1645 nm单纵模NPRO激光器短期频率稳定度的测量

利用光纤延时自外差法对单块非平面Er∶YAG环形振荡器(NPRO)输出单纵模激光的短期频率稳定度进行了测量。激光器输出波长为1645 nm。测量了延时时间分别为0.25μs,0.75μs,1.25μs,1.75μs,2.25μs,2.75μs,5.25μs,7.25μs,9.75μs,108.5μs,166μs的输出激光的自外差拍频信号。设置频谱仪的span为20 k Hz,扫描时间为10 s,Res BW为51 Hz,VBW为1 Hz,测量拍频信号的3 d B带宽。在延时时间0.25~9.75μs范围内,通过线性拟合在不同延时下的3 d B带宽,得到单纵模NPRO激光器的短期频率稳定度为201 Hz/μs。光纤延时长度为21.7 km和33.2 km时,测量的3 d B带宽约为14 k Hz。

胃癌高发区人群胃粘膜病变与NPRO合成的相关研究

为检验N-亚硝基化合物与胃癌及癌前病变的关系,本研究以山东牟平县高陵镇经胃镜筛检查出的胃癌及慢性胃炎患者为研究对象,对其空腹胃液PH值、亚硝酸盐浓度及24小时尿液N-亚硝基脯氨酸(NPRO)排出量进行了测定。结果显示,胃液PH值及亚硝酸盐浓度与胃粘膜病变程度呈正相关关系,而未见尿液N-亚硝基脯氨酸的排出量与胃粘膜病变有显著关联。

余甘子对强致癌物N-亚硝基化合物在人体内合成的阻断作用

本文采用Ohshima的方法,以尿中N-亚硝基脯氨酸(NPRO)量为指标,研究了余甘子果汁阻断人体内N-亚硝基化合物(NNC)的合成。12名志愿者摄入L-脯氨酸500 mg和硝酸钠300 mg后,尿中NPRO的量平均为75.10 nmol,而当摄入上述两种药物的同时,分别给予同浓度的抗坏血酸和余甘子果汁后,尿中NPRO的含量则分别降为41.08 nmol和20.79nmol,且后者此本底值(25.55 nmol)还低。表明在本实验条件下,摄入含抗坏血酸75mg的余甘子果汁13ml,即能完全阻断500mg L-脯氨酸和300mg硝酸钠在人体内所引起的NPRO的合成。同时也证明,余甘子果汁能有效地阻断人体内NNC的合成。

应用酵母双杂交方法筛选与猪瘟病毒N^(pro)蛋白相互作用的宿主蛋白

为研究猪瘟病毒(CSFV)与宿主细胞间的相互作用,本研究采用酵母双杂交方法以猪瘟病毒Npro蛋白为诱饵,从猪外周血单个核细胞(PBMC)cDNA表达文库中筛选与之相互作用的蛋白,经共转化试验表明,共筛选到12个与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,应用Cytoscape 2.8.2软件绘制了蛋白质间相互作用关系图,根据GO分析结果,这些蛋白分别参与细胞代谢、细胞生长、免疫等过程,经双分子荧光互补(BiFC)试验表明筛得的部分宿主蛋白与CSFV Npro具有相互作用。本研究中筛选得到的蛋白质对CSFV复制的影响有待进一步深入研究。

猪瘟病毒N^(pro)基因的克隆表达

为了得到一个表达Npro蛋白的真核表达载体,从而为下一步研究不同时间段细胞主要组织相容性复合体(MHC)表达的变化情况,从分子水平上说明Npro与MHC之间的关系,本研究应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对猪瘟病毒石门毒株Npro基因进行了克隆和测序,结果得到了长度为592 bp的目的片段。用BamHⅠ和XhoⅠ限制性内切酶分别对重组克隆质粒和转移载体pcDNA3.0进行双酶切,回收目的基因DNA片段,将目的基因Npro亚克隆至真核转移载体pcDNA3.0中,经双酶切和序列测定鉴定插入基因和连接方向正确,得到含完整Npro基因的重组载体质粒P-Npro。构建成功的真核表达载体以脂质体介导的转染方法将此重组载体质粒转染PK-15细胞,转染24和48 h后检测表达情况。经Western-blot方法检测表明,此Npro蛋白在PK-15细胞中正确表达。

余甘子果汁和粉末阻断大鼠体内N—硝亚基脯氨酸合成

本文报导余甘子果汁、余甘子果粉末对体内 N-亚硝基脯氨酸(NPRO)合成的阻断效果。研究对象为14只雄性 Wistar 大鼠,以自身对照分期观察。大鼠实验表明,余甘子果汁、余甘子粉末可阻断体内 NPRO 合成,阻断率分别为100%、96.29%,且效果优于同浓度维生素 C 溶液。

余甘子对强致癌物质N——亚硝基化合物合成的阻断作用(二)

本文采用Ohshima 1981年建立的定量研究体内亚硝化的方法,研究了余甘子果汁在大鼠体内对N—亚硝基化合物合成的阻断作用。实验在给予大鼠能在体内合成N—亚硝基化合物的两种前体物——L-脯氨酸和亚硝酸钠的同时,分别给予同浓度的抗坏血酸和余甘子果汁后,收集24小时的尿液,用气相色谱—热能分析仪测定处理后的NPRO甲酯。结果表明,余甘子果汁能有效地阻断动物体内NPRO的合成,其阻断率明显地优越于抗坏血酸,从而提示出余甘子果汁除所含的抗坏血酸外,还有其它成份能阻断前体物在动物体内的亚硝化反应。

表达增强型绿色荧光蛋白的报告猪瘟病毒C株的构建及在家兔中生物学特性评价

猪瘟兔化弱毒疫苗C株是我国自主研发的,用于预防猪瘟(CSF)的最好弱毒活疫苗。然而,现阶段的C株不具备标记功能,无法区分野毒感染与疫苗接种。本研究旨在将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因插入猪瘟病毒(CSFV)C株将其构建为报告病毒,为C株的基础研究提供病毒示踪工具,同时提供构建标记C株疫苗的方法。本研究中,笔者在CSFV C株中引入EGFP基因,分别构建了表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报告CSFV rHCLV-EGFP,以及用CSFV强毒Shimen(SM)株Npro基因替换C株Npro基因后再引入EGFP基因的嵌合报告病毒rHCLV-Npro(SM)-EGFP。通过猪瘟抗原ELISA检测,直接观察荧光及Western blot检测EGFP的蛋白表达等方法对拯救的病毒进行鉴定,并在细胞和家兔上评价这两株病毒的生物学特性。结果显示,两株报告病毒的抗原ELISA结果均为阳性;在感染rHCLV-EGFP的细胞中并未观察到绿色荧光也未检测到EGFP蛋白,但在感染rHCLV-Npro(SM)-EGFP的细胞中观察到EGFP的绿色荧光并检测到EGFP蛋白;细胞试验结果表明,两株报告病毒与亲本病毒具有相似的生长特性且遗传稳定;家兔试验发现,rHCLV-Npro(SM)-EGFP保留了C株的在家兔体内的生物学特性,但rHCLV-EGFP失去了C株诱导家兔定型热反应的能力。构建的嵌合报告病毒rHCLV-Npro(SM)-EGFP可以作为C株的报告病毒进行应用:可以对病毒示踪,用于研究C株的复制过程、病毒与细胞的相互作用;同时,该嵌合报告病毒也具备发展为标记C株疫苗的潜力。

猪瘟病毒N^(pro)蛋白与宿主蛋白β-actin相互作用的鉴定

为研究与猪瘟病毒(CSFV)Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法从猪外周血单个核细胞cDNA表达文库中筛选获得与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白β-actin,经共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者存在特异的相互作用,激光共聚焦试验显示两者共定位于细胞浆。本研究表明Npro蛋白与宿主细胞β-actin蛋白存在相互作用的关系。

蔷薇果汁、果汁可乐、桔皮粉阻断大鼠体内N-亚硝基脯氨酸合成

探讨了蔷薇果汁、果汁可乐、桔皮粉对大鼠体内N-亚硝基脯氨酸合成的影响。蔷薇果汁、果汁可乐、桔皮粉可阻断体内N-亚硝基脯氨酸合成,阻断率分别是96．36%、87．99%、65．52%。

新疆南疆地区某规模牛场牛病毒性腹泻病毒检测及基因分型

为掌握新疆南疆某规模牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染的基因型,将该规模牛场所采集的血清样本经BVDV抗原ELISA检测阳性后作为PCR检测样本,针对BVDV基因组中5′-UTR、N^(pro)基因设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,然后将目的基因进行测序、BLAST比对和序列分析,并构建系统发育树。结果显示,该规模牛场4份样本皆为BVDV-1c型。本研究结果为南疆规模牛场制定科学合理的牛病毒性腹泻防控措施以及选择相应疫苗提供了理论参考。

宿主TRIM56蛋白与猪瘟病毒N^(pro)蛋白的相互作用及其对猪瘟病毒复制的影响

目的分析宿主TRIM56蛋白与猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)N^(pro)蛋白之间的相互作用,并检测TRIM56对CSFV增殖的影响。方法 siRNA干扰法下调细胞中TRIM56表达后接种CSFV,利用Western blot及荧光定量RT-PCR法检测TRIM56表达下调对CSFV增殖的影响;利用免疫共沉淀技术(Co-IP)和Western blot法分析TRIM56与N^(pro)之间的相互作用关系;利用激光共聚焦试验检测TRIM56与N^(pro)共定位于细胞内的具体位置。结果下调TRIM56表达后接种CSFV,细胞中CSFV基因组拷贝数和滴度均明显升高。TRIM56与N^(pro)能特异性相互作用,并共定位于HEK 293T细胞的胞桨内。结论宿主TRIM56蛋白与CSFV的N^(pro)蛋白存在相互作用,并且能够负调控CSFV的增殖。

猪瘟病毒蛋白E2、N^(pro)基因的克隆表达及纯化

克隆了猪瘟病毒(CSFV)石门株E2和Npro基因,并分别插入pGEX-6p-1表达载体中,构建了原核重组表达质粒。经IPTG诱导后,应用SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组质粒均得以成功表达。使用超声法破碎菌体获得蛋白,将带有GST标签的融合蛋白进行亲和层析,其中E2和Npro的表达形式分别为包涵体表达和可溶性蛋白表达。将E2变性后重折叠,应用亲和层析法纯化蛋白,Western blot检测发现CSFV蛋白E2能够被CSFV阳性血清识别,具有良好的反应原性,而Npro不能与CSFV阳性血清反应。