有9个抗原的阳性细胞数明显不同(P<0.05),主要为包括HLA-DR内的单核细胞标志及CD7在M4/5中高表达及CD117的低表达。结论:在形态学亚型构成比例相似及正常核型情况下,NPM1m+AML高表达WT1,且具有较高的CR率,免疫表型主要表现为早期祖细胞标志、淋系标志的低表达和CD33、CD123的高表达。在NPM1m+AML中只有M4/5患者高表达单核细胞相关标志。

NPM1突变急性髓系白血病二代测序突变基因谱及共存互斥相关性分析

目的:分析NPM1突变(NPM1^(mut))急性髓系白血病(AML)患者二代测序(NGS)检测的突变基因谱及其共存互斥关系,以解释NPM1^(mut)AML的临床生物学异质性。方法:收集238例成人初诊NPM1^(mut)患者基于112种血液病相关基因的NGS资料,采用χ^(2)检验和非参数检验分析突变谱基因间分布相关性。结果:全部NPM1^(mut)患者均检出至少1个共存突变。包括NPM1^(mut),中位数突变基因个数/每例为4.5 (2-14)个。其中NPM1^(mut)/FLT3-ITD;者突变基因个数为5.0 (2-10)个,多于NPM1^(mut)/FLT3-ITD;者[4.0(2-14)个],但两者间无统计学差异(P=0.378)。全部238例NPM1^(mut)患者共检出240例NPM1突变事件,其中10个(10/240,4.2%)为错义突变,且均见于NPM1^(mut)/FLT3-ITD;者。这些错义突变绝大多数(9/10,90%)同时合并AML亚型定义的细胞遗传学或分子学异常,且均为低危(7例)或高危组(2例)。分析相对常见(突变率>5%)的NPM1^(mut)共存突变基因谱,最常见的为DNMT3A(104例,43.7%),其次为FLT3-ITD(95例,39.9%)和FAT1(57例,23.9%)。FLT3-ITD与DNMT3A间呈显著性突变共存(P=0.005)。FLT3-ITD与FLT3-nonITD(P<0.001)、NRAS(P<0.001)、PTPN11(P=0.017)以及IDH1(P=0.005)间呈显著性突变排斥,与KRAS间呈临界意义突变排斥倾向(P=0.073)。FLT3-nonITD与KRAS间(P=0.035)、NRAS与KRAS(P=0.008)和PTPN11(P=0.039)间显著性突变共存。结论:阐述NPM1^(mut)患者的临床预后时,应区别对待相对少见的错义突变类型。检测NPM1^(mut)AML突变基因谱全貌和了解突变间共存关系,为患者生物学多样性和临床异质性提供了机制解释。

过表达突变的NPM1基因对THP-1白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 mA蛋白的细胞株(THP-1 mA),同时设立空载体转染组(THP-1 C1)和未处理组(THP-1)为对照。MTT实验观察细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期和凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白(BAX和BCL-2)mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比较,实验组THP-1 mA细胞体外增殖能力明显增强(P<0.05),S期细胞比例明显增高(P<0.05),G1期细胞比例显著减低(P<0.05);而3组细胞凋亡率无显著差异,BAX,BCL-2的mRNA和蛋白表达以及BAX/BCL-2比值亦未见明显改变。结论 NPM1突变基因能够促进白血病细胞的体外增殖能力,而对白血病细胞凋亡无显著影响。

急性髓系白血病NPM1基因突变研究

核仁磷酸蛋白(NPM1)又称B23、N038,是位于核仁颗粒区的一种在各种类型的细胞中广泛表达的多功能蛋白质。目前的多项研究发现,NPM1突变在急性髓系白血病(AML)中,尤其是在正常核型AML(nk-AML)中检出率最高的一种分子遗传学异常。NPM1突变是AML一类特殊的亚群,具有相对独特的临床特点,且是AML独立的预后良好的指标。NPM1突变的研究对AML患者诊断、治疗及预后判断具有重要的临床意义。本文综述近年来AML中NPM1基因突变的发现,包括NPM1基因结构与生理功能,AML中NPM1基因突变及NPM1基因突变检测方法等问题。

伴NPM1突变急性髓系白血病二代测序突变基因谱与MICM分型特征关联性分析

目的:分析伴NPM1突变(NPM1^(mut))急性髓系白血病(AML)患者二代测序(NGS)法检测的突变基因谱与MICM特征间的关系,解释NPM1^(mut)AML的临床生物学异质性。方法:收集苏州大学附属第三医院、南京医科大学附属常州第二人民医院和浙江医院收治的成人初诊AML患者,选取NGS资料完整的NPM1^(mut)患者238例,采用χ^(2)检验和非参数检验分析NGS突变基因谱与常规MICM参数间的分布关联性。结果:全部患者共检出240个NPM1突变事件,其中10个(10/240,4.2%)为错义突变,均不累及W288或W290位点。这10例错义突变事件仅见于NPM1^(mut)/FLT3-ITD^(-)者,其中9例(90%)同时合并AML亚型定义的细胞遗传学或分子学异常,且全部为低危(7例)或高危(2例)组。NPM1^(mut)/FLT3-ITD^(+)者NPM1^(mut)仅为插入/缺失(indel)突变。NPM1^(mut)/FLT3-ITD^(-)者高危+低危组异常核型发生率显著高于NPM1^(mut)/FLT3-ITD^(+)者(6.4%vs.0,P=0.031)。NPM1^(mut)/FLT3-ITD^(+)者CD34和CD7阳性率均显著高于NPM1^(mut)/FLT3-ITD^(-)者(CD34:47.9%vs.20.6%,P<0.001;CD7:61.5%vs.29.9%,P<0.001)。Logistic多因素分析显示,FLT3-ITD独立预测CD34^(+)(OR=5.29,95%CI:2.64-10.60,P<0.001)和CD7^(+)(OR=3.47,95%CI:1.79-6.73,P<0.001)。Ras通路突变独立预测HLA-DR^(+)(OR=4.05,95%CI:1.70-9.63,P=0.002),KRAS突变独立预测MPO^(-)(OR=0.18,95%CI:0.05-0.62,P=0.007)。TET2/IDH1突变独立预测CD34^(-)(OR=0.26,95%CI:0.11-0.62,P=0.002)、CD7^(-)(OR=0.30,95%CI:0.14-0.62,P=0.001)和MPO^(+)(OR=3.52,95%CI:1.48-8.38,P=0.004)。DNMT3A-R882独立预测HLA-DR^(+)(OR=13.41,95%CI:4.56-39.45,P<0.001)和CD7^(+)(OR=3.59,95%CI:1.80-7.16,P<0.001),DNMT3A突变独立预测MPO^(-)(OR=0.35,95%CI:1.48-8.38,P=0.004)。结论:NPM1^(mut)AML共存FLT3-ITD预测CD34^(+)和CD7^(+),共存Ras通路突变预测HLA-DR^(+)和MPO^(-),共存TET2/IDH1突变预测CD34^(-)、CD7^(-)和MPO^(+),共存DNMT3A突变预测HLA-DR^(+)、CD7^(+)和MPO^(-),这为患者免疫表型异质性提供了部分机制解释。

CD13表达及其与FLT3-ITD、NPM1突变在急性髓系白血病中的研究

目的:探讨72例急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)患者CD13表达及其与FLT3-ITD、NPM1突变同步检测的临床意义,并分析FLT3-ITD、NPM1突变的关系及其与CD13表达水平的相关性。方法:收集72例AML患者病例资料,采用流式细胞仪检测72例AML患者CD13表达,PCR及Sanger测序法检测FLT3-ITD、NPM1突变。结果:72例AML患者中68例CD13表达阳性(68/72,94.44%),经诱导化疗,44例获得完全缓解(44/68,64.71%)。CD13^+与CD13-患者相比,χ~2=2.118,P=0.148,完全缓解率差异无统计学意义(P>0.05)。68例CD13^+的AML患者中,FLT3-ITD^+/NPM1^+双突变患者白细胞计数明显高于其余3组,差异均有统计学意义(P=0.000、P=0.010、P=0.000),而完全缓解率明显低于FLT3-ITD^-/NPM1^+与FLT3-ITD^-/NPM1^-组,差异有统计学意义(χ~2=8.400,P=0.000;χ~2=8.880,P=0.000)。FLT3-ITD^+/NPM1^-患者中位生存期仅为24个月,较FLT3-ITD^-/NPM1^+与FLT3-ITD^-/NPM1^-患者,生存期更短。FLT3-ITD^-/NPM1^+患者的平均年龄、白细胞计数及血红蛋白均高于FLT3-ITD^+/NPM1^-患者(P=0.030;P=0.000;P=0.040),白细胞计数及血红蛋白均高于FLT3-ITD^-/NPM1^-患者(P=0.020;P=0.00),完全缓解为85.71%,明显高于FLT3-ITD^+/NPM1^+和FLT3-ITD^+/NPM1^-患者(χ2=8.40,P=0.000;χ2=13.45,P=0.000),中位生存期为41个月(95%CI=34.4~47.6个月),较FLT3-ITD^+/NPM1^+和FLT3-ITD^+/NPM1^-患者生存期长,提示NPM1突变患者预后良好。结论:68例CD13^+患者中,FLT3-ITD^+/NPM1^+双突变患者具有高白细胞数和低CR率;FLT3-ITD^+/NPM1^-患者生存期短;FLT3-ITD^-/NPM1^+患者诱导缓解率高,FLT3-ITD^+/NPM1^-较低。对于AML患者,提示可以同时分析CD13表达及FLT3-ITD和NPM1突变的情况,为AML的相关治疗提供一个更好的思路。