肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响

目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

枸杞多糖对Nrf2信号通路调控作用的研究进展

枸杞多糖(LBP)是枸杞子的主要有效成分,已在基础研究中证实其具有抗氧化、抗肿瘤、增强免疫、降低血糖和血脂等作用,并在辅助治疗原发性肝癌、高脂血症中取得良好效果,因此在临床治疗上具有良好的应用前景。核因子E2相关因子2(Nrf2)是细胞内抗氧化和抗炎症损伤的关键调节因子。大量文献报道LBP可以通过激活Nrf2信号通路,预防或延缓多种疾病的进程。本文对枸杞多糖调控Nrf2信号通路发挥抗氧化、减轻炎症反应、调控细胞凋亡进程等作用进行综述,以期为后续的相关研究提供参考。

肠道菌群代谢产物氧化三甲胺通过抑制Keap1/Nrf2信号通路激活发挥促动脉粥样硬化作用

目的:研究肠道菌群(GM)代谢产物氧化三甲胺(TMAO)对动脉粥样硬化(AS)的影响及其相关机制。方法:按照随机数字表法将雄性小鼠分为对照组、模型组、TMAO组、Keap1/Nrf2激动剂RTA-408组和TMAO+RTA-408组,每组12只。其中,模型组小鼠采用高脂饲料喂养,TMAO组小鼠在高脂饲料中加1%胆碱,造模周期为12周。造模结束后,RTA-408组和TMAO+RTA-408组小鼠每天腹腔单次注射RTA-408(100μg/kg),持续给药14d,期间其他各组小鼠腹腔注射等量的生理盐水。采用生化分析法定量测定TG、TC、LDL-C和HDL-C的水平。通过HE、Masson三色和油红O染色检测主动脉的组织学改变。通过ELISA检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。超高液相色谱串联质谱法(UHPLC-MS/MS)检测小鼠血浆中TMAO含量;荧光探针法检测主动脉ROS的荧光强度;qRT-PCR、Western blot分别检测小鼠主动脉组织中Keap1、Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平;免疫荧光观察Nrf2的核易位情况。结果:AS小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度相较于对照组升高,HDL-C浓度则降低(P<0.01)。此外,模型组显示广泛的主动脉内膜增厚,明显的泡沫细胞形成,动脉壁胶原沉积增加。此外,血清中IL-1β、ROS和TMAO水平显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),主动脉中ROS含量增加、Nrf2核转位显著抑制(P<0.01),Keap1、Nrf2和HO-1 mRNA与蛋白表达水平升高(P<0.01)。与AS小鼠相比,TMAO处理进一步加重对应指标上述变化趋势(P<0.05);RTA-408则取消TMAO对AS小鼠的加重作用(P<0.05)。结论:TMAO可能通过抑制Keap1/Nrf2信号通路激活对AS小鼠的主动脉病理改变、炎症反应和内皮损伤发挥加重作用。

藤黄健骨胶囊通过SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路抑制绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞凋亡

藤黄健骨胶囊可以提高绝经后骨质疏松模型鼠的骨密度来改善其骨微结构损害,但具体机制尚未阐明。本文主要研究藤黄健骨胶囊抑制绝经后骨质疏松症大鼠成骨细胞凋亡与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路的关系,旨在探讨藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松症的作用机制。采用去卵巢法建立绝经后骨质疏松大鼠模型,分别给予藤黄健骨胶囊(0.09、0.18、0.36 g/kg)灌胃,连续干预8周后进行指标检测。采用TUNEL染色观察股骨组织凋亡情况,结果发现,藤黄健骨胶囊各剂量组股骨组织凋亡阳性细胞和凋亡率均减少(P<0.01)。采用双重免疫荧光染色观察股骨组织成骨细胞中SIRT1、PGC-1α和Nrf2表达水平表达情况,结果发现,藤黄健骨胶囊中、高剂量组成骨细胞PGC-1α表达荧光面积明显升高,各剂量组成骨细胞SIRT1和Nrf2表达荧光面积也明显升高(P<0.01)。qPCR和Western印迹检测股骨组织SIRT1、PGC-1α、Nrf2、Runx2、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达水平和翻译水平变化,结果显示,藤黄健骨胶囊中、高剂量组股骨组织Runx2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2蛋白质水平均明显升高,Caspase-9蛋白质水平明显下降,各剂量组股骨组织SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2 mRNA水平也均明显升高,而其各剂量组股骨组织Caspase-3mRNA水平、蛋白质水平和Caspase-9 mRNA水平均则明显降低(P<0.01)。综上,本研究初步揭示了藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松模型鼠成骨细胞凋亡的抑制与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路有关,SIRT1可能是调控成骨细胞凋亡的重要靶点。

Nrf2信号通路作为虾青素治疗新靶点的研究进展

虾青素是一种多靶点脂溶性酮式类胡萝卜素,因其丰富的生物活性,特别是其强大的抗氧化能力而广受关注。虾青素具有抗氧化、抗炎、抗糖尿病、神经保护等多种生物活性作用,但虾青素这些治疗作用的分子机制尚不完全清楚。其中,核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)信号通路是虾青素发挥作用的重要信号通路之一。Nrf2信号通路是细胞抗氧化应激的主要调节因子,它调节了氧化还原稳态以及细胞解毒相关基因的表达。本文综述了虾青素激活Nrf2信号通路的作用机制及其在各种疾病中的保护作用。

川芎多糖通过AMPK/Nrf2信号通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨川芎多糖(LCPS)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子红系2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法将120只SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、LCPS组、AMPK激动剂AICAR组和LCPS+AICAR组。除假手术组外,其他各组构建MIRI大鼠模型。超声影像系统检测各组心功能指标,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白(cTnI)含量,计算心脏指数,TTC染色法检测心肌梗死面积,HE染色法观察心肌组织病理学改变,分光光度法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,Western blotting法检测心肌组织AMPK、磷酸化(p)-AMPK、Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果LCPS能够明显改善MIRI大鼠心功能及心肌组织病变,减少心肌梗死面积,降低MDA、心脏指数以及血清LDH、CK-MB、cTnI水平,升高SOD、GSH-Px活性、p-AMPK/AMPK比值以及Nrf2、HO-1表达水平。LCPS联合AICAR对各指标的影响优于LCPS组和AICAR组(P<0.05)。结论LCPS具有减轻大鼠MIRI的作用,其机制可能与激活AMPK/Nrf2信号通路、抑制氧化应激有关。

miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血大鼠神经元铁死亡

目的:探讨miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血(ICH)大鼠神经元铁死亡的机制。方法:使用大鼠神经元细胞为研究对象,采用氧合血红蛋白(oxyHb)刺激神经元细胞构建ICH体外细胞模型,分别将miR-152-3p inhibitor和(或)PIK3CA抑制剂分别处理细胞,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,RT-qPCR、Western blot检测相关基因和蛋白表达情况;并用细胞免疫荧光观察Nrf2蛋白的入核率;用双荧光素酶靶标实验验证miR-152-3p与PIK3CA的关系。结果:将miR-152-3p inhibitor转染的细胞构建ICH细胞模型后,细胞凋亡率明显降低(P<0.01);SLC7A11、GPx4、PIK3CA、Nrf2蛋白表达水平以及p-AKT/AKT比率显著升高而GSK-3β蛋白表达水平显著降低(P<0.01);同时,Nrf2蛋白入核量也显著升高(P<0.01);而此作用在使用PIK3CA抑制剂干预后,miR-152-3p inhibitor的改善效果消失;荧光素酶靶标实验证实,miR-152-3p可靶向调控PIK3CA。结论:miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进ICH大鼠神经元铁死亡。

灯盏花素通过Nrf2信号通路改善HepG2细胞急性酒精性肝损伤

建立乙醇诱导的HepG2人肝癌细胞急性酒精性肝损伤模型,使用灯盏花素处理细胞检测其对急性酒精损伤的改善作用,采用MTT法检测细胞活性;采用ELISA法检测细胞培养液中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平;比色法检测细胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(Malonic dialdehyde,MDA)水平;利用荧光探针DCFH-DA进行细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)检测;Western blotting检测核因子类红细胞2-相关因子(Nuclear factor erythroid-2-related factor,Nrf2)蛋白表达。结果表明,与正常对照组相比,模型对照组的ALT、AST、MDA、ROS水平升高,SOD活性降低;经灯盏花素处理后ALT、AST、MDA水平下降,SOD活性升高,说明灯盏花素可改善酒精所致的HepG2细胞肝功能指标及氧化应激指标的异常改变;加入Nrf2信号通路抑制剂ML385后,与正常对照组相比,模型对照组、ML385+灯盏花素组的ALT、AST、MDA、ROS水平升高,SOD活性降低,Nrf2蛋白显著降低;与模型对照组相比,ML385组和灯盏花素组Nrf2蛋白表达显著升高,说明灯盏花素可能通过Nrf2信号通路改善酒精性急性肝损伤。

罗格列酮通过激活Nrf2信号通路及抑制NLRP3炎症小体的活化发挥对急性肝损伤的保护作用

目的探讨罗格列酮是否通过激活核因子E2相关因子2(nuclear factorery throid-2 related factor2,Nrf2)信号通路及抑制NOD-like受体蛋白(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体的活化发挥对急性肝损伤的保护作用。方法将40只KM小鼠随机分为4组,即正常对照组、正常治疗组、四氯化碳(CCl_(4))模型对照组和CCl_(4)模型治疗组(n=10),正常治疗组和CCl_(4)模型治疗组连续5 d灌胃给予罗格列酮10 mg·kg^(-1),正常对照组和CCl_(4)模型治疗组小鼠给予同体积纯净水。各组小鼠末次给药1 h后CCl_(4)模型对照组和CCl_(4)模型治疗组小鼠腹腔注射体积分数为1%的CCl_(4)(10 mL·kg^(-1)),正常对照组和正常治疗组小鼠腹腔注射橄榄油(10 mL·kg^(-1)),24 h后麻醉取血和留取肝脏组织。测定血清肝功能指标和炎性指标水平,用HE染色观察肝脏病理变化,测定肝脏氧化应激指标,用定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)测定肝脏组织相关mRNA和蛋白的水平。结果(1)CCl_(4)模型治疗组小鼠肝细胞模型排列较CCl_(4)模型组排列紧密,炎性细胞浸润及肝细胞坏死减少;(2)CCl_(4)模型治疗组小鼠血清谷氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平较CCl_(4)模型组小鼠显著降低(P<0.05);(3)CCl_(4)模型治疗组小鼠肝组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平较CCl_(4)模型组小鼠显著升高(P<0.05),丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平较CCl_(4)模型组小鼠显著降低(P<0.05);(4)CCl_(4)模型治疗组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平较CCl_(4)模型组小鼠显著降低(P<0.05);(5)CCl_(4)模型治疗组小鼠肝组织TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达水平较CCl_(4)模型组小鼠显著升高(P<0.05),Nrf2、NADPH醌氧化还原酶-1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO-1)和血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)mRNA表达水平较CCl_(4)模型组小鼠显著升高(P<0.05);(6)CCl_(4)模型治疗组小鼠肝脏组织Nrf2、NQO-1和HO-1蛋白表达水平均较CCl_(4)模型组小鼠显著升高(P<0.05),NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)和IL-1β蛋白表达水平均较CCl_(4)模型组小鼠显著降低(P<0.05)。结论罗格列酮通过激活Nrf2信号通路抑制氧化应激反应以及通过抑制NLRP3炎症小体活化抑制炎症反应从而发挥对CCl_(4)诱导的小鼠肝损伤产生保护作用。

基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎作用机制

目的基于PI3K/Akt/Nrf2信号通路探讨小蓟饮子治疗小鼠放射性膀胱炎(RC)的作用机制。方法将30只健康雌性SPF级ICR小鼠采用随机数字表法分为11只空白组和19只造模组。空白组不予造模,造模组腹腔麻醉后暴露膀胱部位于X射线辐照仪下以6-MV X射线、2 Gy/min照射10 min建立RC小鼠模型,空白组和造模组各随机取3只处死后,在光镜下观察膀胱组织形态学改变以确定造模成功。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组和中药组各8只,中药组按10 mL/(kg·d)灌胃1.68 g/mL小蓟饮子浓缩液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水,连续灌胃7 d。灌胃结束后使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定小鼠眼球血氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC);实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测膀胱组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA相对表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠眼球血中SOD、T-AOC、GSH-Px含量均降低(P均<0.05),MDA含量升高(P<0.05),膀胱组织中PI3K、Akt、Nrf2、HO-1 mRNA相对表达水平均升高(P均<0.05);与模型组比较,中药组小鼠眼球血中SOD、T-AOC、GSH-Px含量均升高(P<0.01或P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),膀胱组织中PI3K、Akt、Nrf2、HO-1 mRNA相对表达水平均升高(P均<0.01)。结论小蓟饮子可有效改善RC小鼠模型的损伤,其作用机制可能与PI3K/Akt/Nrf2信号通路调控氧化应激有关。

基于Keap1/Nrf2信号通路针灸拮抗DDP肾损伤小鼠的作用机制

目的以顺铂(DDP)诱导肾损伤模型小鼠,通过观察针灸对肾脏组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响,阐释针灸改善DDP所致肾损伤的保护机制。方法选用清洁级雄性KM小鼠40只,随机分为4组,每组10只。在干预开始前1天,对空白组外的3组小鼠按体质量腹腔注射顺铂10 mg·kg^(-1),空白组注射同等剂量的0.9%NaCl溶液,24 h后模型即成。针刺组与艾灸组均选取“大椎”“肝俞”“肾俞”“足三里”,分别进行针刺与艾灸,每天1次,连续5天,其余2组陪同固定不予干预。禁食1天后取材,运用ELISA法检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)含量及肾脏组织中Keap1和Nrf2的含量;Western blot法及Real-time PCR法检测各组小鼠肾脏组织中Keap1和Nrf2蛋白表达及基因转录情况。结果与空白组比,模型组肾脏组织中Keap1含量、蛋白表达及mRNA相对表达均增多(P<0.05),Nrf2含量及蛋白表达减少(P<0.05),Nrf2 mRNA相对表达增多;与模型组比,针刺和艾灸组小鼠肾脏组织中Keap1含量、蛋白表达以及mRNA相对表达均减少(P<0.05);Nrf2含量、蛋白表达以及mRNA相对表达均增多(P<0.05)。结论针灸可以改善DDP肾损伤模型小鼠的肾功能,提升其抗氧化应激能力,从而改善DDP化疗所致的肾损伤,其作用机制可能与Keap1/Nrf2信号通路有关。

基于Nrf2信号通路的骨骼肌氧化应激作用探讨藏红花素对小鼠力竭运动疲劳的改善作用

为研究藏红花素对小鼠运动疲劳的改善和骨骼肌氧化应激损伤的保护作用。通过建立小鼠力竭游泳模型,测定小鼠的力竭游泳时间、抗疲劳和抗氧化相关指标以及骨骼肌中相关基因mRNA的相对表达水平。结果表明,与对照组相比,低、中、高剂量藏红花素均极显著延长了小鼠的力竭游泳时间(P<0.01),其血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)含量和肌酸激酶(CK)乳酸脱氢酶(LDH)活性均呈下降趋势,肝糖原(HG)、肌糖原(MG)含量和抗氧化酶活性逐渐升高;另外,与对照组相比,不同剂量的藏红花素均提高了骨骼肌中抗氧化蛋白(HO-1、NQO1)和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-PX)基因mRNA表达水平。可见,藏红花素能够通过降低骨骼肌内氧化应激水平而发挥抗疲劳作用。

亚慢性铝暴露致大鼠认知障碍的Sirt1-Keap1/Nrf2信号通路机制

目的:观察亚慢性铝暴露对大鼠海马沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf2)和微小RNA-128-3p(miR-128-3p)表达水平的影响,探讨miR-128-3p和Sirt1-Keap1/Nrf2信号通路在铝致大鼠认知障碍中的机制。方法:选取32只6周龄SPF级健康雄性SD大鼠,体重(190±20)g,按体质量随机分为4组:对照组、低剂量(10μmol/kg)组、中剂量(20μmol/kg)组和高剂量(40μmol/kg)组,每组8只。腹腔注射麦芽酚铝建立大鼠染毒模型。染毒结束后,Morris水迷宫实验来检验大鼠的学习记忆能力,Western blot检测大鼠海马组织中Sirt1、Keap1和Nrf2蛋白的表达,RT-qPCR检测海马组织miR-128-3p的表达,冰冻切片荧光染色检测大脑皮层活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果:(1)在定位巡航实验中,第3、4和5天铝暴露组大鼠的逃避潜伏期均显著高于对照组(P<0.05)。第6天,高剂量组与对照组和低剂量组相比穿越平台和平台象限的次数均减少(P<0.01)。(2)各组大鼠海马组织中Sirt1和Nrf2的相对表达水平随着麦芽酚铝暴露剂量的增加逐渐降低;Keap1的相对表达水平随着麦芽酚铝暴露剂量的增加逐渐升高,且高剂量组中miR-128-3p相对表达水平显著高于对照组(P<0.05)。(3)随着染毒剂量的增加,大鼠海马中谷胱甘肽过氧化物酶的含量逐渐减少,ROS水平逐渐升高。结论:亚慢性铝暴露可激活大鼠海马中miR-128-3p的表达,抑制Sirt1-Keap1/Nrf2通路,使Sirt1-Keap1/Nrf2通路不能被激活发挥抗氧化能力,大鼠的抗氧化系统失衡,导致大鼠神经细胞氧化损伤,表现为大鼠的认知功能降低。

鸢尾苷元通过GSK-3β/Nrf2信号通路减轻Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤

目的:探讨鸢尾苷元对β淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其潜在机制。方法:以Aβ_(1-42)诱导人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y建立阿尔茨海默病(AD)神经元损伤模型,MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;相关试剂盒检测LDH、Caspase-3、氧化应激和GSK-3β水平;免疫荧光法检测4-HNE表达;PDB数据库和分子对接预测鸢尾苷元和GSK-3β的结合;Western Blot分析凋亡和GSK-3β/Nrf2通路相关蛋白表达。结果:鸢尾苷元可呈浓度依赖性缓解Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞活力损伤、凋亡及氧化应激,并可通过靶向GSK-3β从而调控GSK-3β/Nrf2信号。结论:鸢尾苷元可通过调控GSK-3β/Nrf2通路进而抑制Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞损伤。

肺损伤与修复:甲醛、褪黑素与Nrf2信号通路相互作用的研究现状

本文综述了急性肺损伤(acute lung injury, ALI)与修复过程中,甲醛(formaldehyde, FA)、褪黑素(melatonin, MT)和核因子E2相关因子2 (nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)信号通路的相互作用。FA暴露会导致ALI,而MT能够通过调节Nrf2信号通路发挥抗氧化和保护作用。Nrf2信号通路在FA和MT的相互作用中发挥中介作用,共同影响氧化应激和细胞损伤,从而对抗FA对肺组织的损伤,并促进肺损伤的修复。然而,目前的研究仍存在一些局限性和不足,未来可以从多个角度深入研究,为ALI的预防和治疗提供新思路和方法。

Nrf2信号通路在运动干预代谢相关脂肪性肝病氧化还原状态中的作用机制研究

代谢相关脂肪性肝病是一种常见的代谢性疾病,其主要特征是肝脏内积聚大量的脂肪,并且伴随着氧化应激的加剧。Nrf2 (核因子 - 肝细胞核转录因子 2) 信号通路是细胞对氧化应激的重要反应机制,其在抗氧化反应、解毒反应以及减少细胞损伤方面具有重要作用。运动是代谢相关脂肪性肝病治疗的重要手段之一,其作用机制主要与调节氧化还原状态和代谢有关。然而,目前关于Nrf2 在运动改善代谢相关脂肪性肝病氧化还原状态作用机制的综述研究相对较少。故本研究探讨了运动对代谢相关脂肪性肝病 Nrf2 信号通路的影响,旨在为运动促进代谢相关脂肪性肝病患者机体抗氧化功能的恢复提供理论依据。

氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡相关蛋白及Nrf2信号通路的影响

目的:探讨氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3表达水平的影响及其可能的机制。方法:体外培养小鼠肾小球系膜细胞,实验分为正常对照组(C组,5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(G组,5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖)和高糖+富氢水组(HH组,25 mmol/L葡萄糖+富氢水),培养48 h。采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)的蛋白水平;RT-PCR检测HO-1和NQO-1的mRNA表达;超氧化物阴离子荧光探针二氢乙啶检测活性氧簇(ROS)的水平;总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-8法)检测SOD活性。结果:与C组比较,H组Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平增加,Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05),而HH组上述蛋白表达水平与C组的差异均无统计学显著性;与H组比较,HH组的Bax和cleaved caspase-3蛋白下调,Bcl-2蛋白上调(P<0.05)。H组细胞内的ROS水平较C组明显增高,SOD活性较C组明显降低(P<0.05),而HH组的SOD活性与C组比较差异无统计学显著性;HH组细胞内的ROS水平较H组明显降低,SOD活性明显高于H组(P<0.05)。与C组比较,H组的Nrf2蛋白以及HO-1和NQO-1 mRNA及蛋白表达均减少(P<0.05);HH组的Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白以及HO-1和NQO-1的mRNA表达均明显高于H组(P<0.05)。结论:氢分子可抑制高糖状态下肾小球系膜细胞促凋亡蛋白的表达,同时诱导其抗凋亡蛋白的表达,其机制可能与激活Nrf2信号通路有关。

基于Nrf2信号通路探讨刺梨对过度训练大鼠骨骼肌氧化应激损伤保护的机制

目的:探讨刺梨介导核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路对过度训练大鼠骨骼肌氧化应激损伤防护的分子机制。方法:SPF级SD大鼠45只,随机分为安静对照组(C组),大强度运动组(HT组)、低剂量刺梨大强度运动组(L-HT组)、高剂量刺梨大强度运动组(H-HT组)。以跑台运动创建过度训练模型,L-HT、H-HT组分别以100 g/kg/d和200 g/kg/d的剂量灌胃刺梨原液,C组、HT组灌胃等剂量的生理盐水,6周大强度跑台运动,运动结束后次日处死,取血清和腓肠肌,分别测定各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平、组织中Nrf2通路相关蛋白Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、血红素氧合酶1(HO-1)和凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的相对表达水平(/β-actin)。结果:1)与C组相比,HT组血清中GSH浓度降低、SOD活性下降以及MDA含量增多(P<0.01),组织中Nrf2通路相关蛋白Nrf2表达水平降低(P<0.05),Keap1没有显著性差异(P>0.05)、HO-1表达水平下降(P<0.05),Bcl-2表达水平下降(P<0.05),Bax表达升高(P<0.05),Bcl-2/Bax值下降(P<0.05)。2)与HT组相比,L-HT、H-HT组血清中GSH浓度上升、SOD活性增强以及MDA含量降低(P<0.05或P<0.01),组织中Nrf2通路相关蛋白Nrf2、HO-1表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Keap1表达水平没有明显变化(P>0.05),Bcl-2表达水平升高(P<0.05),Bax表达下降(P<0.05),Bcl-2/Bax值增加(P<0.05)。结论:补充刺梨可介导Nrf2信号通路上调Nrf2、HO-1蛋白的表达,发挥抗氧化应激作用,进而缓解过度训练所致的大鼠骨骼肌氧化应激和过度凋亡,保护骨骼肌结构或功能的稳定。

基于Keap1/Nrf2信号通路的红芪多糖对糖尿病胃轻瘫大鼠氧化损伤的影响

目的观察红芪多糖对糖尿病胃轻瘫大鼠氧化损伤的影响,初步探讨其作用机制。方法72只雄性Wistar大鼠随机分为空白组12只和造模组60只。采用链脲佐菌素注射联合高糖高脂饲料不规则喂养诱导糖尿病胃轻瘫大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、阳性药组和红芪多糖高、中、低剂量组。阳性药组予枸橼酸莫沙必利溶液3.5 mg/kg灌胃,红芪多糖高、中、低剂量组予红芪多糖溶液0.12、0.06、0.03 g/kg灌胃,正常组和模型组予等体积纯净水灌胃,每日1次,连续8周。测定小肠组织肌电慢波频率、振幅,ELISA检测小肠组织活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)水平,Western blot检测小肠组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、硫氧还蛋白(Trx)表达。结果与空白组比较,模型组大鼠小肠组织肌电慢波频率和振幅明显降低(P<0.01),小肠组织ROS、8-OHdG及MDA水平明显升高,SOD、GSH-Px水平明显降低(P<0.01),Keap1蛋白表达明显升高(P<0.01),Nrf2、HO-1、Trx蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,阳性药组和红芪多糖高、中剂量组大鼠小肠组织肌电慢波频率和振幅明显升高(P<0.01),小肠组织ROS、8-OHdG及MDA水平明显降低,SOD、GSH-Px水平明显升高(P<0.05,P<0.01),Keap1蛋白表达明显降低,Nrf2、HO-1、Trx蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论红芪多糖对链脲佐菌素联合高糖高脂不规则喂养诱导的糖尿病胃轻瘫大鼠氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与调控Keap1/Nrf2信号通路和抑制氧化应激有关。

二氧化铈纳米颗粒预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞Nrf2信号通路的影响

目的:探讨二氧化铈纳米颗粒(nanoceria)预处理对大鼠缺血再灌注(IR)心肌细胞中核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路表达的影响。方法:选取健康成年大鼠50只,随机均分为5组:假手术组、模型组、nanoceria预处理1~3组。模型组、nanoceria预处理1~3组制备心肌IR动物模型(心肌缺血45 min后再灌注120 min),nanoceria预处理1~3组分别于造模术前24 h经尾静脉注射1~10、10~25和50 nm粒径的nanoceria悬液(2 m L/kg)。再灌注结束后,荧光定量PCR法检测再灌注区域心肌组织中Nrf2、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素氧化酶1(HO-1)mRNA表达水平,Western blot法检测胞核内Nrf2蛋白表达水平。结果:模型组心肌细胞内NQO1、HO-1 mRNA表达水平及胞核内Nrf2蛋白表达水平较假手术组增加(P<0.05),Nrf2 mRNA表达量无明显变化(P>0.05)。与模型组比较,nanoceria预处理1~3组Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA及胞核内Nrf2蛋白表达水平增加(P<0.05),nanoceria预处理2组变化最显著(P<0.05)。结论:nanoceria预处理可能通过激活Nrf2信号通路,发挥心肌保护作用。