甘氨酸对大鼠视皮层神经元突触后NR2A-及NR2B-NMDA受体功能的调制作用

旨在探讨甘氨酸对大鼠视皮层神经元突触后不同亚型NMDA受体功能的调制作用。采用脑片标本的全细胞膜片钳技术,记录大鼠视皮层II/III层锥体神经元的微小兴奋性突触后电流(mEPSC);灌流不同浓度甘氨酸和D-丝氨酸后,观察其对突触后NMDA受体电流的影响,之后使用NR2A-NMDAR和NR2B-NMDAR拮抗剂,观察其对突触后NMDA受体电流(NMDAR-mEPSC)的影响。结果表明:甘氨酸和D-丝氨酸均能增强mEPSC的NMDA受体成分,并呈现一定的浓度依赖性;施加NR2B-NMDA受体拮抗剂Ro25-6981,减小了mEPSC的NMDA受体成分,而联合使用甘氨酸和Ro25-6981则仍出现对NMDAR-mEPSC的增强作用;施加NR2A-NMDA受体拮抗剂Zn2+,同样可以减小NMDAR-mEPSC;而联合使用甘氨酸和Zn2+,亦出现对NMDAR-mEPSC的增强作用。本研究结果提示:突触后NR2A和NR2B-NMDA受体的甘氨酸结合位点均是不饱和的,甘氨酸对突触后NR2A-及NR2B-NMDA受体的反应具有增强作用。

慢性复合应激对大鼠学习与记忆及海马NMDA受体亚基NR2A和NR2B表达的影响

为了观察慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和海马内 NMDA受体亚基 NR2 A、NR2 B表达的变化。本研究将成年雄性 Wistar大鼠分为实验组和对照组 ,实验组动物每天交替暴露于复合应激原环境中达 6周 ,用 Morris水迷宫和 Y迷宫作业测试其空间学习与记忆成绩 ,再采用免疫组织化学和图像处理方法分析海马 CA1 、CA3、齿状回区的 NR2 A和 NR2 B的表达。结果显示 :( 1) Morris水迷宫测试 :慢性复合应激组大鼠寻找平台的潜伏期较对照组明显缩短 ,Y迷宫测试 :慢性复合应激组大鼠学会躲避电击的正确次数较对照组明显增多 ;( 2 )慢性复合应激组海马内 NMDA受体亚基 NR2 B表达水平较对照组明显上调 ,NR2 A表达水平无显著变化。结论 :慢性复合应激可增强学习与记忆能力 。

短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NMDA受体亚单位NR2A和NR2B mRNA的表达变化

应用原位杂交组织化学和图像处理与分析的方法 ,观察短暂性前脑缺血 (15 m in)再灌注 (0 .5 h～ 7d)大鼠海马各区NR2 A和 NR2 B m RNA的表达变化 ,探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果发现 ,缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m RNA在海马各区呈现出一种相对一致的表达。在海马 CA1 区 ,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达分别在缺血再灌 6h和 12 h降至低谷 (P<0 .0 5 ) ,然后表达开始回升 ,在缺血再灌 48h都升至高峰 (P<0 .0 5 ) ,之后表达再次下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 ) ;在海马 CA3区 ,二者的表达变化规律与 CA1 区相似 ,不同的是表达变化的幅度明显减小。在齿状回 ,缺血后 0 .5 h～ 72 h,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达未见显著性变化 ,72 h后表达开始下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 )。以上结果提示 ,短暂性前脑缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m R-NA在大鼠海马各区表达变化的模式不同 。

前脑缺血再灌流后大鼠海马NMDA受体亚单位NR2A和NR2B蛋白质表达的变化

用免疫组织化学和图像处理方法 ,观察分析了大鼠前脑缺血 15 min后再灌流 2 h～ 7d的海马结构各区域 NMDA受体亚单位 NR2 A和 NR2 B的表达变化规律及其差异 ,藉以探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果显示 :( 1) NR2 A在 CA1 区和CA3 区的表达于再灌早期表现为小幅度下降 ( P<0 .0 5 ) ,此趋势在 CA3 区可以逆转 ;但在 CA1 区逐渐加剧 ,第 7d时降至 2 1% ,NR2 A在齿状回的表达几无改变 ;( 2 )与 NR2 A不同 ,再灌后 2 h,NR2 B在 CA1 区的表达即较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ,并持续到再灌后 2 4h,之后转而急剧下降 ,至第 7d仅余 11% ;在 CA3 区及齿状回 ,再灌后 6～ 48h,NR2 B的表达也较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ;在再灌后 72 h则恢复至对照组水平。结果提示 ,缺血性脑损伤后 NR2 A和 NR2 B表达变化的不同可能是造成 CA1 区。

电针对慢性压迫性损伤大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B表达的影响

目的:观察电针对慢性压迫性损伤(CCI)大鼠脊髓N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B表达的影响,分析电针(EA)累积性镇痛效应可能的作用机制。方法:将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组、CCI模型组、EA3次组、EA5次组、EA10次组,每组10只。对照组大鼠行假手术,其余4组结扎坐骨神经造成CCI疼痛模型。手术后一周开始测定大鼠双侧缩腿的潜伏期(PWL)。EA3次组于CCI术后第14天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续3d,EA5次组于CCI术后第12天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续5d,EA10次组于CCI术后第7天电针双侧"足三里"-"阳陵泉"连续10d,每天1次。电针结束后用RT-PCR和Western blot法检测脊髓NMDA受体NR2B表达的情况。结果:与对照组比较,CCI后各组动物出现明显的痛觉过敏(P<0.01)。EA5次后动物的痛觉过敏有明显减轻。EA10次后动物的痛觉过敏进一步减轻。CCI后第18天大鼠脊髓NMDA受体NR2B亚基mRNA和蛋白表达水平明显增加,与CCI组,EA5次组和EA10次组比较NMDA受体NR2B亚基mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论:NR2B表达上调可能是神经损伤后出现慢性疼痛的发病机制之一,电针有可能通过抑制其表达从而发挥一定程度镇痛作用。

脊髓c-Jun在NMDA受体NR2B亚基介导的大鼠吗啡镇痛耐受中的作用

目的探讨脊髓c-Jun在N-甲基-D-天冬氨酸(N-meth-yl-D-aspartate,NMDA)受体NR2B亚基介导的吗啡镇痛耐受中的作用。方法取Sprague-Dawley(SD)成年大鼠连续7 d鞘内注射吗啡10μl(1.5 g.L-1)建立慢性吗啡镇痛耐受模型。应用热水甩尾法测定甩尾潜伏期(疼痛指标)以观察痛反应变化。应用免疫组织化学染色法检测磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和总c-Jun(t-c-Jun)的表达。结果鞘内注射吗啡7 d,可激活大鼠脊髓的c-Jun,表现为神经元内p-c-Jun表达升高;鞘内注射NR2B选择性拮抗剂10μl Ro256981(2 g.L-1)可以抑制慢性吗啡镇痛耐受时脊髓神经元c-Jun的激活,并明显拮抗吗啡镇痛耐受的形成。结论脊髓神经元c-Jun的磷酸化参与NMDA受体NR2B亚基介导的吗啡镇痛耐受。

NMDA受体亚单元NR2A和NR2B mRNA在缺血大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨短暂性前脑缺血后大鼠海马NR2A和NR2BmRNA的表达变化及其与海马缺血性细胞凋亡的关系。方法 四动脉阻断法建立脑缺血再灌注动物模型、原位杂交、TUNEL染色和图像分析与统计处理。 结果①缺血后 ,NR2A和NR2BmRNA在海马各区呈现出一种相对一致的表达规律。在CA1区 ,NR2A和NR2BmRNA的表达分别在缺血再灌 6h和 12h降至低谷 ,然后回升 ,在缺血再灌 4 8h都升至高峰 ,之后表达再次下降 ,直至缺血后 7d ;在CA3区 ,该变化规律依然存在 ,不同的是表达变化的幅度明显减小 ;而在齿状回 ,缺血再灌 0 .5～ 72h ,二者的表达未见显著性变化 ;72h后 ,表达下降 ,直至缺血后 7d。②缺血后 2 4h ,凋亡细胞出现 ,主要位于海马CA1区 ,进行性增多 ,4 8h增加更为明显 ,缺血后 72h达高峰 ;然后凋亡细胞有所减少 ,但至缺血后 7d ,依然存在。 结论 短暂性前脑缺血后 ,大鼠海马各区NR2A和NR2BmRNA的表达变化及细胞凋亡均存在着显著性差异 ;这种差异提示 ,缺血后 ,NR2A和NR2BmRNA的表达变化与海马的选择性易损现象和缺血性细胞凋亡之间可能存在着某种密切的关系。

慢性酒精中毒及戒断对大鼠海马NMDA受体亚基NR2B表达的影响

目的观察慢性酒精中毒及戒断对大鼠海马内N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基NR2B(NMDAR2B)表达的变化。方法本研究将56只成年雄性大鼠随机分为6个实验组各8只和对照组8只,前者包括5个50%酒精灌胃组和1个15%酒精灌胃组,连续给予灌胃8周;8周后5个50%酒精灌胃组分为未戒断组、戒断36h组、戒断3d组、戒断1周组和戒断2周组。用柳田知司评分法评定戒断症状,采用免疫组织化学方法检测NMDAR2B的表达水平。结果①大鼠灌胃50%酒精8周后可观察到戒断反应;②50%和15%酒精灌胃组NMDAR2B受体表达水平均较对照组增多(P<0.05);③50%酒精灌胃组戒断后36h、3d和1周NMDAR2B水平上调,均较对照组明显增多(P<0.05),并在3d时达到高峰,此后开始下降;④至戒断2周下降至低于对照组,并有统计学意义(P<0.05)。结论给大鼠灌胃50%酒精8周可达到慢性酒精中毒;NMDAR2B表达异常可能是慢性酒精中毒与戒断综合征的重要机制。

NMDA受体NR2A、NR2B亚基在戊四氮诱导慢性癫痫大鼠中的作用

目的:探讨NMDA受体NR2A、NR2B亚基在戊四氮(PTZ)诱导慢性癫痫大鼠惊厥发作中的作用及机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为:Control组、PTZ组、PTZ+MK-801组、PTZ+NVP组、PTZ+Ifenprodil组;连续腹腔注射35 mg/kg PTZ 28 d,注射PTZ 0.5 h前,各组分别注射等量0.9%氯化钠溶液、0.1 mg/(kg·d)MK-801、5.0 mg/(kg·d)NVP、10 mg/(kg·d)Ifenprodil。按照Racine分级标准每天记录行为学评分。第29天处死动物,尼氏染色观察大鼠海马神经元丢失情况,Western blot法测定大鼠海马NR2A、NR2B亚基水平。结果:与PTZ组比,MK-801组和NVP组戊四氮诱导慢性癫痫大鼠的惊厥发作减轻,而Ifenprodil组无减轻。与Control组比,PTZ组海马神经元大量丢失;与PTZ组比,MK-801、NVP和Ifenprodil均能减少海马神经元丢失;其中,MK-801、NVP减轻神经元损伤效果显著。与对照组比,各组惊厥发作后海马NR2A、NR2B亚基水平均下降,PTZ组最明显;NR2A亚基水平,PTZ+NVP组高于PTZ组;NR2B亚基水平,各药物干预组均高于PTZ组。结论:非选择性抑制NMDA受体和选择性抑制NR2A亚基能够减轻慢性癫痫大鼠发作强度和海马神经元损伤,而选择性抑制NR2B亚基仅能减轻海马神经元损伤,这提示惊厥发作可能与NR2A亚基有关,而神经元损伤可能与NR2A、NR2B亚基均有关。

NMDA受体NR2B亚基在慢性内脏痛敏及针灸治疗中的作用

N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体具有多种不同亚基,且在中枢分布不同,N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)参与体内各种信号的传递和调节神经元的兴奋性,如介导躯体和内脏疼痛的发生和发展,NMDA受体中NR2B亚型与疼痛相关机制研究关系最为密切,内脏痛(Visceral Pain)是临床常见的症状,主要是由于各脏器及胸腹壁层的感觉神经末梢受到强烈机械、化学刺激,也可由局部缺血、平滑肌痉挛及代谢产物不能及时排除而引起的疼痛感觉。电针在内脏痛的临床治疗中疗效肯定,实验研究发现电针对中枢NMDA受体尤其是NR2B亚基具有调控作用,初步揭示了电针镇痛又一潜在靶点,本文就NR2B亚基的结构、功能、参与慢性内脏痛的机制,以及近些年针灸治疗慢性内脏痛的机制研究进行概述。

NMDA受体亚单位NR2B拮抗剂和神经退行性疾病

NMDA受体过度激活在多种神经退行性疾病的发生发展过程中发挥着重要作用。虽然NMDA受体拮抗剂在动物模型取得了明显的治疗效果,但严重的副反应限制了这类化合物的临床应用;而NMDA受体NR2B亚单位分布相对集中,选择性NR2B拮抗剂有望成为更安全、有效、副作用低的一类新型药物。该文就近年来国内外NR2B拮抗剂在神经退行性疾病中的研究进展作一综述。

温针灸对吗啡戒断大鼠NR2B受体表达影响的研究

目的:观察温针灸对吗啡戒断大鼠空间学习能力及脑区NR2B受体表达的影响。方法:采用逐日背部皮下注射盐酸吗啡注射液,末次注射后3 h给予纳络酮快速戒断,建立吗啡戒断大鼠模型。给予温针灸治疗后,采用Morris水迷宫测试大鼠空间学习能力,免疫组化方法检测伏隔核脑区NR2B受体的表达。结果:温针灸组大鼠平台逃避潜伏期明显缩短(P<0.01)。温针灸组大鼠NAc脑区NMDA-NR2B受体表达增高(P<0.05)。结论:温针灸能提高大鼠的空间学习能力,其机制可能与调整脑区NR2B受体表达有关。

脑尔康对AD模型小鼠脑内NMDA受体亚单位NR2B表达的影响

目的 :观察复方中药脑尔康对慢性铝中毒AD (Alzheimer’sdisease)模型小鼠学习记忆及脑内NMDA受体亚单位NR2B蛋白表达的影响。方法 :采用跳台法检测AD模型小鼠学习记忆成绩 ,用免疫组织化学方法观察脑尔康对AD模型小鼠脑皮层及海马结构区域NM DA受体亚单位NR2B蛋白表达的影响。结果 :模型组与空白组比较 ,学习记忆成绩明显下降 (P <0 0 1 ) ;各用药组分别与模型组比较 ,学习记忆成绩明显提高 (P <0 0 1 ) ;中药组比脑复康组改善效果更好 ;模型组与空白组比较 ,皮层和海马内NR2B的表达明显减少 (P<0 0 1 ) ,各用药组小鼠脑内NR2B的表达均不同程度增加 (P <0 0 5或P <0 0 1 ) ;中药组与脑复康组比较 ,NR2B的表达增加更明显 (P <0 0 1 )。结论

大鼠听皮质NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄-依赖性表达

应用原位杂交技术 ,研究了大鼠生后发育过程中 ,听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄 依赖性的表达变化。特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示 ,NR2B亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后即有高水平表达 ,之后 ,随着天龄增长逐渐递减 ,在出生后 14d出现一过性表达高峰 ,14～ 2 1d时表达水平急剧降低(>5 0 .0 % ) ,2 1d后保持低水平表达至成年。

NMDA受体亚单位NR2B的结构、功能特性及其表达与调控

NMDA受体是兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)的特异性受体,属配体门控离子通道,是由不同的亚单位组成.现已发现,NMDA受体至少存在7个亚单位(NR1,NR2A-D,NR3A-B),其中NR2B在7个亚单位中扮演非常重要的角色.近年来对NR2B研究表明,其在调控神经元突触的可塑性、学习与记忆以及治疗精神紊乱方面具有重要的意义.对近期有关NR2B亚单位的结构、功能特性及其表达与调控的研究进展做一综述.

脱氢表雄酮对大鼠大脑皮质神经元氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1表达的影响

目的研究脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠大脑皮质神经元氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1表达的影响。方法不同剂量(1、10、100μmol.L-1)的DHEA处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元,采用免疫细胞化学法测定神经元氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1表达的变化。结果与对照组相比,低、中、高剂量DHEA使NR2B表达分别增加15.6%、19.9%、49.4%(P<0.05或P<0.01);使GBR1表达分别增加4.3%(P>0.05)、14.5%、58.5%(P<0.05或P<0.01)。结论DHEA可增强氨基酸受体亚单位NR2B和GBR1的表达水平。

电针对阿尔茨海默病大鼠海马CA_1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA表达的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马CA1区天门冬氨酸(NMDA)受体NR2B mRNA表达的影响。方法:选取50只Wistar雄性大鼠,进行行为学测试,随机分成5组:空白组、模型对照组、模型组、西药组和电针组,每组10只。腹腔注射D-半乳糖制备动物模型,电针组选取"百会"、"大椎"、"肾俞"、"太溪"、"足三里"电针治疗,以Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,用原位杂交方法检测海马CA1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA的表达。结果:空白组、模型对照组海马CA1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA有较高表达,二者之间无显著性差异(P>0.05);模型组海马CA1区天门冬氨酸受体NR2B mRNA表达水平显著降低,与空白组、模型对照组比较有极显著性差异(P<0.01);电针组、西药组较模型组表达水平显著增多,有极显著性差异(P<0.01);电针组、西药组二组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:电针治疗能够提高天门冬氨酸受体NR2B mRNA的表达,能够改善学习记忆能力。

急性阿片耐受大鼠脊髓NMDA受体NR2A及NR2B亚基表达的改变

目的：了解大鼠短期多次应用芬太尼能否发生急性阿片耐受以及急性阿片耐受大鼠脊髓NMDA受体NR2A和NR2B亚基表达的改变。方法：24只体重为200-220g的雄性SD大鼠随机分为3组（n=8）：对照组（C）,生理盐水组（S）及芬太尼组（F）。F组大鼠给予皮下注射芬太尼30μg/kg,共4次,每两次注射之间间隔15min,S组大鼠以生理盐水代替芬太尼,C组大鼠未给药。给药前及给药结束后每30min以Von-Frey仪测定各组大鼠的机械刺激缩足阈值（paw withdrawal threshold,PWT）。当F组大鼠的PWT恢复到给药前基础水平时,各组大鼠均给予腹腔注射吗啡5mg/kg。随后仍每30min测定各组大鼠的PWT,直至F组大鼠的PWT再次回到基础水平。对各组大鼠不同时间点的PWT进行组内和组间比较。另24只体重为2000-220g的雄性SD大鼠分组及给药方法同前（分为C^＊、S^＊及F^＊组）,当F＊组大鼠的PWT首次恢复到基础值时,不给予吗啡,处死各组大鼠,取脊髓,以Western blotting方法测定NMDA受体NR2A及NR2B亚基的蛋白表达水平。结果：连续4次皮下注射芬太尼（F组）后大鼠首先表现为PWT较基础值显著升高,随后PWT降低到基础值以下,然后逐渐恢复至基础值水平,此时皮下注射吗啡后,吗啡的镇痛效果显著低于其他两组大鼠（S组,C组）。F^＊组大鼠脊髓的NR2B亚基表达水平显著高于C^＊组及S^＊组,各组大鼠脊髓的NR2A亚基表达水平的差异无统计学意义。结论：短期应用芬太尼可导致大鼠发生急性阿片耐受。急性阿片耐受大鼠的脊髓NMDA受体NR2B亚基表达水平显著升高,NR2A亚基表达水平无明显变化。

中枢NMDA受体NR2B亚单位与神经病理性疼痛的研究现状

中枢神经系统N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体在病理性疼痛的发生和发展中起着重要作用。近年来研究发现中枢神经系统中NMDA受体NR2B亚基与神经病理性疼痛的关系尤为密切。NR2B在疼痛的产生、中枢性痛觉敏感化形成和疼痛治疗中有着深刻的意义。本文就NR2B与神经病理性疼痛的研究现状进行综述。

咪达唑仑通过调控LncRNA NR2F2-AS1对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组;CCK-8法、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及迁移;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA NR2F2-AS1表达量;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)表达量。结果 与咪达唑仑0μmol/L组比较,咪达唑仑20、40、60μmol/L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显升高,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显降低,长链非编码(Lnc)RNA NR2F2-AS1表达量明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-NR2F2-AS1可明显抑制细胞增殖及迁移,并可明显提高细胞凋亡率(P<0.05);与咪达唑仑+pcDNA组比较,咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显降低,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制LncRNA NR2F2-AS1表达而减弱肾癌细胞增殖及迁移能力,并可诱导肾癌细胞凋亡。