大鼠脊髓缺血再灌注损伤后钙敏感受体的表达变化及其抑制剂NPS2390的作用

目的:探讨大鼠脊髓缺血再灌注损伤后钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)的表达变化以及CaSR抑制剂NPS2390对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响。方法:将48只SD大鼠随机分成假手术组(n=16),模型组(n=16)和NPS2390组(n=16)。假手术组仅开腹,不夹闭腹主动脉;模型组阻断腹主动脉30 min后再灌注;NPS2390组在建模前2 d尾静脉注射CaSR抑制剂NPS2390。每组按术后6、12、24 h和48 h细分为4个亚组。各组分别行BBB评分评判大鼠后肢运动功能,蛋白质印迹及免疫组织化学测定CaSR表达变化,TUNEL染色检测大鼠脊髓组织细胞凋亡情况。结果:模型组及NPS2390组BBB评分均明显低于假手术组(P <0. 05),NPS2390组各时间点评分高于模型组(P <0. 05)。蛋白质印迹结果显示,假手术组各时间点CaSR蛋白表达无明显差异(P>0. 05);与假手术组相比,模型组6～24 h CaSR表达量随时间延长增加,24 h表达最高,但NPS2390组低于模型组(P <0. 05);免疫组化结果与其一致。假手术组未见明显凋亡细胞;模型组各时间点细胞凋亡数均高于NPS2390组(P <0. 05),两组24、48 h细胞凋亡数均高于同组6 h和12 h(P <0. 05),24 h与48 h间细胞凋亡数差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:大鼠脊髓缺血再灌注损伤后CaSR表达逐渐升高,24 h为高峰; CaSR抑制剂NPS2390对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用。

不同剂量钙敏感受体抑制剂对磨损颗粒诱导小鼠骨溶解及炎症因子表达的影响

目的观察不同剂量钙敏感受体抑制剂对磨损颗粒诱导的骨溶解及炎症因子表达的影响,从而探讨其防治人工关节无菌性松动的作用。方法将40只8~10周龄C57BL/6J雄性小鼠采用随机数字表法分成空白对照组、颗粒组、低剂量组、高剂量组,每组10只。颗粒组、低剂量组、高剂量组小鼠建立磨损颗粒诱导骨溶解颅骨模型,空白对照组进行假手术处理。术后第2天开始,低剂量组、高剂量组小鼠分别隔日给予0.2、2.0 mg/kg钙敏感受体抑制剂NPS2390腹腔注射进行干预;空白对照组、颗粒组给予等量生理盐水替代。14 d后,取颅骨标本,比较各组间颅骨骨矿物质密度、骨体积分数、骨孔隙率、颅骨骨面积、破骨细胞数量及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)表达量。结果颗粒组破骨细胞数、骨孔隙率、炎症因子TNF-α和IL-1β表达量高于空白对照组,而颅骨骨矿物质密度、骨体积分数及骨面积低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量组骨矿物质密度高于颗粒组,破骨细胞数、炎症因子TNF-α和IL-1β表达量低于颗粒组,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组颅骨骨矿物质密度、骨体积分数及骨面积高于颗粒组,颅骨骨孔隙率、破骨细胞数、炎症因子TNF-α和IL-1β表达量低于颗粒组,差异有统计学意义(P<0.05)。高剂量组的颅骨骨矿物质密度和骨体积分数高于低剂量组,破骨细胞数及炎症因子TNF-α和IL-1β表达量低于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论敏感受体抑制剂(NPS2390)可有效抑制磨损颗粒诱导的骨溶解及炎症因子表达,为人工关节无菌性松动防治提供新思路。

钙敏感受体抑制剂对创伤性颅脑损伤大鼠神经元凋亡的作用研究

目的 探索钙敏感受体抑制剂在创伤性颅脑损伤大鼠模型中对神经元凋亡的影响。方法 采用皮层定位精度撞击器进行大鼠的TBI造模;将大鼠随机分为对照组,TBI+溶剂组和TBI+钙敏感受体拮抗剂(NPS2390)组。通过mNSS对大鼠的神经功能进行评分;在TBI后24小时取脑,将全脑进行湿重与干重的称重,计算脑水肿程度;通过Western blot检测蛋白的表达水平。结果 TBI后溶剂组相比对照组,其脑水肿程度显著增加(80.03%vs 79.22%,P=0.018),神经功能评分显著下降(8.3vs 1.0,P=0.014),给予NPS2390后,可以降低TBI后脑水肿程度(79.38%vs 80.03%,P=0.029)及逆转神经功能评分下降(6.1vs 8.3,P=0.040)。TBI会导致神经元凋亡水平增加(55.3%vs 1.1%,P=0.006),cleaved caspase-3蛋白表达水平增加(2.71vs1.0,P=0.033),而NPS2390可以降低TBI神经元凋亡水平(30.2%vs 55.3%,P=0.031),相比TBI+溶剂组显著降低cleaved caspase-3的表达水平(1.52vs 2.71,P=0.041)。TBI还会降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(0.42vs1.0,P=0.035),增加促凋亡蛋白Bax的表达水平(1.89vs 1.0,P=0.021),增加细胞色素C的释放到胞浆的水平(2.89vs 1.0,P=0.019),给予NPS2390后,与TBI+溶剂组相比,Bcl-2表达增加(0.65vs 0.42,P=0.042),Bax表达水平增加(1.22vs 1.89,P=0.033),释放到胞浆中的细胞色素C降低(1.41vs 2.89,P=0.022)。结论 通过NPS2390抑制钙敏感受体可以减轻大鼠TBI后的神经元凋亡,对TBI起到保护作用。

NPS 2390对氧化型低密度脂蛋白诱导的A7r5细胞增殖的影响

目的研究钙敏感受体(CaSR)拮抗剂NPS 2390对氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)诱导的大鼠主动脉平滑肌(A7r5)细胞增殖能力的影响。方法用OxLDL处理A7r5细胞24 h诱导增殖,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Western blot法检测CaSR的表达以及PI3K/Akt通路的活化情况。结果与对照组相比,OxLDL促进了A7r5细胞CaSR表达(P<0.05);MTT结果显示,OxLDL促进了A7r5细胞的增殖(P<0.05),而这一作用被CaSR拮抗剂NPS 2390所抑制(P<0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,OxLDL组p-Akt蛋白表达增加(P<0.01),而NPS 2390预处理细胞抑制了OxLDL诱导的p-Akt蛋白表达(P<0.05);与OxLDL组相比,给予LY294002(PI3K抑制剂)抑制了OxLDL诱导的A7r5细胞的增殖(P<0.05)。结论 NPS 2390通过调控CaSR/PI3K/Akt通路抑制OxLDL诱导的A7r5细胞增殖。