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利用转基因标记NPTⅡ快速、规模化纯合转基因番茄 被引量:16
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作者 欧阳波 龙芳 +1 位作者 张扬勇 叶志彪 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2006年第1期12-16,共5页
利用卡那霉素喷施方法对带有NPTⅡ标记基因和双价外源基因(烟草渗调蛋白基因AP24和菜豆几丁质酶基因Chi)的转基因番茄的3个世代在温室或田间环境进行规模化筛选,成功获得8个单拷贝转基因纯合植株。含有单个拷贝NPTⅡ标记基因的转基因株... 利用卡那霉素喷施方法对带有NPTⅡ标记基因和双价外源基因(烟草渗调蛋白基因AP24和菜豆几丁质酶基因Chi)的转基因番茄的3个世代在温室或田间环境进行规模化筛选,成功获得8个单拷贝转基因纯合植株。含有单个拷贝NPTⅡ标记基因的转基因株系后代,对卡那霉素的抗感分离符合3∶1的孟德尔分离比例,T2代中一些株系表现为对卡那霉素全抗,表明这些株系的外源基因已经纯合,这一结果在T3代中进一步得到证实。但对于含有两个拷贝外源基因的转基因株系,外源基因的遗传则比较复杂。同时,结合Km喷施和多重PCR技术对外源基因的异常遗传进行了初步分析。用PCR分析进一步证实了该方法的准确性,该方法是对转基因番茄进行大规模、快速遗传分析的理想方法。 展开更多
关键词 npt 卡那霉素 多重PCR 转基因番茄 遗传分析
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带npt-Ⅱ基因转基因水稻快速检测技术的建立 被引量:14
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作者 王紫萱 易自力 +4 位作者 王志成 蒋建雄 覃静萍 张昊 谭炎宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期499-507,共9页
以转溶菌酶基因水稻纯系材料中花9号(ZH9(R))及其受体品种中花9号(ZH9(CK))为材料,以ZH9(R)中携带的npt-Ⅱ基因作为辅助筛选标记,利用抗生素对其进行处理,建立了一套快速检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的技术体系。使用不同浓度的卡那霉素(... 以转溶菌酶基因水稻纯系材料中花9号(ZH9(R))及其受体品种中花9号(ZH9(CK))为材料,以ZH9(R)中携带的npt-Ⅱ基因作为辅助筛选标记,利用抗生素对其进行处理,建立了一套快速检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的技术体系。使用不同浓度的卡那霉素(Kanamycin,Kan)和G418溶液将ZH9(R)和ZH9(CK)成株离体叶片于室内室温下置于培养皿中浸泡处理,通过观察叶片变化,确定G418为检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的最佳抗生素,将G418(溶液)80mg/L浓度(处理4天)作为检测该类转基因水稻成株离体叶片的临界浓度。进一步用G418对ZH9(R)和ZH9(CK)种子、幼胚和幼苗进行了不同处理。确定:(1)G418(溶液)300mg/L浓度(处理7天)作为检测该类转基因水稻种子的临界浓度;(2)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)200mg/L浓度(处理10天)作为检测该类转基因水稻幼胚的临界浓度;(3)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)150mg/L浓度(处理12天)作为检测该类转基因水稻幼苗的临界浓度,并且通过PCR方法证实了上述结论。将这些结论应用于ZH9(R)转育后代叶片、种子、幼胚和幼苗群体的检测,检测效果都非常明显。这为带npt-Ⅱ基因转基因水稻建立了一套简便、直观且准确的检测方法。 展开更多
关键词 转基因水稻 npt-基因 G418 快速检测
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转基因抗虫棉叶围卡那霉素抗性细菌种群动态及nptⅡ基因漂移研究 被引量:14
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作者 邓欣 赵廷昌 高必达 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2488-2494,共7页
【目的】研究转基因抗虫棉叶围卡那霉素抗性细菌的种群动态变化,并监测nptⅡ基因向叶围细菌漂移的情况。【方法】采用常规培养的方法分析转基因抗虫棉33B、SGK321和GK12、受体棉33、石远321和泗棉3号叶围具有卡那霉素抗性的细菌在整个... 【目的】研究转基因抗虫棉叶围卡那霉素抗性细菌的种群动态变化,并监测nptⅡ基因向叶围细菌漂移的情况。【方法】采用常规培养的方法分析转基因抗虫棉33B、SGK321和GK12、受体棉33、石远321和泗棉3号叶围具有卡那霉素抗性的细菌在整个生育期的种群动态变化,并以质粒pBI121为对照,根据nptⅡ基因设计特异性引物,采用菌落PCR方法对分离的叶围卡那霉素抗性细菌进行nptⅡ基因漂移监测。【结果】6个棉花品种的叶围卡那霉素抗性细菌总数量和群落多样性指数随着时间的变化,在同一棉花品种不同采样时间之间差异显著,而同一采样时间抗虫棉和对应的受体棉间多数差异不显著。在转基因抗虫棉品种SKG321,GK12及受体棉泗棉3号的叶围细菌中发现阳性片段。【结论】叶围卡那霉素抗性细菌的总数量及群落多样性指数在抗虫棉与对应的受体棉之间多数差异不显著。转基因抗虫棉中的nptⅡ基因可能向叶围细菌漂移。 展开更多
关键词 转基因抗虫棉 叶围细菌 卡那霉素抗性 种群 npt
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NPTⅡ基因和GUS基因在小麦遗传转化中的应用 被引量:4
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作者 张文蔚 成卓敏 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期48-50,共3页
对小麦遗传转化上常用的选择标记基因NPTⅡ的选择剂及GUS基因在幼胚愈伤组织中的转移进行了研究。结果表明用G418作为选择剂,浓度为20-30 mg/L较为合适。幼胚愈伤组织与农杆菌共培养3 d后,即可检测到GUS基因的瞬时表达。农杆菌LBA4404... 对小麦遗传转化上常用的选择标记基因NPTⅡ的选择剂及GUS基因在幼胚愈伤组织中的转移进行了研究。结果表明用G418作为选择剂,浓度为20-30 mg/L较为合适。幼胚愈伤组织与农杆菌共培养3 d后,即可检测到GUS基因的瞬时表达。农杆菌LBA4404由500 mg/L羧卞青霉素抑制;EHA105、AGLI由500 mg/L头孢霉素抑制。而不能用卡那霉素。 展开更多
关键词 npt基因 GUS基因 小麦 遗传转化 幼胚愈伤组织 农杆菌介导
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NPTⅡ蛋白质在转基因水稻中的表达特征研究 被引量:5
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作者 兰金苹 武鹏程 +11 位作者 郭美岑 史佳楠 韦汉福 荣瑞娟 郝育杰 杨烁 白影影 李莉云 吴琳 刘斯奇 尹长城 刘国振 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第3期268-276,共9页
nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶,是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一.本研究中,表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质,制备了单克隆抗体,建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法,调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征,包括遗... nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶,是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一.本研究中,表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质,制备了单克隆抗体,建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法,调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征,包括遗传特征、表达时空特征、表达丰度和亚细胞定位等.结果表明,该方法可检测到单粒稻米的0.25%(约0.025 mg)样品中的NPTⅡ蛋白质,NPTⅡ的表达符合显性遗传规律,根据NPTⅡ的表达可对转基因T1代种子进行阴阳性及纯合株系的鉴定,对T1幼苗中NPTⅡ丰度的分析可为纯合单株的鉴定提供参考信息.定量分析表明苗期叶片中NPTⅡ蛋白质的含量约为鲜重的0.08‰.在Ca MV-35S启动子驱动下NPTⅡ蛋白质在水稻苗期、成株期的叶片和根部组织中表达量较高,而在分蘖期、孕穗期较低,NPTⅡ在不同时期的根、茎、叶、穗子、花及种子等组织中均有表达,只是在分蘖节、茎节、穗轴和花药等组织中表达量相对较低.此外,NPTⅡ蛋白质的表达主要定位在细胞质中.综上所述,本研究建立了具有应用价值的检测NPTⅡ蛋白质的免疫印记方法并系统揭示了其在水稻中的表达特征. 展开更多
关键词 转基因水稻 CaMV-35S启动子 npt蛋白质 免疫印迹技术
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转基因棉花中选择性标记基因nptⅡ对土壤微生物的影响 被引量:5
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作者 刘华 常晓蕾 +5 位作者 蒋玮 王金斌 白蓝 吴蔚 郑曙峰 唐雪明 《上海农业学报》 CSCD 2017年第2期7-12,共6页
选取华东地区种棉大省共计14个布控点,在长期种植转基因棉花的农业地块于花铃期和收获期进行土壤样品采集,并根据nptⅡ基因设计4对引物,对土壤微生物DNA进行PCR扩增,检测选择性标记基因nptⅡ对土壤中微生物的影响。结果表明:210个土壤... 选取华东地区种棉大省共计14个布控点,在长期种植转基因棉花的农业地块于花铃期和收获期进行土壤样品采集,并根据nptⅡ基因设计4对引物,对土壤微生物DNA进行PCR扩增,检测选择性标记基因nptⅡ对土壤中微生物的影响。结果表明:210个土壤样品中均无目的条带出现。 展开更多
关键词 转基因棉花 基因漂移 npt 土壤微生物
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转基因抗虫棉Bt基因与nptⅡ基因的遗传与表达 被引量:1
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作者 闫喜中 张锐 +3 位作者 孟志刚 孙国清 周涛 郭三堆 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期161-163,共3页
采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。B... 采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。Bt基因与npt Ⅱ基因均整合进了棉花基因组中,相互之间紧密连锁遗传,均稳定表达,因此报告基因npt Ⅱ可用于研究Bt基因的遗传情况。 展开更多
关键词 BT基因 npt基因 遗传 表达
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Gus基因在转基因棉花细胞中的表达及其与NPTⅡ基因、Bt基因表达的相关性 被引量:6
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作者 孟钊红 焦改丽 +1 位作者 张换样 李燕娥 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期243-246,共4页
通过农杆菌介导法将含有 Gus基因、NPT 基因、Bt基因的 Ti质粒转入棉花细胞中 ,用Gus组织化学检测法检测转化愈伤组织、再生棉株 R0 、R1和 R2 代植株组织细胞中的 Gus基因表达的水平 ,并用 NPT 活性速测法和室内生物测虫法检测三个外... 通过农杆菌介导法将含有 Gus基因、NPT 基因、Bt基因的 Ti质粒转入棉花细胞中 ,用Gus组织化学检测法检测转化愈伤组织、再生棉株 R0 、R1和 R2 代植株组织细胞中的 Gus基因表达的水平 ,并用 NPT 活性速测法和室内生物测虫法检测三个外源基因在 R0 、R1和 R2 代植物植株组织中的表达情况 ,分析三者存在及表达的相互关系。结果表明 ,Gus基因在转化愈伤组织细胞有丝分裂增殖过程中能稳定遗传给后代细胞。转化棉株 R0 、R1和 R2 代 Gus活性、NPT 活性、抗虫性三者有一定的相关性但不完全是共表达的 。 展开更多
关键词 转基因棉花 农杆菌介导 GUS基因 基因表达 npt基因 BT基因 相关性 协同性
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nptⅡ::mgfp5融合基因的构建及其在柑桔遗传转化中的应用 被引量:2
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作者 刘小丰 彭爱红 +4 位作者 许兰珍 邹修平 朱世平 赵晓春 陈善春 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第7期1282-1287,共6页
早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸... 早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸,作为表达载体p1301NG的选择标记和报告基因。通过农杆菌介导法转化锦橙上胚轴,再生培养1周后用体式荧光显微镜观察外植体的再生情况。在再生培养第9天时即观察到GFP荧光再生芽的形成,再生培养后10~15 d是GFP再生芽形成的高峰期。GUS染色和PCR分子检测结果证明,GFP荧光检测结果是真实可靠的。研究结果表明:nptⅡ::mgfp5融合基因能够在再生培养早期筛选到阳性转化芽,有助于提高阳性转化芽的存活率,提高柑橘遗传转化效率。 展开更多
关键词 npt mgfp5融合基因 柑橘遗传转化 GFP荧光 转化效率
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以nptⅡ为选择标记基因的转基因小麦高效筛选方法 被引量:2
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作者 李淑洁 王红梅 +2 位作者 张正英 杨随庄 倪建福 《甘肃农业科技》 2008年第5期5-8,共4页
采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时(A方法),50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进... 采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时(A方法),50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进行卡那霉素滴注筛选时(常规方法,B方法),80~100 mg/L的卡那霉素能较好地抑制非转化小麦幼苗的正常生长。相对于B方法的常规筛选方法,A方法具有材料对卡那霉素敏感性高、筛选周期短而且筛选结果可靠性高等优点,是一种高效的以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦的筛选方法。 展开更多
关键词 npt选择标记基因 卡那霉素 转基因小麦 高效 筛选方法
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壳聚糖DNA电化学生物传感器的伏安法研究以及对NPT Ⅱ基因的检测 被引量:1
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作者 任勇 《枣庄学院学报》 2019年第2期15-21,共7页
将十八碳酸作为修饰剂制得性质改良的碳糊电极,利用壳聚糖与羧基的静电作用在电极表面修饰一层天然阳离子聚合物壳聚糖膜,进而进行DNA探针的固定和靶DNA的杂交.以亚甲基蓝(MB)为杂交指示剂用循环伏安法(CV)优化了DNA的固定和杂交条件.... 将十八碳酸作为修饰剂制得性质改良的碳糊电极,利用壳聚糖与羧基的静电作用在电极表面修饰一层天然阳离子聚合物壳聚糖膜,进而进行DNA探针的固定和靶DNA的杂交.以亚甲基蓝(MB)为杂交指示剂用循环伏安法(CV)优化了DNA的固定和杂交条件.用该电化学生物传感器以微分脉冲伏安法检测了转基因油菜外源NPTⅡ基因,性能良好. 展开更多
关键词 DNA电化学生物传感器 碳糊电极 壳聚糖 伏安法 npt 基因
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应用G418催芽胁迫体系鉴定携带npt-Ⅱ基因的转育水稻纯系的研究 被引量:1
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作者 谭炎宁 蒋建雄 +4 位作者 段美娟 曾慧杰 肖亮 覃静萍 易自力 《湖南农业科学》 2009年第7期1-4,共4页
研究了G418胁迫条件下转育后代的发芽特性和长根类比率,筛选获得了高抗G418的抗性株系,并进行其npt-Ⅱ基因及目的基因的检测与遗传分析。结果表明,转育株系如BM-3、BM-10、BM-13具有高发芽率(>90%)、高生根率(>95%)、低死亡率(<... 研究了G418胁迫条件下转育后代的发芽特性和长根类比率,筛选获得了高抗G418的抗性株系,并进行其npt-Ⅱ基因及目的基因的检测与遗传分析。结果表明,转育株系如BM-3、BM-10、BM-13具有高发芽率(>90%)、高生根率(>95%)、低死亡率(<10%)和高长根比率(约为90%),经PCR结果发现这些株系内各单株都含有npt-Ⅱ基因及溶菌酶基因,确为转基因纯合体。进一步证实了G418胁迫催芽技术是可行和实用的,对于npt-Ⅱ基因转育纯系的筛选有重要意义。 展开更多
关键词 G418 npt-基因 纯合体 催芽胁迫体系
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NPTⅡ基因在满江红鱼腥藻染色体DNAglnA位点的定点整合及对泌氨和细胞形态结构的影响
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作者 吴晓强 施定基 +5 位作者 刘祥林 汪洪杰 邱泽生 张承谦 印莉萍 赵微平 《首都师范大学学报(自然科学版)》 1993年第4期27-33,共7页
本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化... 本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化学测氨法表明,培养后7~14d泌氨达到高峰,转化细胞泌氨比对照高40%。光镜观察表明,转化细胞藻丝变短,易断成单个细胞,异形胞频率降低;扫描电镜观察指出,转化细胞外壁有鳞片状鞘层,而对照较光滑。 展开更多
关键词 满江红鱼腥藻 nptII基因 glnA 定点整合 泌氨 细胞形态结构
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nptⅡ基因在芥菜型油菜中的遗传规律
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作者 董五辈 李学宝 +1 位作者 金 波 陈光荣 《河南科学》 1996年第S1期41-45,共5页
研究了转基因油菜R0、R1、R2代的Km抗性。试验结果表明:芥菜型油菜R0的1,5,6,7,8,10号无性系可抗Km50mg/L,其余的均抗Km35mg/L。R1种子在Km20mg/L的生根培养基上进行生根抗性试验,... 研究了转基因油菜R0、R1、R2代的Km抗性。试验结果表明:芥菜型油菜R0的1,5,6,7,8,10号无性系可抗Km50mg/L,其余的均抗Km35mg/L。R1种子在Km20mg/L的生根培养基上进行生根抗性试验,生根与不生根的比例经适合性检验(x2检验)有10个无性系符合孟德尔单基因分离的遗传规律,只有两个无性系不符合这一规律,出现了较高的抗性苗比例(34:2;40:6)。R2代共做了7个单株的种子抗性试验,其中6个单株的种子出现3:1的分离比,一个单株没有发生分离,种子全部可抗Km。 展开更多
关键词 芥菜型油菜 npt基因 遗传规律
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3种筛选NPT-Ⅱ标记转基因油菜方法研究 被引量:4
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作者 韦献雅 牛应泽 张其坤 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第14期37-41,共5页
为获得一种简便的筛选含有NPT-Ⅱ标记基因的转基因油菜种子的方法,对卡那霉素溶液叶片涂抹法、种子浸泡法以及卡那霉素MS培养基筛选3种方法进行研究。结果表明,3种筛选方法的最佳卡那霉素选择压为200mg/L;涂抹叶片法4~5天可以明显识别... 为获得一种简便的筛选含有NPT-Ⅱ标记基因的转基因油菜种子的方法,对卡那霉素溶液叶片涂抹法、种子浸泡法以及卡那霉素MS培养基筛选3种方法进行研究。结果表明,3种筛选方法的最佳卡那霉素选择压为200mg/L;涂抹叶片法4~5天可以明显识别植株对卡那霉素抗性与否,此法筛选到的4株植株PCR检测全部呈阳性,可靠性达100%;浸泡种子法2~3天可以明显识别植株对卡那霉素抗性与否,此法筛选到的5株植株PCR检测全部呈阳性,可靠性100%;MS培养基筛选法一般10天可以明显识别植株对卡那霉素抗性与否,此法筛选到20株植株,移栽后存活5株,PCR检测3株呈阳性,2株是假阳性植株,可靠性为60%。因此,可以认为卡那霉素涂抹叶片和浸泡种子两种方法是转基因油菜进行大规模、快速的筛选及后代的遗传分析的理想方法。 展开更多
关键词 油菜 转基因植株 npt-II 筛选方法
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nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中转化效率的研究 被引量:1
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作者 何丹丹 邹修平 +4 位作者 解栋梁 彭爱红 许兰珍 何永睿 陈善春 《中国南方果树》 北大核心 2014年第6期1-4,23,共5页
绿色荧光蛋白基因(gfp)和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)被广泛应用于植物的遗传转化中。为了研究融合标记基因nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中的转化效率,经农杆菌介导法将CaMV35s组成型启动子驱动的nptⅡ::gfp融合标记基因表达载体pNGM和由C... 绿色荧光蛋白基因(gfp)和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)被广泛应用于植物的遗传转化中。为了研究融合标记基因nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中的转化效率,经农杆菌介导法将CaMV35s组成型启动子驱动的nptⅡ::gfp融合标记基因表达载体pNGM和由CaMV35s启动子分别驱动nptⅡ、gfp两个基因的表达载体pNPTⅡ-GF转化至锦橙上胚轴内。GFP绿色荧光检测结果显示,gfp在转nptⅡ::gfp融合基因植株中强烈表达,荧光强度与转非融合nptⅡ和gfp基因植株的表达水平相当。nptⅡ::gfp融合标记基因在锦橙上的转化效率为10.8%,与非融合nptⅡ和gfp基因的转化效率(11.0%)无明显差异。nptⅡ::gfp融合标记基因是一个有效的锦橙遗传转化筛选标记基因。 展开更多
关键词 npt::gfp融合标记基因 遗传转化 转化效率 锦橙
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NPTII标记转基因棉花再生株的延期筛选 被引量:8
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作者 张慧军 石跃进 +2 位作者 朱永红 岳建雄 杨怀义 《中国棉花》 北大核心 2002年第5期25-26,共2页
关键词 npt标记 转基因 棉花再生株 延期筛选 棉花
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柱花草nptII、hpt和bar基因优化转化体系的建立 被引量:2
18
作者 段瑞军 胡新文 +1 位作者 符少萍 郭建春 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第3期232-237,共6页
以热研5号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.Ryan No.5)为材料,系统地研究了不同选择标记基因NptII,hpt和bar的柱花草转化体系.研究发现柱花草最适合基因转化的外植体是幼苗下胚轴.最佳愈伤组织形成和愈伤组织分化培养基为M S+NAA 1.0... 以热研5号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.Ryan No.5)为材料,系统地研究了不同选择标记基因NptII,hpt和bar的柱花草转化体系.研究发现柱花草最适合基因转化的外植体是幼苗下胚轴.最佳愈伤组织形成和愈伤组织分化培养基为M S+NAA 1.0m g/L+6B-A4.0m gL/+3%蔗糖,pH6.最适宜外植体生根培养基是MS+N AA0mg/L+3%蔗糖(pH6).Glufosinate选择压力为0.15m g/L,Kanam ycin选择压力为20mg/L,Hygrom ycin选择压力为15m g/L.在以上的优化转化系统中,柱花草幼苗下胚轴分别侵染带NptII,hpt和bar基因的农杆菌(GV 3101)后,可获得30%愈伤组织具有kanamycin抗性,5%愈伤组织具有Hygromycin抗性,50%的愈伤组织具有Glufosinate抗性. 展开更多
关键词 柱花草 转化体系 npt hpt BAR
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Testing the possibility of horizontal transfer of introduced neomycin phosphotransferase(nptII) gene of transgenic Eucalyptus camaldulensis into soil bacteria
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作者 Katsuaki ISHII LU Meng-zhu 《Forestry Studies in China》 CAS 2008年第2期134-136,共3页
The possible horizomal transfer of transgenes is of great concern when the transgenic plants are released imo the field. To test the possible transfer of nptII of transgenic trees into soil bacteria, we have used a st... The possible horizomal transfer of transgenes is of great concern when the transgenic plants are released imo the field. To test the possible transfer of nptII of transgenic trees into soil bacteria, we have used a stool DNA preparation kit to isolate the DNA from the soils in the rhizospheres of two non- and eight transgenic Eucalyptus camaldulensis trees. All the samples have provided the corresponding PCR products in the amplification with bacterial 16S RNA specific sequences, which indicates that the quality of the isolated DNA is adequate for amplification. The nptⅡ specific band has been amplified in three soil samples from the transgenic trees and even treated with filtration before the DNA isolation. This indicates that nptII DNA exists in the soil, although it is still unclear whether the DNA was in the soil particles, in the soil bacteria or in the Agrobacterium comamination which was used for the E. camaldulensis transformation. Two approaches on isolation of bacterial DNA have been suggested for testing the possibility of this event in the future. 展开更多
关键词 horizontal transfer npt soil bacteria transgenic trees
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根癌农杆菌介导的‘魏可’葡萄遗传转化体系的优化 被引量:8
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作者 余智莹 张平 +3 位作者 徐志胜 孙兴民 章镇 陶建敏 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期343-349,F0004,共8页
以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染... 以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,卡那霉素质量浓度5 mg·L-1,羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化,共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测,结果表明,有4株通过了PCR检测,1株通过了RT-PCR检测,初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。 展开更多
关键词 '魏可’葡萄 农杆菌介导法 npt基因 转化体系 分子检测 卡那霉素抗性鉴定
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