莪术醇通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达抑制前列腺癌细胞增殖及转移

目的:探讨莪术醇对前列腺癌细胞增殖及转移的影响及其可能作用机制。方法:不同浓度的莪术醇处理人前列腺癌细胞LNCap,采用脂质体转染法将si-NC、si-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞,将pcDNA、pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞后加入100μg/ml莪术醇处理;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;qRT-PCR检测lncRNA NR2F1-AS1、miR-145-5p表达量;双荧光素酶报告实验验证lncRNA NR2F1-AS1与miR-145-5p的靶向关系。结果:莪术醇可降低细胞存活率,并可降低lncRNA NR2F1-AS1表达量,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),而miR-145-5p表达量升高(P<0.05);lncRNA NR2F1-AS1可靶向调控miR-145-5p的表达(P<0.05);转染si-lncRNA NR2F1-AS1后细胞存活率降低(P<0.05),miR-145-5p表达量升高(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);转染pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1可降低莪术醇对LNCap细胞增殖及转移的作用。结论:莪术醇可通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达,抑制前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-493-5p表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA NR2F1-AS1(LncRNA NR2F1-AS1)靶向微小RNA-493-5p(miR-493-5p)的表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR2F1-AS1与miR-493-5p在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测NR2F1-AS1与miR-493-5p的相互作用;采用MTT增殖实验检测干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后卵巢癌细胞增殖能力的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot检测CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达。结果与正常卵巢上皮细胞比较,NR2F1-AS1在卵巢癌细胞中的表达水平升高,而miR-493-5p的表达水平则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实NR2F1-AS1能与miR-493-5p特异性结合,并可负性调控miR-493-5p的表达及活性。干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后可抑制卵巢癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡,并可显著上调p21、Bax、p27、cleaved-caspase 3蛋白的表达,下调CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达。抑制miR-493-5p表达可逆转干扰NR2F1-AS1表达对卵巢癌细胞增殖及凋亡的作用。结论干扰NR2F1-AS1表达可通过上调miR-493-5p的表达抑制卵巢癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-145-5p调控结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核受体亚族2F组成员1反义RNA(NR2F1-AS1)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法收集2015年3月至2017年5月青海省第五人民医院外科手术切除并经病理证实为原发性结肠腺癌组织25例,另留取距肿瘤边缘3 cm的癌旁组织(正常结肠组织)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中NR2F1-AS1和微小RNA-145-5p(miR-145-5p)表达水平。以结肠癌细胞HCT116为研究对象,双荧光素酶报告基因实验验证NR2F1-AS1和miR-145-5p调控关系。转染NR2F1-AS1小干扰RNA或miR-145-5p模拟物至HCT116细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell分别检测干扰NR2F1-AS1表达或过表达miR-145-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中NR2F1-AS1表达升高[(3.39±0.33)比(1.01±0.11),P<0.05],miR-145-5p表达降低[(0.55±0.05)比(1.00±0.08),P<0.05]。与共转染WT-NR2F1-AS1的miR-NC组比较,miR-145-5p组细胞荧光素酶活性降低P<0.05)。过表达NR2F1-AS1后细胞中miR-145-5p表达水平降低(P<0.05),干扰sNR2F1-AS1表达后细胞miR-145-5p表达水平升高(P<0.05)。干扰NR2F1-AS1表达或过表达miR-145-5p后,HCT116细胞光密度(OD)值、迁移和侵袭数降低(P<0.05)。干扰miR-145-5p表达逆转了干扰NR2F1-AS1表达对HCT116细胞OD值、迁移和侵袭数的影响。结论NR2F1-AS1在结肠癌组织中呈高表达,干扰NR2F1-AS1表达可能通过上调miR-145-5p表达来抑制结肠癌细胞恶性行为,是结肠癌治疗的潜在靶点。