蓝舌病病毒NS1蛋白的截短表达、纯化及其多克隆抗体制备

本研究通过对蓝舌病病毒1型(BTV1)的NS1基因进行抗原性分析,选取其中抗原指数较高的片段(1~960 bp),利用RT-PCR扩增获得NS1截短基因序列,插入原核表达载体pET-30a中构建重组表达质粒pET-NS1-320aa,将该重组质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达并进行可溶性分析,利用SDS-PAGE对截短NS1蛋白的表达进行检测,发现重组NS1蛋白主要以包涵体的形式存在于菌体中。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的NS1蛋白;将其免疫新西兰大白兔制备的抗NS1多克隆抗体不仅可与重组表达的截短NS1蛋白反应,而且可与BTV1感染细胞中的天然NS1蛋白发生特异性反应;免疫荧光实验发现在BTV1感染的BHK-21细胞中检测到了NS1蛋白的特异表达,且分布于细胞质中。本研究成功表达了BTV重组NS1截短蛋白并制备了相应的特异性抗体,为研究NS1蛋白的特性和功能奠定了基础。