环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的调节作用。方法:用不同浓度的NS-398作用BEL-7402细胞后,MTT法测定细胞增殖抑制情况,FCM法和TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况。结果:NS-398可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,诱导其凋亡。免疫细胞化学法检测结果显示,与未处理组相比,NS-398作用可使BEL-7402细胞中COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P<0.01)。结论:NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关。

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P【0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P【0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P【0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。

NS-398联合顺铂对Eca-109细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察环氧化物酶-2选择性抑制剂NS-398联合顺铂对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用细胞增殖抑制实验(CCK-8法)检测不同-质量浓度的顺铂(1.25、2.50、5.00和10.00mg/L)单用及联合小剂量(1.00和10.00μmol/L)NS-398作用于人食管癌Eca-109细胞24h后细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及早期凋亡情况。结果:顺铂、N-398单用及2者联合对Eca-109细胞均有抑制增殖作用(F顺铂=1391.300,FNS-398=642.898,F交互=15.254,P均<0.001),可阻止细胞周期的进程(G0/G1期:F顺铂=1308.300,FNS-398=133.138,F交互=26.692,P均<0.001;S期:F顺铂=1470.300,FNS-398=149.638,F交互=30.000,P均<0.001),诱导细胞凋亡(F顺铂=39.493,P<0.001,FNS-398=0.000,P=0.987;F交互=4.325,P=0.006)。顺铂联合NS-398对Eca-109细胞的作用明显强于顺铂单用,且随着NS-398剂量的增高而增高(P<0.01)。结论:NS-398能够增强顺铂对食管癌细胞的生长抑制和诱导凋亡效应。

NS-398诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究选择性环氧化酶 2 (COX 2 )抑制剂NS 398对人肝癌细胞HepG2 凋亡的影响 ,及其相关蛋白Bcl 2在细胞凋亡中的作用。方法 :通过体外细胞培养 ,应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪观察NS 398对HepG2 的凋亡诱导作用 ,应用免疫细胞化学法观察Bcl 2在人肝癌细胞HepG2 凋亡中的表达。结果 :NS 398处理HepG2 细胞后 ,电镜下可见到细胞核固缩、染色质凝集成新月型紧靠核膜周边 ,核碎裂、染色质片断化等典型的细胞凋亡形态变化。荧光显微镜及流式细胞检测则未见凋亡征象。免疫细胞化学分析显示 ,NS 398处理后的HepG2 细胞 ,其Bcl 2表达较对照组明显下降。结论 :COX 2选择性抑制剂NS 398对人肝癌HepG2 细胞有显著的凋亡诱导作用 ;抗凋亡基因Bcl 2在NS 398诱导的HepG2 细胞凋亡中有重要的调控作用。

NS-398降低结肠癌细胞系HT-29体外侵袭力

研究环氧合酶 2选择性抑制剂NS 398对结肠癌细胞系HT 2 9体外侵袭力的作用。通过流式细胞术检测COX 2在HT 2 9细胞的表达 ,MTT法检测HT 2 9细胞与matrigel的黏附性及细胞活性 ,通过改良的Boyden小室法观察HT 2 9细胞侵袭重组基底膜的能力以及趋化运动能力。结果显示HT 2 9细胞COX 2表达阳性 ,存在NS 398作用的靶 ,0 1、1 0、10 μmol/LNS 398可显著抑制HT 2 9细胞与matrigel的黏附性以及侵袭重组基底膜的能力和趋化运动能力 ,且上述作用与NS 398的毒性作用无关 ,提示NS

NS-398对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的 :探讨NS 398对裸鼠胃癌移植瘤血管生成的影响。方法 :1 2只裸鼠随机分为 2组 ,以人胃癌细胞株SGC790 1建立荷瘤裸鼠动物模型。治疗组于接种第 2d开始给予 1 0mg/kgNS 398腹腔注射 ,隔d给药 ;对照组隔d腹腔注射同体积PBS ,连续 2 0d ,观察抑瘤率 ,应用免疫组织化学技术检测 2组肿瘤组织环氧合酶 2 (COX 2 )、VEGF表达及微血管密度 (MVD)。结果 :NS 398抑瘤率达 88.7% ,COX 2、VEGF及MVD在治疗组分别为 2 .6± 0 .8,2 .3± 1 .2和 2 1 .2± 4 .8,显著低于对照组的 5 .0± 0 .6 ,5 .8± 0 .4和 4 1 .3± 2 .6 (P均 <0 .0 5 )。结论 :NS 398可能通过抑制COX 2。

顺铂联合COX-2选择性抑制剂NS-398对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的体外观察顺铂(diamminedichloroplatinum,DDP)以及DDP联合环氧合酶-2(cyclooxygenase,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,比较单独应用DDP与DDP联合NS-398应用于食管癌Eca-109细胞的抗肿瘤效应。方法 CCK-8法检测不同浓度的DDP(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00mg/L)单独作用及DDP联合NS-398(1.00、10.00μmol/L)作用Eca-109细胞24h的细胞增殖抑制率。琼脂糖凝胶电泳技术检测DDP(1.25、2.50、5.00mg/L)单用及联合NS-398(1.00、10.00、80.00μmol/L)作用Eca-109细胞24h和48h的DNA Ladder出现情况。透射电镜观察DDP单用以及联合NS-398作用于Eca-109细胞24h超微结构的变化。药物未处理组作为对照组。结果细胞增殖抑制实验表明顺铂、NS-398对Ec-109细胞有剂量依赖性抑制增殖作用(P<0.05)。顺铂联合NS-398用药组细胞增殖抑制率明显高于同浓度顺铂单用组,且随添加的NS-398的剂量的增加而增加,DDP联合NS-398用药组对Ec-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应明显高于DDP单药组,二者具有协同效应。结论与DDP单用相比,添加低剂量NS-398能够增强DDP对Eca-109细胞的增殖抑制效应和诱导凋亡效应。

NS-398对肝细胞癌VEGF、MMP-9表达的调节

目的探讨NS-398对肝细胞癌血管生成和侵袭的调节作用。方法NS-398取0、25、50、75、100μmol/L5个浓度组,每个浓度组选取24h、48h、72h三个作用时间点进行检测。采用RT-PCR和流式细胞技术,观察NS-398对人肝癌SMMC-7721细胞株VEGF、MMP-9表达的影响。结果NS-398对SMMC-7721细胞有明显的生长抑制作用。与对照组相比,NS-398能显著抑制SMMC-7721细胞COX-2、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达,并呈显著的剂量和时间依赖性关系(P<0.001)。结论NS-398能显著抑制SMMC-7721肝细胞癌中VEGF、MMP-9mRNA和蛋白的表达。

COX-2抑制剂(NS-398)对结肠癌HT-29细胞体外侵袭力的作用及CD44v6、nm23-H1基因的调节

目的研究NS-398对结肠癌HT-29细胞体外侵袭力的作用及CD44v6、nm23-H1基因的调节。方法通过流式细胞仪检测COX-2和CD44v6的表达,MTT检测细胞活性,改良的Boyden小室法观察HT-29细胞侵袭重组基底膜的能力,RT-PCR观察nm23-H1mRNA的表达。结果HT-29细胞COX-2表达阳性,0.1、1.0、10μmol/L NS-398可显著抑制HT-29细胞侵袭重组基底膜的能力,且上述作用与NS-398的毒性作用无关。NS-398可下调CD44v6的表达,上调nm23-H1mRNA的表达。结论NS-398具有抑制结肠癌细胞HT-29体外侵袭力的作用,下调CD44v6的表达和上调nm23-H1mRNA的表达可能是其作用机制。

NS-398抑制SKOV3细胞恶性生物学特性的机制

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂NS-398对卵巢癌细胞恶性生物学特性的影响。方法以卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,根据NS-398的处理分为对照组、实验组。利用MTS法和免疫组化法检测Ki-67蛋白表达,从而监测NS-398对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和侵袭实验分别观察细胞迁移和侵袭能力的变化,采用RT-PCR法检测基质金属蛋白酶(MMP)mRNA的表达情况;采用实时荧光定量PCR及Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关分子表达情况。结果 1 MTS增殖实验表明NS-398对SKOV3细胞增殖作用无影响,免疫组化结果与之一致;2划痕实验和侵袭实验分别显示,NS-398显著下调SKOV3细胞的迁移和侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果表明NS-398抑制MMP的mRNA表达;3 Western blot结果表明NS-398上调SKOV3细胞E-cadherin的表达,下调Vimentin、Slug、Snail的表达。结论 COX2抑制剂通过阻止MMP的表达和EMT的发生,从而下调SKOV3细胞的迁移、侵袭能力。

丙谷胺和NS-398协同诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的:探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺和特异性环氧化酶(COX)-2抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45细胞凋亡的调控作用及其机制。方法:MKN-45细胞常规培养于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,待细胞长至亚单层后加丙谷胺(5mmol/L)和(或)NS-398(0.01mmol/L),连续培养48h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR法测定凋亡抑制基因bcl-2mRNA表达。结果:丙谷胺组、NS-398组和联合用药组的细胞凋亡率分别为(24.72±3.19)%、(26.69±3.35)%和(36.11±4.57)%,显著高于对照组(1.57±0.55)%(P<0.01),联合用药组的细胞凋亡率明显高于丙谷胺或NS-398单一用药组[(36.11±4.57)%vs(24.72±3.19)%和(26.69±3.35)%,P<0.05]。丙谷胺和NS-398显著下调bcl-2mRNA在MKN-45细胞的表达(P<0.05)。结论:丙谷胺、NS-398通过下调胃癌细胞bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合使用具有协同作用。

选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398与卡铂在宫颈癌治疗中的协同作用。方法:用NS-398、卡铂及两者联合作用人宫颈癌Hela细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测NS-398、卡铂及两者联合对宫颈癌细胞增殖的影响,流式细胞仪PI染色法分析NS-398、卡铂处理后宫颈癌细胞凋亡率和细胞周期的改变。结果:NS-398、卡铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用。卡铂联合NS-398对人宫颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加,其联合抑制率近似于NS-398和卡铂单药抑制率之和,也近似于2倍卡铂剂量时的增殖抑制率。流式细胞仪检测发现,与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显增加,而S期细胞明显减少,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);而卡铂处理组G1期细胞明显减少,S期细胞明显增加,两组比较有统计学意义(P<0.05)。NS-398(200μmol/L)作用Hela细胞48h后,流式细胞仪检测发现,NS-398处理组凋亡率为3.43%±0.02%,对照组凋亡率为1.48%±0.03%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。而卡铂(80mg/L)处理组凋亡率为9.32%±0.02%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:选择性COX-2抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的增殖具有抑制作用。NS-398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关。NS-398与卡铂在宫颈癌化疗中具有叠加作用。

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对人肝癌HepG2细胞株的生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2表达的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白bcl-2的表达。结果NS-398抑制HepG2的增殖活性,经20、40、80和160μmol/L的NS-398处理细胞48h后,其抑制率分别为6.72%、16.21%、20.86%和25.34%,呈剂量依赖效应关系;细胞经160μmol/L的NS-398处理24h、48h和72h后,G0/G1期细胞由76.07±0.75%分别减少至62.27±0.74%、59.17±1.47%和53.03±1.60%(P<0.05),S期细胞由11.40±0.79%分别增加至13.23±0.81%、16.20±1.95%和16.60±1.25%(P<0.05),G2/M期细胞无明显变化;凋亡细胞增多,凋亡率分别为8.47%、16.3%和23.9%;细胞经160μmol/L的NS-398处理48h后bcl-2蛋白与对照组比,表达下调(P<0.01)。结论NS-398对人肝癌细胞株HepG2有抑制增殖、诱导凋亡作用,细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调有关。

NS-398对结肠癌细胞系HT-29超微结构的影响

目的选择性环氧合酶2抑制剂NS 398可抑制结肠癌细胞系HT- 2 9的体外侵袭力,本研究进一步观察其对HT- 2 9细胞超微结构的影响。方法通过扫描电镜观察细胞表面微绒毛,通过激光共聚焦显微镜观察细胞骨架成分F actin。结果未处理的HT- 2 9细胞表面微绒毛和丝状伪足较多,其末端有分叉现象,NS- 398处理后,细胞表面的微绒毛减少、皱缩呈小球样改变,以10 μmol/L处理组明显。荧光标记的F actin较集中地分布于HT- 2 9细胞核周围,呈现“环状”结构,10 μmol/LNS- 398处理后细胞核周围的“环状”结构消失,荧光强度减弱。结论NS- 398可显著改变HT- 2 9细胞的超微结构,这可能是其抑制HT 2 9侵袭力的机制之一。

选择性环氧化酶2抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用

目的观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法 NS-398 25,50和100μmol·L-1作用于AGS细胞0～48 h,用CCK-8法检测细胞存活率。NS-398 50μmol·L-1作用于AGS细胞48 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测Notch信号通路相关基因的表达,Western印迹法检测Notch胞内结构域(NICD)及下游靶基因NF-κB和毛蛋白和断裂1增强子(Hes-1)蛋白表达。结果 NS-398 25,50和100μmol·L-1能抑制胃癌细胞AGS增殖,并呈时间(r时间=-1.00,P=0.003,50μmol·L-1)和浓度(r浓度=-0.999,P=0.027,48 h)依赖性。NS-39850μmol·L-1作用48 h,AGS细胞凋亡率为(20.1±3.5)%,比正常对照组(3.5±1.4)%明显增加(P<0.05);Notch信号通路受体Notch1和Notch2及Notch信号通路配体δ样1(DLL1)和锯齿状1(JAG1)mRNA表达无明显变化,Notch下游靶基因Hes-1和NF-κB mRNA表达较正常对照组明显减少(P<0.05);NICD,Hes-1和NF-κB蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过抑制Notch信号途径抑制胃癌细胞AGS增殖。

丙谷胺联合NS-398对人大肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究胃泌素受体拮抗剂(丙谷胺)联合环氧合酶-2抑制剂(NS-398)对人大肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响。方法:人大肠癌LoVo细胞株培养于RPMI1640培养液中,加入丙谷胺6个稀释度1.0、3.0、5.0、6.0、8.0、10.0 mmol/L及NS-398 6个稀释度0.01、0.1、1.0、10.0、100.0、1000.0μmol/L连续培养24 h后用噻唑蓝(MTT)比色实验检测肿瘤细胞增殖抑制率;单用丙谷胺稀释度为6 mmol/L,单用NS-398稀释度为100.0μmol/L及两者的混和液作用24、48、72 h后检测肿瘤细胞抑制率;单用丙谷胺稀释度为6 mmol/L,单用NS-398稀释度为100.0μmol/L以及2者的混和液作用24 h后,用流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果:丙谷胺与NS-398均能抑制LoVo细胞株增殖,丙谷胺与NS-398能协同作用,抑制大肠癌LoVo细胞增殖,且协同作用随药物作用时间的延长而增强。流式细胞仪检测表明两者均能抑制大肠癌LoVo细胞从G1期到S期的转化,两者联合用药抑制效果更为显著。结论:丙谷胺与NS-398均能抑制大肠癌LoVo细胞从G1期到S期的转化从而抑制LoVo细胞株的增殖,两者合用具有协同抗癌作用。

NS-398抑制肝癌SMMC-7721细胞及组织MVD值、VEGF、MMP-9的表达

目的探讨NS-398对肝细胞癌MVD值、VEGF、MMP-9表达的影响。方法采用RT-PCR和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞VEGF、MMP-9表达。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤MVD,ELISA法测定血清中PGE2水平。结果在体外,NS-398可以呈剂量和时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达;在体内,可显著降低裸鼠移植瘤MVD、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达(P<0.001),并能降低裸鼠血清中PGE2水平(P<0.001)。结论COX-2与肝细胞癌血管生成密切相关,NS-398可通过下调VEGF和MMP-9的表达而抑制肝细胞癌血管生成。

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398下调K562/ADM细胞MDR1/P-gp表达

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对白血病多药耐药K562/ADM细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法以细胞K562/ADM为NS-398作用的靶细胞,MTT法检测细胞增殖活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因(MDRl)mRNA的表达;流式细胞仪(FCM)测定P-gp蛋白表达水平。结果NS-398显著抑制K562/ADM细胞增殖,呈时间、剂量正相关效应;下调K562/ADM细胞MDRl基因表达并抑制P-gp合成,呈明显的剂量依赖关系。结论COX-2抑制剂NS-398可在一定时间和剂量范围抑制白血病多药耐药K562/ADM细胞MDRl/P-gp表达,并能抑制K562/ADM多药耐药细胞增值。

NS-398对人胃癌细胞株增殖及COX-2表达的影响

目的 体外观察选择性环氧化酶 2 (COX- 2 )抑制剂 NS- 398对人胃癌细胞株 SGC790 1细胞增殖及COX- 2表达的影响。方法 采用噻唑蓝 (MTT)法观察 NS- 398对 SGC790 1细胞增殖的影响 ,流式细胞仪(FCM)研究 NS- 398对 SGC790 1细胞凋亡的作用 ,免疫细胞化学观察 COX- 2蛋白的表达。结果 体外 NS- 398能减少 SGC790 1细胞株 COX- 2的表达 ,对 SGC790 1有细胞毒作用 ,可增加细胞凋亡率。结论 体外 NS- 398对SGC790 1细胞增殖有抑制作用。可能与抑制 COX-

Cox-2抑制剂NS-398对人胆管癌QBC939细胞增殖侵袭的影响

目的观察选择性Cox-2抑制剂NS-398对人胆管癌细胞株QBC939增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胆管癌QBC939细胞,加入不同浓度的NS-398培养后,采用MTT比色法观察不同浓度NS-398作用不同时间对QBC939细胞的增殖抑制情况;采用Transwell小室法检测不同浓度NS-398作用后QBC939细胞的侵袭能力。结果 NS-398对QBC939细胞的增殖有抑制作用,并呈时间及浓度依赖性(P均<0.01),最大抑制浓度为100μmol/L。加入NS-398培养36 h后,随着药物浓度的增加,QBC939细胞体外侵袭能力明显减弱(P<0.01)。结论NS-398可抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,并减弱其体外侵袭能力。