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定量PCR-Taqman探针法检测NS0宿主细胞残留DNA的方法学验证 被引量:1
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作者 武刚 付志浩 +4 位作者 杨志行 崔永霏 张荣建 宗伟英 王兰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第24期2001-2009,共9页
目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行... 目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1内,线性良好(r2> 0. 99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL^-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L^-1;精密度良好(RSD≤30%);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。 展开更多
关键词 ns0 DNA标准品 ns0宿主细胞DNA残留检测 PCR-Taqman探针法 方法验证
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表达抗-CD25单克隆抗体的GS-NS0骨髓瘤细胞无血清培养及代谢特性 被引量:1
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作者 赵亮 范里 +1 位作者 张旭 谭文松 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1069-1076,共8页
抗-CD25单克隆抗体作为免疫抑制剂拥有广阔的市场前景和巨大的经济价值。本实验以表达抗?CD25单克隆抗体的GS-NS0细胞为研究对象,开发了支持其大规模培养和抗体表达的无血清低蛋白培养基,批培养最大活细胞密度和最大抗体浓度分别达3... 抗-CD25单克隆抗体作为免疫抑制剂拥有广阔的市场前景和巨大的经济价值。本实验以表达抗?CD25单克隆抗体的GS-NS0细胞为研究对象,开发了支持其大规模培养和抗体表达的无血清低蛋白培养基,批培养最大活细胞密度和最大抗体浓度分别达3×106cells/mL和300mg/L以上,比商业无血清培养基(Excell 620+0.2% primatone)分别提高了100%和46%。通过批培养实验,研究了细胞的生长、葡萄糖和氨基酸代谢、以及产物表达特点,并揭示了批培养过程中初始葡萄糖浓度对GS-NS0细胞生长与代谢的影响规律。为优化GS-NS0细胞培养过程和抗CD25单抗成功迈向产业化提供了重要的科学依据。 展开更多
关键词 GS-ns0细胞 无血清培养基 抗CD25单克隆抗体 代谢特性
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顶管机组生产油管的实践探索 被引量:2
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作者 何新田 陈静 《钢管》 CAS 2007年第5期31-35,共5页
为了充分挖掘现有顶管机组的生产潜力,调整产品结构,提高经济效益,武钢集团汉阳钢厂对采用顶管机组生产J55、N80Ⅰ类钢级油管进行了有益的探索,介绍了J55、N80Ⅰ类钢级油管主要的生产技术难点、所采取的相应工艺技术措施和取得的效果。... 为了充分挖掘现有顶管机组的生产潜力,调整产品结构,提高经济效益,武钢集团汉阳钢厂对采用顶管机组生产J55、N80Ⅰ类钢级油管进行了有益的探索,介绍了J55、N80Ⅰ类钢级油管主要的生产技术难点、所采取的相应工艺技术措施和取得的效果。经检测及用户使用表明,产品的化学成分控制良好,几何尺寸精度高,力学性能优良,表面质量好。 展开更多
关键词 顶管机组 油管 J55 N80Ⅰ 技术难点 工艺技术措施 生产效果
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TMS320F2812定点DSP芯片的.cmd文件配置 被引量:2
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作者 李红 唐明新 +1 位作者 袁爱进 乔毅 《仪器仪表用户》 2004年第5期54-56,共3页
本文针对在TMS32 0F2 81 2定点DSP芯片的开发仿真过程中遇到的链接器对编译器生成的代码与数据分配问题 ,从存储器空间分布着手详细介绍并举例说明 .cmd文件的分配方法。
关键词 DSP TMS320F2812 编译器 存储器 链接器 SECTl0NS PAGE .cmd文件配置
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大直径非调质N80钢级石油套管的研制与开发 被引量:12
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作者 尹人洁 王婀娜 +2 位作者 陈坤 张涛 涂露寒 《钢管》 CAS 2008年第5期35-39,共5页
针对传统的非调质钢管韧性较差的问题,采用在中碳锰钢中添加微合金化元素,并通过控轧控冷等工艺手段,实现析出强化和细化晶粒,从而提高钢管的强度和韧性,使其接近或达到调质钢管的性能水平,以满足大直径非调质石油套管高强度与冲击韧性... 针对传统的非调质钢管韧性较差的问题,采用在中碳锰钢中添加微合金化元素,并通过控轧控冷等工艺手段,实现析出强化和细化晶粒,从而提高钢管的强度和韧性,使其接近或达到调质钢管的性能水平,以满足大直径非调质石油套管高强度与冲击韧性相匹配的要求。 展开更多
关键词 无缝钢管 石油套管 N80钢级 非调质钢管 微合金化 控轧控冷
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SEW N80油套管在油田采出液中的SRB腐蚀分量 被引量:4
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作者 毕宗岳 赵俊 赵晶 《腐蚀与防护》 CAS 北大核心 2014年第1期10-13,17,共5页
以长庆油田庆二联采出液为试验溶液,从中分离培养出硫酸盐还原菌(SRB),研究了SEWN80油套管的SRB腐蚀分量。结果表明,长庆油田某井采出液中SRB为103个/mL,生长周期为6~7d,生长峰值在第3天,身长大约2.5μm,呈棒状、无端生鞭毛... 以长庆油田庆二联采出液为试验溶液,从中分离培养出硫酸盐还原菌(SRB),研究了SEWN80油套管的SRB腐蚀分量。结果表明,长庆油田某井采出液中SRB为103个/mL,生长周期为6~7d,生长峰值在第3天,身长大约2.5μm,呈棒状、无端生鞭毛。SEWN80管在该采出液中由SRB引起的腐蚀速率占总的腐蚀速率百分比为4.99%,对总腐弛速率有一定的贡献,但贡献值不大。母材与焊缝耐蚀性能相当,试样表面呈现局部腐蚀,腐蚀产物以铁的氧化物为主。 展开更多
关键词 SEW N80油套管 SRB腐蚀 腐蚀分量
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INSTRUCTI0NS FOR AUTHORS
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《Numerical Mathematics A Journal of Chinese Universities(English Series)》 SCIE 2005年第4期F0003-F0003,共1页
Numerical Mathematics: A Journal of Chinese Universities (Englisn Serles) publlisnes mgn quality papers on the theory and applications in the field of numerical analysis, scientific computing and mathematical modeling... Numerical Mathematics: A Journal of Chinese Universities (Englisn Serles) publlisnes mgn quality papers on the theory and applications in the field of numerical analysis, scientific computing and mathematical modeling. All contributions must be original research papers or invited surveys of expository nature, of very high quality. 展开更多
关键词 WILL INSTRUCTI0NS FOR AUTHORS NS
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NSO细胞DNA首批国家标准品的建立 被引量:1
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作者 武刚 付志浩 +2 位作者 崔永霏 张荣建 王兰 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期389-395,共7页
目的建立小鼠骨髓瘤NSO细胞DNA含量测定国家标准品。方法使用QIAGEN基因组DNA纯化试剂以及Genomictip 500/G制备了NSO细胞DNA作为标准物质原料。通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳进行纯度和含量测定,每支100μL分装于螺口冻存管。组... 目的建立小鼠骨髓瘤NSO细胞DNA含量测定国家标准品。方法使用QIAGEN基因组DNA纯化试剂以及Genomictip 500/G制备了NSO细胞DNA作为标准物质原料。通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳进行纯度和含量测定,每支100μL分装于螺口冻存管。组织5个独立实验室应用紫外分光光度法对我国第一批NSO DNA国家标准品进行协作标定,并评价DNA标准物质的稳定性与适用性。结果所制备的NSO细胞DNA标准品经检测,A260/A280均在1.7~1.9之间,电泳图谱条带单一,纯度符合要求。该DNA标准品经5家实验室协作标定共90次,几何平均含量为87.5μg·mL^-1,平均含量的95%可信区间为86.6~88.5μg·mL^-1。短期稳定性实验表明,该标准品在4℃条件下放置4个月,DNA标准品浓度测定值及/1260/无显著性差异;-20、-70℃贮存1年的长期稳定性结果显示,标准品DNA浓度测定值及A260/A280无显著性差异,电泳条带单一,因此该标准物质应在-20℃条件以下长期保存。在标准品适用性研究中,利用该标准品进行定量PCR法测定,在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1之间线性良好,标准曲线r^2值>0.999。结论该批NSO DNA国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品用于定量PCR法检测NS0细胞DNA残留量,DNA标准品含量赋值为87.5μg·mL^-1,批号为330002-201701。 展开更多
关键词 ns0细胞DNA 国家标准品 DNA残留量 实时定量聚合酶链式反应法
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商品打假新模式——产品电子代码 被引量:2
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作者 田晓芳 《计算机与信息技术》 2005年第11期62-64,共3页
在市场经济迅速发展的同时,假冒伪劣商品层出不穷。为了保障商家和消费者的利益,打假变得至关重要。本文阐述了 EPC 系统的基本组成,介绍了其实现商品防伪的具体方法,分析了 EPC 实现商品防伪的优势,得出 EPC 技术有效的避免了产品被假... 在市场经济迅速发展的同时,假冒伪劣商品层出不穷。为了保障商家和消费者的利益,打假变得至关重要。本文阐述了 EPC 系统的基本组成,介绍了其实现商品防伪的具体方法,分析了 EPC 实现商品防伪的优势,得出 EPC 技术有效的避免了产品被假冒的结论。 展开更多
关键词 EPC 0NS PML RFID
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BOUNDARY SOLUTIONS OF OPERATOR EQUATIONS IN PARIAL ORDERING SETS WITH APPLICATIONS TO SYSTEMS OF FUNCTIONAL
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作者 ZHAO Zengqin XIE Shuheng(Department of Mathematics, Qufu Normal University, Qufu 273165, China) 《Systems Science and Mathematical Sciences》 SCIE EI CSCD 1998年第1期9-17,共9页
In this papert we study the existence of solutions and boundary solutions tothe following system of operator equations in partial ordering sets.We do not assume any topological structure or algebraic structure on the ... In this papert we study the existence of solutions and boundary solutions tothe following system of operator equations in partial ordering sets.We do not assume any topological structure or algebraic structure on the partial orderingsets. The quasi-order completeness of the ranges on Akik, Bkjk (ik = 1, 2,... mk,jk =1, 2,’’’ nk) is the main condition in the theorems. We discuss the quasi-order completesets in some concrete spaces. As corollaries, we obtain some new coupled fixed point resultsfor mixed monotone operators. Lastly the conclusions are applied to a system of functionalequations arising in dyntaic programming. 展开更多
关键词 PARTIAL ORDERING SET system of OPERATOR equati0ns BOUNDARY solution.
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