神经肽Y/Y1受体激活β⁃catenin信号通路介导心肌细胞损伤

目的:研究神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)/Y1受体信号转导在心肌细胞损伤中的作用及机制。方法:C57BL/6J小鼠皮下注射异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)构建心肌损伤模型,腹腔注射Y1受体特异性拮抗剂BIBO3304干预。小鼠随机分为对照组(生理盐水)、ISO组[20 mg/(kg·d)ISO]、BIBO3304+ISO组[0.1 mg/(kg·d)BIBO3304+20 mg/(kg·d)ISO]、BIBO3304组[0.1 mg/(kg·d)BIBO3304],每组10只,连续给药14 d。实时定量PCR和Western blot检测小鼠心肌组织中NPY表达。HE染色和Masson染色观察各组小鼠心肌纤维结构变化和纤维化程度;定量PCR检测小鼠心肌肥大基因心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、β⁃肌球蛋白重链(β⁃myosin heavy chain,β⁃MHC)mRNA表达。采用Y1受体特异性激活剂[Leu31,Pro34]⁃NPY刺激H9C2细胞,检测ANP、β⁃MHC mRNA表达;CCK⁃8检测心肌细胞活力。Western blot检测各组小鼠心肌组织和H9C2细胞中activeβ⁃catenin、磷酸化糖原合成酶激酶⁃3β(phospho⁃glycogen synthesis kinase 3β,p⁃GSK3β)、总糖原合成酶激酶⁃3β(total glyco⁃gen synthesis kinase 3β,t⁃GSK3β)蛋白表达。免疫荧光染色检测心肌细胞β⁃catenin入核情况。利用β⁃catenin特异性抑制剂ICG001处理细胞,检测[Leu31,Pro34]⁃NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力变化。结果:与对照组比较,ISO组小鼠心肌组织NPY mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05),心肌纤维排列紊乱,心肌纤维化程度高,心肌肥大基因表达增加。与ISO组比较,BIBO3304+ISO组小鼠心肌损伤和纤维化得到有效缓解,心肌肥大基因表达下降(P<0.01)。与对照组比较,[Leu31,Pro34]⁃NPY增加H9C2细胞ANP、β⁃MHC mRNA表达,降低心肌细胞活力(P<0.01)。与对照组比较,ISO组小鼠心肌组织activeβ⁃catenin、p⁃GSK3β表达明显上调,p⁃GSK3β/t⁃GSK3β增加;与ISO组比较,BIBO3304+ISO组心肌组织activeβ⁃catenin、p⁃GSK3β表达降低(P<0.05)。与对照组比较,[Leu31,Pro34]⁃NPY显著增加心肌细胞activeβ⁃catenin、p⁃GSK3β表达(P<0.05),促进细胞核β⁃catenin积累。与[Leu31,Pro34]⁃NPY组比较,BIBO3304抑制细胞核β⁃catenin表达,ICG001显著缓解[Leu31,Pro34]⁃NPY诱导的心肌细胞肥大和细胞活力下降(P<0.01)。结论:NPY通过Y1受体转导激活β⁃catenin信号通路介导心肌细胞损伤和心肌纤维化。

NPY-Y1受体调控Wnt/β-catenin通路对OP成骨细胞作用及影响

目的:探讨NPY-Y1受体调控Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松症(OP)成骨细胞作用及影响.方法:选择C518、MC3T3-E1成骨细胞株,NPY-Y1基因敲减和过表达.Wnt通路抑制剂DKK1处理.Real time PCR和Western blot、双荧光素酶报告基因实验、Rescue实验、RNA-seq分析.结果:DKK1处理后sh NPY-Y1组和NPY-Y1^(OE)组Wnt、NPY-Y1、Runx-2和Osterix mRNA及蛋白差异显著,有统计学意义(P<0.05).双荧光素酶报告基因验证NPY-Y1调控Runx-2活性.敲减Runx-2能挽救NPY-Y1对Runx-2表达.RNA-seq为NPY-Y1、Runx-2和Osterix显著差异基因.结论:NPY-Y1受体可为治疗骨质疏松症靶点,DKK1可成为介导Wnt/β-catenin通路治疗骨质疏松症的潜在药物.

泽泻汤对代谢综合征大鼠神经肽及其Y1受体的影响

目的观察泽泻汤对代谢综合征(MS)大鼠血浆神经肽(NPY),下丘脑NPY及其Y1R表达的影响,探讨其可能机制。方法用高糖高脂饲料喂饲建立MS大鼠。将23只MS大鼠分为3组,分别给盐水、泽泻汤、盐酸西布曲明。4 w后,测体重、血糖、三酰甘油(TG),放免法检测血浆NPY;免疫组化法检测下丘脑NPY及其Y1R表达。结果与盐水组相比,泽泻汤组大鼠体重、血糖、TG、血浆NPY水平、下丘脑NPY及其Y1R表达的平均光密度均显著降低(P<0.05)。结论泽泻汤对MS大鼠有良好的治疗作用,其机制可能与抑制下丘脑NPY及其Y1R表达有关。

自发性高血压大鼠神经肽Y-Y1受体在脑血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨神经肽Y-Y1受体激动剂[Leu^(31),Pro^(34)]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞促增殖作用的影响。方法应用植块法体外培养SHR大脑动脉血管平滑肌细胞,分别用正常细胞外液、10^(-5)或10^(-8)NPY,10^(-6)硝苯地平,10^(-6)硝苯地平+10^(-6)mol/L NPY加入培养液培养细胞。用免疫荧光法检测平滑肌培养细胞中增殖核抗原(PCNA)的表达,用流式细胞仪对平滑肌细胞的S期细胞进行检测分析。结果随着[Leu^(31),Pro^(34)]-NPY浓度的增加,平滑肌细胞PCNA阳性率递增,与对照组相比其阳性率有明显差别(P<0·001)。硝苯地平明显抑制PCNA阳性率。与硝苯地平+10^(-6)mol/L NPY相比,PCNA阳性率有显著差异(5·1±0·5vs17·7±2·5,P=0·009)。随着NPY浓度增加,血管平滑肌细胞S期百分数也是增加的,10^(-5)、10^(-6)mol/L NPY组与对照组相比有差别(P<0·05)。硝苯地平组与硝苯地平+10^(-6)mol/L NPY比较,S期细胞百分数有显著差异(P=0·0023)。结论NPY-Y1受体激动剂对血管平滑肌细胞具有浓度依赖性的PCNA表达增强作用,能够提高血管平滑肌细胞S期比例。L型钙离子拮抗剂能够减弱NPY-Y1受体激动剂的促平滑肌细胞增殖作用。

神经肽Y1受体激动药诱导大鼠心肌细胞肥大的研究

目的探讨神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY在诱导心肌细胞肥大中的作用。方法用不同浓度[Leu31,Pro34]NPY刺激原代培养心肌细胞,采用放射性核素3H-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率。应用荧光定量PCR方法检测[Leu31,Pro34]NPY对培养心肌细胞肥大相关基因ANF、β-MHCmRNA表达的影响。结果[Leu31,Pro34]NPY(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L)作用心肌细胞24h后可明显增加心肌细胞3H-leu的掺入量(P<0.01),并可诱导心肌细胞β-MHC表达增加(P<0.01),对ANF表达的影响不明显。结论神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY可加快细胞蛋白质合成速率、促进心肌细胞β-MHC表达,直接诱导心肌细胞的肥大。

与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y1基因的克隆及序列分析

目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y1（NPY1R）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPY1R基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY1R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1100bp左右的DNA片段，与载体重组后DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY1R基因，且所克隆的基因共编码384个氨基酸，分子量为44KD，与GeneBank中NPY1R基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPY1R基因与GeneBank中NPY1R序列完全一致，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY1R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。

NPY对LPS诱导的BV-2细胞系iNOS和COX-2表达的影响

通过观察神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的BV-2细胞促炎酶类表达的影响,以期探讨NPY在神经系统炎症的发生发展中的作用。首先利用MTT法检测NPY对BV-2细胞活性的影响,从而确定作用浓度。然后,利用荧光定量PCR和蛋白质印迹法,分别检测NPY对LPS诱导的BV-2细胞中一氧化氮合酶（i NOS）和环氧合酶-2（COX-2）表达的影响。其次,添加NPY受体阻断剂后,观测对NPY效应的影响。结果显示1～1 000 nmol/L的NPY对BV-2无细胞毒作用;NPY预处理1 h后LPS刺激6 h,NPY＋LPS组BV-2细胞中i NOS和COX-2 mRNA的表达水平和蛋白的含量显著低于LPS组;BV-2细胞系上检测到Y1受体、Y2受体、Y4受体和Y5受体的存在;加入Y1受体阻断剂后,对样品中i NOS和COX-2 mRNA的表达水平和蛋白的含量进行检测,发现NPY的抑炎作用消失。结果表明,NPY通过作用于Y1受体抑制LPS诱导的促炎酶类表达。

神经肽Y及其受体Y_1、Y_2对痛觉调制的研究进展

神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)是一种由36个氨基酸残基组成的肽类激素,属胰多肽家族,广泛分布于中枢及外周神经组织的神经元中。NPY主要参与摄食行为、心血管活动、垂体分泌等生理功能的调节。NPY还参与了痛觉调制。NPY受体有Y1、Y2、Y3、Y4、Y5和Y6六种亚型。目前对Y1受体和Y2受体的研究较多,显示Y1受体和Y2受体参与痛觉调制。但现在对NPY在痛觉中的具体作用机制还不清楚。该文对NPY及其Y1受体、Y2受体在痛觉调制中的作用作一概述。

神经肽Y Y_1受体在发情周期大鼠子宫中的分布

选择健康、未产、体重220～250g的成年雌性SD大鼠,采用阴道涂片方法鉴定其发情周期,并采用免疫组织化学SP法研究了神经肽YY1受体在大鼠发情周期子宫内分布的变化规律。结果显示,各期子宫内膜的神经肽YY1受体免疫阳性产物主要位于基质细胞核膜、子宫内膜上皮细胞质以及子宫腺细胞质和核膜中,并且着色深浅有一定差别,发情间期着色最深,发情后期、发情前期、发情期依次减弱;在肌层和外膜中,发情各期的神经肽YY1受体免疫阳性产物主要位于肌细胞核中,还有一小部分位于结缔组织细胞中,并且在发情间期着色最深,发情前期中等强度着色,发情期和发情后期着色最浅。表明,神经肽Y可能通过神经肽YY1受体参与子宫生理功能的调节。

下丘脑腹内侧核Orexin-1及其受体对大鼠胃酸分泌的影响及其机制

目的:探讨下丘脑腹内侧核Orexin-1及其受体对大鼠胃酸分泌的影响及其机制。方法:大鼠麻醉后侧脑室及VMH置管,大鼠分组后分别VMH注射orexin-A、[Pro^(34)]-酪酪肽、[c PP1-7、NPY^(19-23)、Ala^(31)、Aib^(32)、Gln^(34)]胰多肽;腹腔注射SB-334867;皮下注射阿托品;侧脑室微量注射GR-231118、CGP-71683。给药结束后使用幽门结扎模型检测大鼠的胃酸分泌。结果:OXA能够促进胃酸分泌,且呈量效依赖关系。腹腔注射SB-334867能够抑制胃酸分泌,且呈量效依赖关系;SB-334867能够抑制orexin-A对胃酸分泌的促进作用;阿托品不但能够抑制胃酸分泌并且还能够完全阻断OXA的促胃酸分泌作用。侧脑室微量注射GR-231118或CGP-71683胃酸及胃液量减少,呈量效依赖关系,并且能够完全阻断OXA的促胃酸分泌作用。VMH内微量注射[cPP^(1-7),NPY^(19-23),Ala^(31),Aib^(32),Gln^(34)]胰多肽胃酸分泌增多,且呈量效依赖关系。结论:Orexin-A能够作用于下丘脑VMH促进胃酸分泌,orexin受体、Y1和Y5受体以及迷走神经系统均参与该过程。