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基因表达谱芯片技术筛选NS5A-TP4蛋白反式调节基因
被引量:
4
1
作者
杨倩
成军
+3 位作者
刘妍
王建军
洪源
张树林
《世界华人消化杂志》
CAS
2004年第2期311-314,共4页
目的:对新基因NS5A-TP4转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析我室通过抑制性消减杂交技术筛选得到的新基因NS5A-TP4的全长编码序列...
目的:对新基因NS5A-TP4转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析我室通过抑制性消减杂交技术筛选得到的新基因NS5A-TP4的全长编码序列,并NS5A-TP4构建基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5A-YP4.应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A-TP4转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测.结果:确定基因NS5A-TP4由762nt组成,编码253aa的蛋白.基因表达谱芯片所检测的1152条目的基因均为GenBank中登录的基因,NS5A-TP4表达质粒转染的细胞有18条差异表达基因,其中12条基因表达增强,6条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、生长调节密切相关.结论:基因表达谱芯片技术可为初步探索新基因的功能提供重要的资料.本实验结果为进一步阐明NS5A-TP4生物学功能及HCV-NS5A的致病机制提供了理论依据.
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关键词
基因表达谱芯片
ns5a-tp4
蛋白
反式调节基因
生物信息学
下载PDF
职称材料
应用抑制性消减杂交技术克隆NS5A-TP4反式激活基因
被引量:
2
2
作者
杨倩
成军
+6 位作者
刘妍
王建军
洪源
党晓燕
纪冬
王春花
张树林
《中西医结合肝病杂志》
CAS
2003年第6期343-345,共3页
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建人类新基因NS5A-TP4反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆NS5A-TP4反式激活相关基因,了解该基因的可能生物学功能。方法:以NS5A-TP4表达质粒pcDNA3.1(-)-TP4转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-...
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建人类新基因NS5A-TP4反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆NS5A-TP4反式激活相关基因,了解该基因的可能生物学功能。方法:以NS5A-TP4表达质粒pcDNA3.1(-)-TP4转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液,从总RNA中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果:成功构建人类新基因NS5A-TP4反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到63个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200~1000 bp插入片段。挑取含有插入片段的36个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得20种已知功能基因序列和5个未知功能基因。结论:应用SSH技术成功构建了NS5A-TP4反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为阐明NS5A-TP4生物学功能提供理论依据。
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关键词
抑制性消减杂交技术
克隆
ns5a-tp4
反式激活基因
CDNA消减文库
PCR
分子生物学
HCV
下载PDF
职称材料
题名
基因表达谱芯片技术筛选NS5A-TP4蛋白反式调节基因
被引量:
4
1
作者
杨倩
成军
刘妍
王建军
洪源
张树林
机构
中国人民解放军第
西安交通大学第一医院传染科
出处
《世界华人消化杂志》
CAS
2004年第2期311-314,共4页
基金
国家自然科学基金攻关项目
No.C03011402
+7 种基金
No.C30070689军队"九
五"科技攻关项目
No.98D063军队回国留学人员启动基金项目
No.98H038军队"十
五"科技攻关青年基金项目
No.01Q138军队"十
五"科技攻关面上项目
No.01MB135~~
文摘
目的:对新基因NS5A-TP4转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析我室通过抑制性消减杂交技术筛选得到的新基因NS5A-TP4的全长编码序列,并NS5A-TP4构建基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5A-YP4.应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5A-TP4转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测.结果:确定基因NS5A-TP4由762nt组成,编码253aa的蛋白.基因表达谱芯片所检测的1152条目的基因均为GenBank中登录的基因,NS5A-TP4表达质粒转染的细胞有18条差异表达基因,其中12条基因表达增强,6条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、生长调节密切相关.结论:基因表达谱芯片技术可为初步探索新基因的功能提供重要的资料.本实验结果为进一步阐明NS5A-TP4生物学功能及HCV-NS5A的致病机制提供了理论依据.
关键词
基因表达谱芯片
ns5a-tp4
蛋白
反式调节基因
生物信息学
分类号
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
应用抑制性消减杂交技术克隆NS5A-TP4反式激活基因
被引量:
2
2
作者
杨倩
成军
刘妍
王建军
洪源
党晓燕
纪冬
王春花
张树林
机构
中国人民解放军第
出处
《中西医结合肝病杂志》
CAS
2003年第6期343-345,共3页
文摘
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建人类新基因NS5A-TP4反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆NS5A-TP4反式激活相关基因,了解该基因的可能生物学功能。方法:以NS5A-TP4表达质粒pcDNA3.1(-)-TP4转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液,从总RNA中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果:成功构建人类新基因NS5A-TP4反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到63个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200~1000 bp插入片段。挑取含有插入片段的36个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得20种已知功能基因序列和5个未知功能基因。结论:应用SSH技术成功构建了NS5A-TP4反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为阐明NS5A-TP4生物学功能提供理论依据。
关键词
抑制性消减杂交技术
克隆
ns5a-tp4
反式激活基因
CDNA消减文库
PCR
分子生物学
HCV
Keywords
Molecular Biology
ns
5
A.-TP
4
Tra
ns
activation
Suppression Subtractive Hybridization
Clone
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基因表达谱芯片技术筛选NS5A-TP4蛋白反式调节基因
杨倩
成军
刘妍
王建军
洪源
张树林
《世界华人消化杂志》
CAS
2004
4
下载PDF
职称材料
2
应用抑制性消减杂交技术克隆NS5A-TP4反式激活基因
杨倩
成军
刘妍
王建军
洪源
党晓燕
纪冬
王春花
张树林
《中西医结合肝病杂志》
CAS
2003
2
下载PDF
职称材料
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