酵母双杂交技术筛选与克隆白细胞中与NS5ATP7蛋白结合的蛋白编码基因

目的 应用酵母双杂交体系寻找与丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 5A反式激活蛋白 7(humangene 5transactivatedbynonstructuralprotein 5AofhepatitisCvirus ,NS5ATP7)相互作用的白细胞蛋白 ,以探讨SN5ATP7的生物功能。方法 应用酵母双杂交系统 3 ,构建NS5ATP7诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9,与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合 ,于涂有X_α_gal营养缺陷型培养基 (SD/_Trp_Leu_His_Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆 ,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序 ,然后进行生物信息学分析。结果 筛选出 15个与NS5ATP7特异性相互作用的克隆 ,其中包括人类RhoGDP分裂抑制剂α、人类细胞色素b5 5 8α亚单位、人类MLL(MLL)基因外显子、人类S10 0钙结合蛋白A9(钙粒蛋白B)、人类移动抑制因子相关蛋白 14变体E(S10 0A9)、人类金属硫蛋白 2A、人类染色体序列及人类cDNA序列等 ,1个是未知功能基因。结论 初步克隆了NS5ATP7与白细胞结合蛋白基因 ,根据所克隆到的基因 ,对以后研究NS5ATP7的功能有一定的提示作用 ;