猪瘟病毒石门株NS4A基因的克隆、测序及分析

采用RT-PCR技术，利用一对引物，从感染猪血中成功扩增了猪瘟病毒强毒石门株NS4A基因，片段大小为757bp，与预期大小一致。克隆后经酶切鉴定，自动化测序。序列比较表明，该基因为最保守的基因之一，其中石门株序列与ALD，GPE，HCLV及Brescia株均有很高的同源性，由其推导的氨基酸的同源性高达100％。仅与Alfort株的同源性消低。对石门株序列与同属的BVDVSD－1株和NADL株序列进行了比较。

ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用

目的:构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒,并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响。方法:将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A),Western blot检测其表达。用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响。结果:成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒,并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。结论:HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录。