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柚皮素通过下调Akt/mTOR信号通路抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞纤维化
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作者 李琰 刘佑晖 +2 位作者 蔡虎志 陈青扬 陈新宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2011-2019,共9页
目的:基于网络药理学分析和转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾NRK-49F细胞模型探究温阳振衰颗粒的药物成分柚皮素通过蛋白激酶B(PKB/Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路发挥抗纤维化作用的潜在机制。方法:网络药理学分析温... 目的:基于网络药理学分析和转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾NRK-49F细胞模型探究温阳振衰颗粒的药物成分柚皮素通过蛋白激酶B(PKB/Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路发挥抗纤维化作用的潜在机制。方法:网络药理学分析温阳振衰颗粒治疗肾纤维化的关键成分和作用靶点。Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测柚皮素对NRK-49F细胞的毒性作用,以及对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞纤维化的影响。观察NRK-49F细胞形态变化;qRT-PCR实验检测NRK-49F细胞中纤维化相关因子I型胶原(Col I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达;Western blot实验检测NRK-49F细胞中Col I、α-SMA、FN、Akt和mTOR的蛋白表达。结果:网络药理学的结果表明,温阳振衰颗粒的关键成分柚皮素可通过作用于Akt等靶点治疗肾纤维化。CCK-8实验结果显示,0~50μmol/L的柚皮素对NRK-49F细胞无明显毒性作用。50μmol/L的柚皮素可抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞纤维化和增殖(P<0.01),并下调Col I、α-SMA和FN蛋白的表达(P<0.01)。柚皮素抑制TGF-β1诱导的Akt和mTOR蛋白磷酸化(P<0.01)。结论:柚皮素是温阳振衰颗粒中甘草的黄酮类成分之一,可通过下调Akt/mTOR信号通路抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞纤维化。 展开更多
关键词 肾纤维化 温阳振衰颗粒 柚皮素 nrk-49f细胞 Akt/mTOR信号通路
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温阳振衰颗粒通过调节lncRNA LOC103694972/miR-29c-3p减轻TGF-β1诱导NRK-49F细胞的纤维化
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作者 李琰 刘佑晖 +2 位作者 蔡虎志 林湘东 陈新宇 《湖南中医药大学学报》 CAS 2023年第9期1553-1560,共8页
目的探讨温阳振衰颗粒通过lncRNA LOC103694972/miR-29c-3p对TGF-β1诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)的纤维化的影响。方法采用TGF-β1(10 ng·mL^(-1))处理NRK-49F细胞24 h,构建纤维化细胞模型。造模结束后给予空白血清、温... 目的探讨温阳振衰颗粒通过lncRNA LOC103694972/miR-29c-3p对TGF-β1诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)的纤维化的影响。方法采用TGF-β1(10 ng·mL^(-1))处理NRK-49F细胞24 h,构建纤维化细胞模型。造模结束后给予空白血清、温阳振衰颗粒含药血清和缬沙坦胶囊含药血清干预。CCK-8法检测温阳振衰颗粒对NRK-49F增殖的影响。实时荧光定量PCR检测LOC103694972和miR-29c-3p表达。Western blot法检测纤维化相关因子Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。同时研究过表达或沉默LOC103694972,温阳振衰颗粒含药血清对TGF-β1干预的NRK-49F细胞的影响。双荧光素酶报告实验检测LOC103694972与miR-29c-3p之间的调控作用。结果温阳振衰颗粒明显减弱TGF-β1诱导的细胞增殖和LOC103694972的表达(P<0.05),促进miR-29c-3p的表达(P<0.05),其干预效果与缬沙坦胶囊含药血清效果一致。双荧光素酶实验证实LOC103694972靶向调控miR-29c-3p。过表达LOC103694972促进温阳振衰颗粒含药血清干预下TGF-β1诱导NRK-49F细胞的活力,以及α-SMA蛋白、CollagenⅠ蛋白的表达(P<0.05)。而沉默LOC103694972具有相反的效果(P<0.05)。结论温阳振衰颗粒通过下调LOC103694972促进miR-29c-3p的表达,进而抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞纤维化。 展开更多
关键词 温阳振衰颗粒 转化生长因子Β1 LOC103694972 miR-29c-3p 纤维化 nrk-49f细胞
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不同部位鹿茸水提液对NRK-49F细胞促增殖作用的研究 被引量:11
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作者 吴帆 董玲 +4 位作者 王春梅 丁倩男 刘建亭 赓迪 戴俊东 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2014年第7期1537-1541,共5页
目的:研究鹿茸不同部位水提液体外对细胞促增殖作用的差异。方法:以大鼠肾成纤维细胞NRK-49F作为模型,以MTT法检测鲜鹿茸上、中、下三部分水提液的促细胞增殖率,以BCA法检测样品蛋白浓度,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法分析样品... 目的:研究鹿茸不同部位水提液体外对细胞促增殖作用的差异。方法:以大鼠肾成纤维细胞NRK-49F作为模型,以MTT法检测鲜鹿茸上、中、下三部分水提液的促细胞增殖率,以BCA法检测样品蛋白浓度,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法分析样品蛋白组成的差异。结果:上、中、下部鹿茸样品可溶性蛋白含量分别为17.89、16.04和6.89 mg·mL-1,从顶端到基部,鹿茸可溶性蛋白的含量依次降低。加样24 h时,鹿茸上部和中部样品分别在蛋白浓度800μg·mL-1和600μg·mL-1时达到最大促增殖率,分别为66.76%和64.36%,下部样品在1 000μg·mL-1时达到最大促增殖率,为58.87%。作用48 h后,鹿茸上部和中部样品均在蛋白浓度800μg·mL-1时达到最大促增殖率,分别为219.56%和215.86%,下部样品在蛋白浓度1 000μg·mL-1时达到最大促增殖率,为169.20%。鹿茸样品对细胞的增殖促进作用远大于10%胎牛血清。3个部位样品蛋白组成的SDS-PAGE图谱差异不大。结论:所有样品对细胞增殖均有促进作用,且呈现浓度依赖效应。不同部位样品主要蛋白组成差异不大。 展开更多
关键词 鹿茸 不同部位 MTT法 nrk-49f细胞 促增殖作用
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Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制
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作者 秦聪 张杰 +1 位作者 张礼军 吴品 《医学研究杂志》 2016年第4期17-21,共5页
目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组... 目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml)。通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少。Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P<0.01),而且呈现剂量效应。刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P<0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P<0.01)。结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的。 展开更多
关键词 Lefty-2 TGf-Β1 nrk-49f 转分化
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大黄素对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞增殖的影响 被引量:13
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作者 吉晶 何立群 《世界中医药》 CAS 2019年第5期1093-1097,共5页
目的:研究大黄素对TGF-β1诱导的肾成纤维细胞株(NRK-49F)增殖以及降低FN(纤连蛋白),Col-I(I型胶原蛋白),Smad2/3蛋白及基因表达的机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度大黄素对NRK-49F细胞增殖情况的影响;终浓度为20、40、80μmol/L的大... 目的:研究大黄素对TGF-β1诱导的肾成纤维细胞株(NRK-49F)增殖以及降低FN(纤连蛋白),Col-I(I型胶原蛋白),Smad2/3蛋白及基因表达的机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度大黄素对NRK-49F细胞增殖情况的影响;终浓度为20、40、80μmol/L的大黄素处理NRK-49F细胞30min后,模型组和观察组均以TGF-β1以5ng/mL的终浓度刺激24h,并收集细胞,蛋白质免疫印迹技术(Westernblot)检测FN,Col-I,Smad2/3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测FN,Col-I,Smad2/3mRNA表达。结果:模型组FN,Col-I,Smad2/3蛋白和基因的表达明显增加,大黄素含药血清组能抑制NRK-49F细胞增殖,且抑制FN,Col-I,Smad2/3蛋白和的表达(P<0.05)。大黄素浓度越高,抑制作用越明显,成一定的量效关系。结论:大黄素干预后,可改善肾纤维化程度,保护NRK-49F细胞模型损伤。 展开更多
关键词 大黄素 nrk-49f细胞 纤连蛋白(fN) I型胶原蛋白(Col-I) SMAD2/3
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百令胶囊加还原型谷胱甘肽含药血清对NRK-49F细胞增殖的影响 被引量:6
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作者 朱戈丽 林莉 +3 位作者 伍军 毕智敏 巩雪敏 李菊霜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第3期391-395,共5页
目的探讨百令胶囊加还原型谷胱甘肽(GSH)含药血清对大鼠间质成纤维细胞NRK-49F增殖及信号分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、Sma和Mad相关蛋白(Smad)表达水平的影响。方法采用单侧输尿管梗阻组大鼠制备含药血清(百令胶囊1.5 g/kg联合GSH 3... 目的探讨百令胶囊加还原型谷胱甘肽(GSH)含药血清对大鼠间质成纤维细胞NRK-49F增殖及信号分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、Sma和Mad相关蛋白(Smad)表达水平的影响。方法采用单侧输尿管梗阻组大鼠制备含药血清(百令胶囊1.5 g/kg联合GSH 300 mg/kg)和不含药血清。将对数生长期细胞分为正常对照组、模型组(10 ng/ml TGF-β1)、阴性对照组(10 ng/ml TGF-β1+10%不含药血清)和药物干预组(10 ng/ml TGF-β1+10%含药血清)。显微镜下观察各组细胞形态,采用CCK8检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞周期分布;RT-PCR检测各组细胞TGF-β1/Smad信号通路转录水平的表达;Western blot检测各组细胞TGF-β1/Smad信号通路蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组和阴性对照组NRK-49F细胞增殖活性增加(P<0.05),G0/G1期细胞减少(P<0.05),S期细胞增加(P<0.05),增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化Smad2/Smad2(p-Smad2/Smad2)、p-Smad3/Smad3的表达上调(P<0.05);与阴性对照组相比,药物干预组NRK-49F细胞增殖活性下降(P<0.05),G0/G1期细胞增加(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),PCNA、Cyclin D1、CollagenⅠ、α-SMA、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的表达下调(P<0.05)。结论百令胶囊加GSH含药血清可能通过抑制TGF-β1/Smad的表达,抑制肾间质纤维化。 展开更多
关键词 百令胶囊 还原型谷胱甘肽 nrk-49f细胞 转化生长因子-Β1 Sma和Mad相关蛋白
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Curcumin alleviates TGF-β1-induced fibrosis in NRK-49F cells via suppression of miR-21 expression,and regulation of the TGF-β1/smad3 signaling pathway 被引量:2
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作者 Lan Zhang Yi Liu +5 位作者 Xiting Wang Cheng Li Mengmeng Shen Liming Di Shuangshuang He Yu Li 《Journal of Traditional Chinese Medical Sciences》 2020年第1期68-74,共7页
Objective:Overexpression of microRNA-21(miR-21)has been well-recognized during fibrosis in a wide range of tissue types through regulation of fibrogenesis via diverse pathways.Curcumin exhibits antifibrotic effects in... Objective:Overexpression of microRNA-21(miR-21)has been well-recognized during fibrosis in a wide range of tissue types through regulation of fibrogenesis via diverse pathways.Curcumin exhibits antifibrotic effects in various organs.We and others have previously demonstrated that curcumin has positive effects on the protection against fibrosis.However,the effect of curcumin on miR-21 expression has not been reported.Methods:In this study,transforming growth factor-b1(TGF-b1)-stimulated rat renal fibroblast cells(NRK-49F)were transfected with miR-21 inhibitors,then the expression of Smad3,a-smooth muscle actin(a-SMA),type I collagen(COL1A1),and type III collagen(COL3A1)was determined using quantitative real-time-PCR(qRT-PCR)and western blot analysis.The effect of curcumin on production of the extracellular matrix was evaluated using immunofluorescence,qRT-PCR,and western blot analysis.Results:TGF-b1 stimulation upregulated the expression of miR-21 and induced fibrogenesis in NRK-49F cells.Transfection with miR-21 inhibitors selectively decreased smad3 activity,and noticeably reduced the expression of a-SMA,COL1A1,and COL3A1.Curcumin treatment significantly inhibited the expressions of smad3,a-SMA,COL1A1,COL3A1,as well as miR-21 expression in NRK-49F cells in a dosedependent manner.Conclusion:Curcumin exerted its anti-fibrotic effects by targeting the TGF-b1/smad3 signaling pathway and suppressing miR-21 expression,thereby provides novel insight in the protective effects of curcumin against fibrosis in various organs. 展开更多
关键词 CURCUMIN MIR-21 nrk-49f Renal fibrosis TGf-b1/Smad3
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异丙酚下调TGF-β1/smad2信号通路促进TGF-β1活化的NRK-49F细胞的凋亡 被引量:3
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作者 连娜 黄鑫 +2 位作者 刘红娇 郭银 周南 《解剖科学进展》 2020年第6期668-672,共5页
目的利用转化生长因子-β1(TGF-β1)活化大鼠肾成纤维细胞系NRK-49F探讨异丙酚(Propofol,PPF)调控TGF-β1/Smad 2信号通路对肾纤维化的保护作用。方法采用TGF-β1活化NRK-49F细胞的方法造成肾纤维化细胞模型。将细胞分为正常组、TGF-β... 目的利用转化生长因子-β1(TGF-β1)活化大鼠肾成纤维细胞系NRK-49F探讨异丙酚(Propofol,PPF)调控TGF-β1/Smad 2信号通路对肾纤维化的保护作用。方法采用TGF-β1活化NRK-49F细胞的方法造成肾纤维化细胞模型。将细胞分为正常组、TGF-β1组和PPF干预组。CCK-8检测各组细胞的增殖能力;TUNEL检测各组细胞的凋亡情况;Western blot法检测各组细胞Bax、Bcl-2及caspase-3的蛋白表达;qPCR法检测各组细胞中TGF-β1和smad 2 mRNA的表达;Western blot法检测各组细胞中TGF-β1和(p-)smad 2蛋白水平的表达。结果与正常组相比,TGF-β1组细胞增殖能力明显升高,凋亡细胞数明显降低,Bax/Bcl-2比例以及cleaved caspase-3蛋白水平明显降低,TGF-β1、和(p-)smad 2 mRNA和蛋白表达水平显著升高;与TGF-β1组相比,PPF干预治疗后的TGF-β1组细胞增殖能力明显降低,凋亡细胞数明显增加,Bax/Bcl-2比例以及cleaved caspase-3蛋白水平明显升高,TGF-β1、和(p-)smad 2 mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论 PPF抑制TGF-β1诱导NRK-49F细胞的增殖、活化并诱导其凋亡从而发挥肾保护作用,与抑制TGF-β1/Smad2信号通路相关。 展开更多
关键词 异丙酚 nrk-49f细胞 肾纤维化 TGf-β1/smad2信号通路
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甘草酸对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞活化及分泌细胞外基质的影响 被引量:2
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作者 邸黎明 张澜 +2 位作者 申萌萌 贺双双 李彧 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期421-427,共7页
目的探讨甘草酸对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)中纤维化相关因子表达的影响。方法体外培养NRK-49F细胞,不同浓度甘草酸干预细胞48 h后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,确定对细胞活性无显著影响的作用... 目的探讨甘草酸对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)中纤维化相关因子表达的影响。方法体外培养NRK-49F细胞,不同浓度甘草酸干预细胞48 h后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,确定对细胞活性无显著影响的作用浓度。以10μg/L TGF-β1刺激NRK-49F细胞构建肾间质纤维化细胞模型,加入不同浓度甘草酸进行干预,免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL1)表达情况。实时荧光定量PCR、Western Blot法检测纤维化相关因子α-SMA、COL1、Ⅲ型胶原(COL3)mRNA及蛋白表达情况,以评价甘草酸对成纤维细胞活化及细胞外基质分泌的影响。结果CCK-8结果显示甘草酸在100~600μmol/L浓度范围内对NRK-49F细胞活性无影响。免疫荧光结果表明,加入甘草酸后可抑制α-SMA表达及COL1分泌,随甘草酸浓度增加,抑制作用增强。Western Blot结果显示,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3的蛋白表达,其中甘草酸150μmol/L组COL1的蛋白表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3表达均降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3表达,甘草酸150μmol/L组COL1 mRNA的表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3 mRNA表达均降低(P<0.01)。结论甘草酸能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞中α-SMA、COL1、COL3的mRNA及蛋白表达,其作用机制有待进一步探讨。 展开更多
关键词 甘草酸 转化生长因子β1 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 Α-平滑肌肌动蛋白 大鼠肾间质成纤维细胞
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热炸工艺对不同部位梅花鹿鹿茸细胞增殖活性的影响 被引量:3
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作者 丁倩男 王春梅 +4 位作者 吴帆 田敬欢 赓迪 戴俊东 董玲 《中华中医药学刊》 CAS 2014年第9期2135-2137,共3页
目的:考察传统热炸工艺对梅花鹿鹿茸不同部位细胞增殖活性的影响;方法:利用传统热炸法炮制东北梅花鹿鹿茸,用Bradford法测定鹿茸可溶性蛋白含量;利用MTT法测定鲜鹿茸与热炸炮制鹿茸上、中、下部位对NRK-49F细胞增殖活性的影响。结果:鲜... 目的:考察传统热炸工艺对梅花鹿鹿茸不同部位细胞增殖活性的影响;方法:利用传统热炸法炮制东北梅花鹿鹿茸,用Bradford法测定鹿茸可溶性蛋白含量;利用MTT法测定鲜鹿茸与热炸炮制鹿茸上、中、下部位对NRK-49F细胞增殖活性的影响。结果:鲜鹿茸上中下部均具有促进细胞增殖的能力,从上到下活性减弱;热炸炮制品促细胞增殖活性降低。结论:梅花鹿鹿茸具有较强的促细胞增殖能力,传统热炸炮制明显降低鹿茸的促细胞增殖的能力。 展开更多
关键词 梅花鹿鹿茸 热炸 不同部位 nrk-49f 细胞增殖
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MAPK反义寡核苷酸诱导大鼠成纤维细胞凋亡的研究
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作者 陈曦林 宫念樵 +2 位作者 董冲 陈知水 叶启发 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第17期2573-2576,共4页
目的探讨MAPK反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASO)对大鼠肾成纤维细胞凋亡的影响。方法脂质体转染法将MAPK反义寡核苷酸导入NRK-49F细胞中,Western-blotting测定细胞内MAPK蛋白的表达,DAPI染色观察细胞形态,流式细胞术检... 目的探讨MAPK反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASO)对大鼠肾成纤维细胞凋亡的影响。方法脂质体转染法将MAPK反义寡核苷酸导入NRK-49F细胞中,Western-blotting测定细胞内MAPK蛋白的表达,DAPI染色观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡比率。结果MAPKASO降低细胞MAPK蛋白含量;且可促进细胞凋亡,转染细胞出现凋亡特征性改变,凋亡率为35.8%,与其余各组有显著差异(P<0.05)。结论MAPK反义寡核苷酸通过阻断信号转导分子MAPK诱导大鼠成纤维细胞细胞凋亡,为防治肾移植术后间质纤维化提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 丝裂素活化蛋白激酶 反义寡核苷酸 成纤维细胞 凋亡 肾纤维化
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3种蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性的保护作用
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作者 李祎 王春梅 +3 位作者 王瀚民 丁倩男 董玲 戴俊东 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期3098-3102,共5页
目的:确定对鹿茸样品活性有保护作用的蛋白酶抑制剂种类及作用浓度。方法:选择金属蛋白酶抑制剂EDTA-2Na、胰蛋白酶抑制剂(Approtinin)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin),以MTT法检测其对NRK-49F细胞增殖活性和对鹿茸促细胞增殖活性的影响以... 目的:确定对鹿茸样品活性有保护作用的蛋白酶抑制剂种类及作用浓度。方法:选择金属蛋白酶抑制剂EDTA-2Na、胰蛋白酶抑制剂(Approtinin)和胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin),以MTT法检测其对NRK-49F细胞增殖活性和对鹿茸促细胞增殖活性的影响以及对鹿茸样品33℃放置不同时间的保护作用。用Bradford法测鹿茸样品蛋白含量并调整到作用浓度400μg/mL。结果:当EDTA-2Na、Approtinin和Pepstatin浓度分别小于200、50、400μg/mL时对细胞增殖活性没有影响。EDTA-2Na浓度为6.25和12.5μg/mL时对鹿茸促增殖活性有加强作用,但对于鹿茸样品高温下放置没有明显的保护作用。12.5μg/mL的Approtinin对鹿茸促增殖活性有促进作用,并且对鹿茸样品高温放置有明显的保护作用,6.25μg/mL时效果最佳(P<0.05)。12.5μg/mL的Pepstatin表现出对鹿茸促增殖活性的加强作用,并表现出对鹿茸样品高温放置的保护作用,但数据无统计学差异。结论:3种蛋白酶抑制剂中胰蛋白酶抑制剂对鹿茸促细胞增殖活性有较好的保护作用。 展开更多
关键词 nrk-49f 噻唑蓝比色法 金属蛋白酶抑制剂EDTA-2Na 胰蛋白酶抑制剂 胃蛋白酶抑制剂 鹿茸蛋白
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