小鼠和大鼠NS5ATP4同源基因序列的生物信息学分析

目的:克隆、鉴定、分析小鼠和大鼠NS5ATP4基因序列, 确定编码产物序列,并对于其与人的NSSATP4基因及其编码产物的序列的同源性进行分析. 方法:利用基因芯片技术获得了人NS5ATP4的cDNA序列,利用生物信息学技术确定小鼠、大鼠的NS5ATP4的基因及其编码产物的序列,并对于其同源性进行生物信息学分析. 结果:利用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4 的基因及其编码产物的序列,小鼠和大鼠的NS5ATP4编码基因区分别由762和756个核苷酸(nt)组成.编码产物分别由263和261个氨基酸残基(aa)组成.与人NS5ATP4基因和蛋白质一级结构序列的同源性分别为90.29%,84.25%和95.65%,86.96%. 结论:应用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4 的基因及编码产物的序列.

新基因NS5ATP4表达产物下调细胞周期素B2基因表达的研究

目的探讨新基因NS5ATP4表达产物对细胞周期素B2(cyclinB2)基因启动子转录的调节作用。方法根据文献确定细胞周期素B2的启动子区域,聚合酶链反应(PCR)扩增细胞周期素基因因启动子(B2p),克隆至真核报告基因表达载体pCAT3Basic中,构建pCAT3cyclinB2p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性并与pcDNA3.1()NS5ATP4共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果成功获得细胞周期素B2启动子的正确克隆。pCAT3cyclinB2p和pcDNA3.1()NS5ATP4共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3Basic空载体的10倍,pCAT3cyclinB2p的0.14倍。结论本文克隆的细胞周期素B2启动子有顺式调节下游基因表达的活性,NS5ATP4对细胞周期素B2基因的转录具有下调作用。

丙型肝炎病毒非结构基因5A反式激活基因4A结合蛋白基因的筛选

目的 筛选并克隆HCV非结构基因NS5A反式激活基因4剪切体NS5ATP4A的结合蛋白基因，为研究NS5ATP4A的生物学功能提供线索。方法 构建HCV NS5ATP4A蛋白诱饵酵母质粒，转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合，在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。选择既能在4重营养缺陷培养基（SD／-Trp／-Leu／-Ade／-His）上生长，又能在涂有X-α-半乳糖的四缺培养平皿上生长的蓝色菌落，提取此酵母克隆的质粒，转化大肠杆菌后进行测序，并进行生物信息学分析。结果 筛选出7个基因，其中已知功能基因6个，未知功能基因1个，这些基因与RNA合成、蛋白质翻译、细胞周期及肿瘤免疫有关。结论HCV NS5ATP4A结合蛋白基因的成功筛选，提示了HCV NS5ATP4A新的信号转导途径，为HCV致病机制的进一步研究提供了依据。