丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。

丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。