成年新生神经元NMDA受体NR2B亚型基因条件性敲除模型建立

目的:建立成年神经发生中新生颗粒细胞N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚型基因条件性敲除模型。方法:运用逆转录病毒基因标记技术,结合Cre-1oxp重组酶系统,在ROSA26-LacZ基因报告小鼠体内研究逆转录病毒RSV-pGFP:T2aCre的Cre酶重组的发生以及其转化效率。在NR2Bfl/fl转基因小鼠中建立成年新生颗粒细胞NR2B基因敲除模型。结果:在逆转录病毒注射后14 d,观察到LacZ标记的神经元及β-gal和Cre免疫荧光双标阳性细胞,在海马齿状回颗粒下层、颗粒层以及hilus区表达;同时在嗅球颗粒层也可见LacZ表达。28 dCre转化效率高达98.3%。在NR2Bfl/fl转基因小鼠,14 d时分别在嗅球和齿状回的颗粒细胞层,观察到GFP和Cre同时标记的阳性新生颗粒细胞。结论:成年神经发生中起源于海马齿状回颗粒下层和侧脑室旁脑室管膜下区的新生颗粒细胞NR2B基因敲除模型建立。

NMDA受体NR2B基因对海马成年新生神经元生存的影响

目的:研究NMDA受体NR2B基因对海马成年新生神经元生存的影响。方法:通过Cre-loxp重组酶系统构建NMDA受体NR2B亚型基因单细胞敲除模型。观察NR2B基因敲除神经元的存活情况及其形态发生。结果:在逆转录病毒注射后7、17、28、56 d,NR2Bfl/fl小鼠中,成年海马新生神经元生存比例在各观察时间点一致,与同组野生型神经元无显著性差异。NR2B基因敲除神经元神经元大体形态分化发育与野生型神经元类似,但在17、28 d时顶端树突上的棘突发生显著减少(P<0.01)。结论:NMDA受体NR2B亚型基因敲除对海马成年新生神经元生存无显著性影响,但可影响突触发生。

吗啡点燃条件位置性偏爱重现大鼠海马CA1区NR2B、CaMKⅡ的变化

目的:探讨吗啡(morphine,Mor)点燃条件位置性偏爱(conditioned place preference,CPP)重现大鼠海马CAl区N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)调节亚基NR2B,钙依赖钙调蛋白激Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)表达的变化。方法:用恒量法(10 mg·kg^(-1))给大鼠连续颈背部皮下注射(subcutaneous,sc)吗啡8 d建立CPP模型;用生理盐水替代吗啡训练大鼠10 d,使形成的CPP逐渐消退;单次sc2.5 mg·kg^(-1)吗啡点燃已消退的CPP。用免疫组化法检测吗啡点燃CPP重现大鼠海马CA1区NR2B、CaMKⅡ表达,图像分析系统测定阳性反应产物的平均灰度值的变化。结果:sc10 mg·kg^(-1)吗啡8 d建立CPP,生理盐水训练10 d使已形成的CPP消退,小剂量吗啡(2.5 mg·kg^(-1))使消退的CPP重现;吗啡点燃(CPP重现大鼠海马CA1区NA2B、CaMKⅡ表达,与对照组比较呈显著增加(P<0.05)。结论:小剂量吗啡诱发大鼠CPP重现行为可能与海马CA1区NR2B、CAMKⅡ表达增加有关。