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定量PCR-Taqman探针法检测NS0宿主细胞残留DNA的方法学验证
被引量:
1
1
作者
武刚
付志浩
+4 位作者
杨志行
崔永霏
张荣建
宗伟英
王兰
《中国药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第24期2001-2009,共9页
目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行...
目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1内,线性良好(r2> 0. 99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL^-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L^-1;精密度良好(RSD≤30%);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。
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关键词
ns0
dna
标准品
ns0
宿主细胞
dna
残留检测
PCR-Taqman探针法
方法验证
原文传递
生物制品中宿主细胞残留DNA检测的研究进展
被引量:
1
2
作者
闫璐瑶(综述)
张家友
杨晓明(审校)
《国际生物制品学杂志》
CAS
2021年第3期170-174,共5页
宿主细胞残留DNA是指可能出现于生物制品中的来自宿主细胞的DNA片段。用传代细胞株生产的生物制品,其宿主细胞残留DNA可能会传递肿瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性。各国药品监督管理机构对宿主细胞DNA的残留量有着严格的限度控制,...
宿主细胞残留DNA是指可能出现于生物制品中的来自宿主细胞的DNA片段。用传代细胞株生产的生物制品,其宿主细胞残留DNA可能会传递肿瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性。各国药品监督管理机构对宿主细胞DNA的残留量有着严格的限度控制,同时各国药典也提供数种经典的检测方法。建立合适的宿主细胞残留DNA检测方法有助于监测生产工艺,确保生物制品的安全性和质量。此文对宿主细胞残留DNA潜在的危害、国内外监管机构对宿主细胞残留DNA检测标准和检测方法以及各方法的特点及研究进展做一综述。
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关键词
生物制品
宿主细胞残留
dna
检测方法
原文传递
题名
定量PCR-Taqman探针法检测NS0宿主细胞残留DNA的方法学验证
被引量:
1
1
作者
武刚
付志浩
杨志行
崔永霏
张荣建
宗伟英
王兰
机构
中国食品药品检定研究院
中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康创新中心
出处
《中国药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第24期2001-2009,共9页
基金
国家“重大新药创制”科技重大专项项目资助(2018ZX09736008)
中国医学医科院-中央级公益性科研院所基本科研业务费专项课题项目资助(2017PT31041)
文摘
目的NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL^-1~300 pg·μL^-1内,线性良好(r2> 0. 99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL^-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L^-1;精密度良好(RSD≤30%);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%~130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。
关键词
ns0
dna
标准品
ns0
宿主细胞
dna
残留检测
PCR-Taqman探针法
方法验证
Keywords
ns0
dna
standard product
ns0 host cell dna residue detection
PCR-Taqman probe method,PCR-Taqman probe
method validation
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
原文传递
题名
生物制品中宿主细胞残留DNA检测的研究进展
被引量:
1
2
作者
闫璐瑶(综述)
张家友
杨晓明(审校)
机构
武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究二室
国家联合疫苗工程技术研究中心
中国生物技术股份有限公司
出处
《国际生物制品学杂志》
CAS
2021年第3期170-174,共5页
基金
湖北省重点研究发展计划(2020DCC002)。
文摘
宿主细胞残留DNA是指可能出现于生物制品中的来自宿主细胞的DNA片段。用传代细胞株生产的生物制品,其宿主细胞残留DNA可能会传递肿瘤或病毒相关基因,存在潜在的危险性。各国药品监督管理机构对宿主细胞DNA的残留量有着严格的限度控制,同时各国药典也提供数种经典的检测方法。建立合适的宿主细胞残留DNA检测方法有助于监测生产工艺,确保生物制品的安全性和质量。此文对宿主细胞残留DNA潜在的危害、国内外监管机构对宿主细胞残留DNA检测标准和检测方法以及各方法的特点及研究进展做一综述。
关键词
生物制品
宿主细胞残留
dna
检测方法
Keywords
Biological products
host
cell
residual
dna
detection
method
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
定量PCR-Taqman探针法检测NS0宿主细胞残留DNA的方法学验证
武刚
付志浩
杨志行
崔永霏
张荣建
宗伟英
王兰
《中国药学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
原文传递
2
生物制品中宿主细胞残留DNA检测的研究进展
闫璐瑶(综述)
张家友
杨晓明(审校)
《国际生物制品学杂志》
CAS
2021
1
原文传递
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