NRP-1mAb对胃癌细胞BGC-823增殖的影响

目的观察自主研发的抗NRP-1b1/b2IgG单克隆抗体(NRP-1mAb)对胃癌BGC-823细胞生长的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法实验室制备NRP-1mAb,采用SDS-PAGE检测纯度。采用0、25、100、200、400μg/ml NRP-1mAb培养胃癌BGC-823细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化;采用MTT法、集落形成实验、流式细胞术观察胃癌细胞BGC-823的增殖、集落形成和凋亡的情况;Western blotting法检测NRP-1mAb作用后Akt、p38、ERK、JNK信号蛋白磷酸化情况。结果SDS-PAGE检测显示,NRP-1mAb的纯度在95%以上。光学显微镜观察显示,NRP-1mAb作用后,BGC-823细胞形态呈凋亡改变。MTT实验显示,NRP-1mAb抑制BGC-823细胞的增殖作用呈浓度和时间依赖性(P<0.01)。集落形成实验显示,不同浓度NRP-1mAb均能显著抑制BGC-823细胞的集落形成,其抑制率呈浓度依赖性(P<0.01)。流式细胞术检测显示,不同浓度NRP-1mAb均明显促进BGC-823细胞凋亡,且大部分集中在早期凋亡。Western blotting检测显示,BGC-823细胞的Akt磷酸化受到抑制,ERK、p38、JNK的磷酸化水平无明显变化。结论NRP-1mAb能抑制胃癌细胞BGC-823的生长、促进凋亡,可能与抑制Akt磷酸化有关。